一种同时测定人血浆中多种局部麻醉药物浓度的方法技术

本发明专利技术属医学检验领域，涉及一种可同时测定人血浆中多种局部麻醉药物浓度的方法。本方法采用血浆胆碱酯酶抑制剂抑制在３℃以下冰浴条件抑制血浆胆碱酯酶活性，控制丁卡因水解，保证了方法的准确度；利用利多卡因、罗哌卡因和布比卡因，普鲁卡因和丁卡因分别在在２１０和２９０ｎｍ下有较强紫外吸收的特征，经酸性流动相在色谱柱分离后，用紫外双波长法检测，该法能使上述局部麻醉药物同时测定的灵敏度大为提高。本法样品取样少，预处理简单、快速、灵敏，无需昂贵的设备和试剂，分析周期短，成本低，适合多种药物临床常规血药浓度的监测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属医学检验领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种同 时测定人血浆中多种局部麻醉药物浓度的方法。
技术介绍
普鲁卡因(PR0)、利多卡因(LID)、罗哌卡因(R0P)、 丁卡因(TET)和布 比卡因(BUP)是目前临床上常用的局部麻醉药物。其中ROP与BUP属于起效慢 但作用时间长的长效局部麻醉药物，而PR0、 TET、 LID属于起效快但作用时间 短的短效局部麻醉药物。临床上常合并使用长效和短效局部麻醉药物以便于手术 顺利实施。PR0、 LID、 R0P、 TET和BUP五种药物的药动学个体间差异大、合并 用药普遍、肝肾功能异常会导致药物血浆浓度和药效变化，以及药动学特性与药 物的中枢神经系统毒性和心脏毒性直接相关，因此通过检测血浆中上述药物的浓 度来调整给药剂量，对保证用药的安全和有效有重要意义。TET易被血浆中胆碱酯酶水解，提高TET在分析过程中的稳定性是保证其血 浆浓度测定方法准确度的关键，也是建立同时测定人血浆中PR0、 LID、 R0P、 TET 和BUP五种局部麻醉药物浓度的分析方法的关键。迄今，国内外未见同时测定上 述五种药物的相关分析方法的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服已有技术的缺陷，提供一种测定人血浆中多种局部麻醉 药物浓度的方法。尤其涉及一种简便、快速、灵敏、可同时测定人体普鲁卡因 (PR0)、利多卡因(LID)、罗哌卡因(R0P)、 丁卡因(TET)和布比卡因(BUP) 血药浓度的方法。本方法无需昂贵的设备和试剂，具有操作简便、快速、血浆用量少、成本 低等优点，适合常规血药浓度监测。本方法通过下述技术方案实现待测样品预处理后，经酸性流动相在色谱柱分离，用紫外检测器检测。 本方法包括下述步骤1) 样品预处理取待测样品，加入血浆胆碱酯酶抑制剂新斯的明抑制样品水解，经氢氧 化钠溶液或氢氧化钾溶液碱化，加入定量的有机溶媒，上述操作均在3'C以 下冰浴条件下进行；进行常温萃取、离心后，取上层有机溶液氮气吹干、流 动相复溶，取上清液进样；所述的新斯的明溶液为0.5 2mg/tnL，氢氧化钠或氢氧化钾溶液为 0.5 2mol/L，所述的有机溶媒优选乙醚溶液；2) 样品分离采用通用型的液相色谱柱，其填料为Kromasil Ci8，高效液相系统采用 通用型高压泵和进样器，采用30mmol/L的磷酸二氢钾水溶液(含0. 14~0.18% 三乙胺溶液，磷酸溶液调pH=4.8~5. l)和乙腈的混合液作为流动相，等度洗 脱；所述的磷酸二氢钾水溶液乙腈为63士2: 37±2，优选磷酸二氢钾水溶 液乙腈为63: 37， V/V;3) 样品检测采用通用型紫外检测器210 ± 1 nm检测LID、 ROP和BUP的峰面积， 290 ± 1 nm检测PRO和TET的峰面积，用标准曲线方程换算成浓度。 本方法具有以下优点1. 同时测定只需一种方法即可测定人血浆中PR0、 LID、 R0P、 TET和BUP浓 度，降低了分析成本，简化了分析步骤，减少了血浆采集量，大大提高了以 上五种药物临床血药浓度检测的效率。2. 采样量少测定一份样品只需0.5 ml血浆样本；3. 预处理简便样品碱化后乙醚萃取，简便易行，适用于常规检测；4. 灵敏度高通过双波长检测，明显提高同时测定的检测灵敏度，PRO、 LID、 R0P、 TET和BUP的最低定量限均为0. 05叫/mL;5. 选择性强内源性物质、常用麻醉和镇痛药物以及常用抗生素药物等对测定 不干扰。6. 测定时间短整个色谱分析测定过程为13 min。本专利技术方法快速准确、操作简便、灵敏度高、成本低，适合临床常规监测。 所述PRO、 LID、 ROP、 TET和BUP测定的线性良好，浓度范围均为0. 05 5网/mL， 方法回收率稳定，日内和日间的精密度(相对标准差，RSD)均小于12 %。附图说明图1:典型色谱图未服用PRO、 LID、 ROP、 TET和BUP受试者的空白血浆，其 中，A:210nm; B: 290nm。图2:典型色谱图空白血浆添加PRO、 LID、 ROP、 TET和BUP标准品(PRO、 LID、ROP、 TET和BUP的浓度均为0. 05 |ng/mL)其中，A:210nm; B: 290nm。图3:使用PRO和BUP受试者的色谱图，其中，A:210nm; B: 290nm。图4:使用TET和ROP受试者的色谱图，其中，A:210nm; B: 290nm。图5:使用LID和ROP受试者的色谱图，其中，A:210nm; B: 290咖，其中，1: LID， 2: ROP， 3: BUP, 4: PRO， 5: TET， 6:内标(卡马西平)。具体实施方式 实施例1色谱条件Waters 2690 HPLC系统，Waters 2487双波长紫外检测器，Millennium32 色谱工作站(Version 4.0);色谱柱Kromasil Cl8 (250 mm X 4. 6 mm, 5 nm); 柱温40°C;流动相30mmol/L磷酸二氢钾水溶液(含0. 14%三乙胺溶液，磷酸 溶液调pF^4.8):乙腈(61: 39， V/V);流速l.O mL min-'; 210 nm测定LID、 ROP和BUP的浓度，290 nm测定PRO和TET的浓度。血浆样品预处理取0.5mL血样分别加入0.5rng/mL新斯的明溶液50pl、 5网/mL内标溶液 lOOpl和0. 5mol/L KaOH溶液lOOuL，涡旋10Sec，混匀，加入乙醚3mL，上述 操作均在3"以下冰浴条件下进行；涡旋2min， 2500gX8min离心，取上清液2. 5 mL于另一试管中，40。C氮气流吹干，残留物加入lOOpL 50%甲醇/水溶解，涡旋 10Sec， 12000gX8min离心，分取上清液30 pL进行，内标法以峰面积定量。专属性取不同来源的10名未服用PR0、 LID、 R0P、 TET和BUP的受试者的空白血 浆，按照上述样品预处理和测定方法进行测定，未发现血浆内源性物质对上述测 定组分有干扰。此外，常见合并用药地西泮、咪唑安定、芬太尼、曲马多、ti引哚 美辛、阿司匹林、对乙酰氨基酚、头孢唑啉、头孢替安、头孢呋辛钠、更昔洛韦、 喷昔洛韦、利巴韦林、阿替洛尔、美托洛尔、普萘洛尔等对测定没有干扰。PR0、 LID、 R0P、 TET、 BUP和内标的典型色谱保留时间分别为3.5、 5.6、 6.3、 8.1、 9.0、 11.1 min，整个色谱分析过程时间为13 min。线性试验精密称取PR0、 LID、 R0P、 TET和BUP标准物质适量，用50%甲醇溶解，稀 释成系列工作液，再加入适量空白人血浆，配制成含PR0、 LID、 R0P、 TET和BUP 血浆浓度分别为0. 05, 0. 1, 0. 25， 1， 2. 5和5Pg/mL的标准血样。取血浆0. 5mL, 按"血浆样品预处理"方法操作。内标法以待测组分与内标的峰面积比(/0和 待测组分浓度(C)作加权(l/0线性回归，线性范围均为0.05 5化/mL，最低 定量限均为0. 05Pg/mL, PR0、 LID、 R0P、 TET和BUP的标准曲线回归方程分别为 PRO力-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时测定人血浆中多种局部麻醉药物浓度的方法，其特征是待测样品预处理后，在酸性流动相下，经色谱柱分离后，用紫外检测器检测，包括以下步骤：　１）样品预处理　取待测样品，在３℃以下冰浴条件下，加入血浆胆碱酯酶抑制剂抑制样品水解，经氢氧化钠或氢氧化钾碱化，加入定量的有机溶媒；常温萃取、离心后，取上层有机溶液氮气吹干、流动相复溶，取上清液进样；　２）样品分离　采用通用型的液相色谱柱，其填料为Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ，柱温：４０℃；高效液相系统采用通用型高压泵和进样器，采用磷酸二氢钾水溶液和乙腈的混合液作为流动相，等度洗脱；所述磷酸二氢钾水溶液：乙腈为６３±２∶３７±２，Ｖ／Ｖ；　３）双波长检测样品　采用通用型紫外检测器：波长２１０±１ｎｍ检测ＬＩＤ、ＲＯＰ和ＢＵＰ的峰面积，波长２９０±１ｎｍ检测ＰＲＯ和ＴＥＴ的峰面积，用标准曲线方程换算成浓度。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：覃韦苇，焦正，钟明康，施孝金，李中东，崔学艳，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]