Wnt蛋白及癌症的检测与治疗制造技术

本说明书除其它内容之外特别提供了使用Ｗｎｔ和ＦＺＤ蛋白、基因、ＦＺＤ和Ｗｎｔ特异性抗体和探针诊断和治疗癌症、以及筛选测试化合物治疗癌症的能力的方法。还公开了用于治疗癌症，如肝癌的化合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肝癌的检测与治疗。
技术介绍
肝细胞癌(HCC)是肝脏主要的原发性恶性肿瘤。虽然已经鉴定 了病毒病原学因素，但是肝癌形成期间导致胂瘤发展的分子机制在很 大程度上仍然未知。蛋白的Frizzled家族由IO个或更多个七跨膜蛋白 组成，这些蛋白起Wnt蛋白受体的作用。Wnt/Frizzled信号传导网络影 响多种生物学过程，其范围从细胞命运决定到细胞迁移和增殖。卩-联蛋白是在细胞-细胞粘着中发挥作用的多因子蛋白，其参 与增强4丐粘着蛋白及a-联蛋白与肌动蛋白细胞骨架的连接。当缺乏 Wnt/Frizzled信号传导时，卩-联蛋白通过与糖原合酶激酶(GSK )-3(3的相互作用被磷酸化，并形成与轴蛋白和腺瘤性结肠息肉蛋白 (adenomatous polyposis coli protein, APC )的复合物。随后，卩 - 联蛋 白被靶向来由泛蛋白蛋白酶体系统降解。相反，Wnt配体与其Frizzled 受体的结合通过抑制GSK - 3卩酶促活性稳定细胞内的p -联蛋白。然 后，(3 —联蛋白易位到纟田月包核中，与高速泳动族(high mobility group )结构域因子，如Tcf/Lef联合。该复合物与生长调节及细胞迁移相关基因的转录上调有关。 专利技术概述本专利技术部分基于下述发现，即Wnt3、 8b和11是Frizzled 7的配体， 其通常在HCC中，例如在乙肝病毒(HBV)相关的HCC中在mRNA 和蛋白水平过度表达。过度表达Frizzled 7的肝癌细胞显示出细胞移动 性和迁移增强。过度表达似乎为肝细胞转化的多步过程中的早期事件， 因此，Frizzled 7及Wnt 3 、 8b和11是肝癌治疗中新的分子靶标。因此，在一方面，本专利技术纟是供了鉴定抗癌剂的方法。该方法包4舌 择选与包含Wnt 3 、 Wnt 8b或Wnt 11蛋白的氨基酸序列或其FZD结合 片段的多肽结合的测试化合物，和任选的测定测试化合物是否能够(i ) 降低细胞中Wnt/FZD7信号传导，U)降低肝癌细胞移动性，(iii)降 低肝癌细胞中卩-联蛋白的积聚；或(iv)在体外或体内治疗肝癌；其 中能够达到(i)到(iv)中至少一项的测试化合物是抗癌剂。在一些 实施例中，选择测试化合物可以包括提供包含Wnt 3 、 Wnt 8b或Wnt 11 蛋白的氨基酸序列或其i《D结合片段的多肽，将所述多肽与测试化合 物接触，检测所述多肽与测试化合物之间的结合；和如果所述测试化 合物和多肽结合，选择所述测试化合物。与测试化合物结合的多肽可 以是(i)天然存在的多肽，(ii)重组多肽，(iii)在细胞表面表达的多 肽，或(iv)分离的多肽。当多肽包含Wnt3蛋白的氨基酸序列时，所 述多肽可以包含SEQ II〕 NO:8到12中的任一序列。当所述多肽包含 Wnt 8b蛋白的氨基酸序列时，所述多肽可以包括SEQ ID NO:5到19 中任一序列。当多肽包含Wnt 11蛋白的氨基酸序列时，所述多肽可以 包含SEQ ID NO:22到26中任一序列。在某些实施例中，所述多肽包 含SEQ ID:7到27中任一序列以及至少一个非Wnt序列。测试化合物 可以选自下组多肽、核糖核酸、小分子(如小有机分子)和脱氧核 糖核酸。通过本文所述的鉴定癌症试剂的方法鉴定的抗癌剂包括，但不限 于，抗Wnt抗体，如单克隆抗体，FZD7受体，FZD7受体的Wnt结合片段和其它结合Wnt的化合物。通过这些方法鉴定的抗癌剂可以^^用于治疗癌症，例如肝癌。此外，通过这些方法鉴定的抗癌剂可以一皮用 于制备用以治疗肝癌或降低患者中肝癌细胞移动'性的药物。另一方面，本专利技术包括鉴定候选抗癌剂的方法。该方法包括(a) 提供第一多肽，所述第一多肽(i)含有FZD多肽(如FZD 7多肽)或 其片段；和(ii)显示与Wnt (如Wnt3、 8b或11)结合的能力；(b) 提供第二多肽，所述第二多肽(i)含有Wnt多肽(如Wnt3、 8b或11 多肽)或其片段；和(ii)显示与FZD (如FZD7)结合的能力；(c) 在存在测试化合物的条件下使第一和第二多肽接触；和(d)比较存在 测试化合物时第 一与第二多肽的结合水平和不存在测试化合物时的结 合水平，其中存在测试化合物时与不存在时相比结合水平下降表明测 试化合物是候选的抗癌剂。该方法可以进一步包括(e)确定候选抗 癌剂是否能够(i)降低细胞中Wnt/FZD 7信号传导；(ii )降低癌细 胞移动性；(iii)降低癌细胞中p-联蛋白的积聚；或(iv)在体外或 体内治疗癌症；其中能够达到(i)至(iv)中至少一项的候选物是抗 癌剂。所述测试化合物可以选自下组多肽、核糖核酸、小分子(如 小有机分子)和脱氧核糖核酸。Wnt多肽可以包括，如SEQ II) NO:8 到12, 15到19和/或22到26。 FZD多肽可以包括，如S1:Q II) N():l， 2 和/或3。在某些实施例中，第一多肽是包含FZX)多肽(如FZD7多肽)的 第一融合蛋白，所述FZD多肽与(i )转录因子的转录激活结构域或(ii ) 转录因子的DNA结合结构域融合；第二多肽是含有Wnt多肽(如Wnt 3、 8b或11多肽)的第二融合蛋白，所述Wnt多肽与(i)转录因子的 转录激活结构域或(ii)转录因子的DNA结合结构域融合，其中FZD 多肽与和Wnt多肽融合的结构域不同的结构域融合；并根据转录因子 的重构(reconstitution )检测第 一和第二多肽的结合。通过本专利技术所述方法鉴定的抗癌剂(和/或候选抗癌剂)可以被用 于治疗癌症，例如肝癌。此外，通过本专利技术所述方法鉴定的抗癌剂(和 /或候选抗癌剂)可以被用于制备用以治疗癌症，例如肝癌的药物。另一方面，本专利技术提供了确定细胞(如肝细胞)是否是癌细胞，或者有成为癌细胞的风险的方法。该方法包括(a)提供测试细胞(如肝细胞)；(b )确定与对照细胞相比，是否该细胞的FZD 7和/或Wnt 3 表达水平较高，和/或FZD 8和/或Wm 11表达水平较4氐；和(c )如果 与对照细胞相比，测试细胞的FZD 7和/或Wnt 3表达水平较高，和/ 或测试细胞的FZD 8和/或Wnt 11表达水平较低，则将测试细胞分类为 (i)癌细胞或(ii)有成为癌细胞的风险。当该方法包括确定细胞的 FZD 7和/或Wnt 3表达水平时，该方法可以进一步包括(c )确定测 试细胞的FZD 8和/或Wnt 11表达水平是否低于对照细胞，其中更低的 FZD 8和/或Wnt 11表达水平指示测试细胞是癌细胞，或者有成为癌细 胞的风险。当该方法包括确定细胞的FZD 8和/或Wnt 11表达水平时， 该方法可以进一步包括(c )确定测试细胞的FZD 7和/或Wnt 3表达 水平是否高于对照细胞，其中较高的FZD7和/或Wnt3表达水平指示 测试细胞是癌细胞，或者有成为癌细胞的风险。另 一 方面，本专利技术提供确定患者是否患有癌症或有患有癌症的风 险，例如测试的组织样本是否来自患有癌症或冇患有癌症的风险的患 者的方法。该方法可以包括(a)提供从患者获得的测试组织样本(例 如肝脏组织，如胂瘤的或肺瘤周围的肝脏组织)，和(b )确定与AM建 康个体中获得的可本文档来自技高网...

【技术保护点】
鉴定抗癌剂的方法，该方法包括：　选择与多肽结合的测试化合物，所述多肽包含Ｗｎｔ３、Ｗｎｔ８ｂ或Ｗｎｔ１１蛋白的氨基酸序列或其ＦＺＤ结合片段，和　检测测试化合物是否能够：　（ｉ）降低细胞中的Ｗｎｔ／ＦＺＤ７信号传导；　 （ｉｉ）降低肝癌细胞移动性；　（ｉｉｉ）降低肝癌细胞中β－联蛋白的积聚；或　（ｉｖ）在体外或体内治疗肝癌；　其中能够达到（ｉ）到（ｉｖ）中至少一项的测试化合物是抗癌剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰克R万兹，米兰金，
申请(专利权)人：罗德岛医院，终身合伙人，
类型：发明
国别省市：US[美国]