一种硬基质生物芯片的封闭方法技术

本发明专利技术公开了一种硬基质生物芯片的封闭方法，技术方案是：（１）称取柠檬酸三钠２～１２克溶于１００毫升纯化水中，搅拌均匀后，用０．５ｍｏｌ的ＮａＯＨ调ｐＨ至８．０～１２，称取ＢＳＡ０．５～５ｇ加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭液１；（２）称取磷酸氢二钠０．１４２克溶于１００毫升纯化水中，配成溶液Ａ；称取磷酸二氢钾０．１３６克溶于１００毫升纯化水中，配成溶液Ｂ；用溶液Ｂ调溶液Ａ至ｐＨ７．２０，配成溶液Ｃ；（３）量取溶液Ｃ　１００毫升，称取ＢＳＡ　２～１５克，蔗糖１～８克加入溶液Ｃ中，搅拌均匀，配成封闭液２；（４）将硬基质生物芯片浸入封闭液１中，３０～４０摄氏度反应２～５分钟；（５）将硬基质生物芯片从浸入的封闭液１中取出，浸入封闭液２中，２５～３７摄氏度反应１５～３０分钟；（６）将生物芯片取出吹干。通过使用不同ｐＨ，不同蛋白浓度的封闭液进行封闭，达到降低芯片本底，保持生物芯片活性的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于生物芯片

技术介绍
生物芯片技术的出现，使在一个实验中同时平行研究成千上万个基因及基因 产物成为可能。生物芯片技术的优势在于高检测灵敏度，低样本消耗量和高通量 分析。生物芯片技术作为基因表达分析，序列分析，临床诊断，药物发现和药物 筛选的独特方法己经引起了全世界的兴趣。目前，硬质基片形式的生物芯片的制 作，主要是将玻璃片或硅片等硬质基片经表面化学处理后，直接在基片上合成探 针，或者将合成好的探针、抗体、抗原等生物样品点加到基片上，通过化学结合 反应，将生物样品固定在硬质基片上，它的优点在于样品固定牢固，精密度好， 但它的缺点在于经过化学处理的固体表面空白位点难以封闭，造成芯片本底值 高，影响分析灵敏度。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是:提供一种能降低芯片本底，提高分析灵敏度 的硬基质生物芯片的封闭方法。本专利技术的技术方案是(1) 称取柠檬酸三钠2 12克溶于100亳升纯化水中，搅拌均匀后，用 0.5mol/L的NaOH调pH至8.0 12，称取BSA0.5 5g加入溶液中， 搅拌均匀，配成封闭液l;(2) 称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A;称取 磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B;用溶液B 调溶液A至pH7.20，配成溶液C;(3) 量取溶液C 100毫升，称取BSA2 15克，蔗糖1 8克加入溶液C 中，搅拌均匀，配成封闭液2;(4) 将硬基质生物芯片浸入封闭液1中，30 40摄氏度反应2 5分钟；(5) 将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，25 37摄氏度反应15 30分钟；(6) 将生物芯片取出吹干。有益效果本专利技术的硬基质生物芯片的封闭方法，通过使用不同pH，不同 蛋白浓度的封闭液进行封闭，达到降低芯片本底，保持生物芯片活性的效果。高 pH条件时，有利于硬基质表面活化机团与封闭蛋白发生化学结合，但同时会使 目标蛋白失活，因此作用时间要短；中性pH，高蛋白浓度， 一方面中和芯片表 面的pH环境，另一方面给芯片"穿上" 一层蛋白外衣，尽量隔断目标蛋白与空 气结合，保护目标蛋白。 具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术进行详细说明。 实施例1(1) 称取拧檬酸三钠2克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L 的NaOH调pH至8.0，称取BSA0.5克加入溶液中，搅拌均匀，配成 封闭液1;(2) 称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A;称取 磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B;用溶液B 调溶液A至pH7.20，配成溶液C;(3) 量取溶液C100毫升，称取BSA2克，蔗糖1克加入溶液C中，搅拌 均匀，配成封闭液2;(4) 将硬基质生物芯片浸入封闭液l中，30摄氏度反应2分钟；(5) 将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，25摄 氏度反应15分钟；(6) 将芯片取出吹干。 实施例2(1) 称取柠檬酸三钠5克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L 的NaOH调pH至9.0，称取BSA1克加入溶液中，搅拌均勾，配成封 闭液1;(2) 称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A;称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B;用溶液B 调溶液A至pH7.20，配成溶液C;(3) 量取溶液C 100毫升，称取BSA5克，蔗糖2克加入溶液C中，搅拌 均匀，配成封闭液2;(4) 将硬基质生物芯片浸入封闭液l中，35摄氏度反应2分钟；(5) 将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，30摄氏度反应15分钟；(6) 将芯片取出吹干。实施例3(1) 称取柠檬酸三钠8克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L 的NaOH调pH至10.0，称取BSA 2克加入溶液中，搅拌均匀，配成 封闭液l;(2) 称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A;称取 磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B;用溶液B 调溶液A至pH7.20，配成溶液C;(3) 量取溶液C 100毫升，称取BSA 8克，蔗糖4克加入溶液C中，搅拌 均匀，配成封闭液2;(4) 将硬基质生物芯片浸入封闭液1中，40摄氏度反应2分钟；(5) 将硬基质生物芯片从浸入的封闭液l中取出，浸入封闭液2中，37摄 氏度反应15分钟；(6) 将芯片取出吹干。实施例4(1) 称取柠檬酸三钠12克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L 的NaOH调pH至11.0，称取BSA5克加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭 液1;(2) 称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A;称取磷酸 二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B;用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C;(3) 量取溶液C100毫升，称取BSA12克，蔗糖8克加入溶液C中，搅拌均匀，配成封闭液2;(4) 将硬基质生物芯片浸入封闭液1中，30摄氏度反应5分钟；(5) 将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，25摄氏度反应30分钟；(6) 将芯片取出吹干。 实施例5(1) 称取柠檬酸三钠5克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L 的NaOH调pH至12.0,称取BSA 1克加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭 液l;(2) 称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A;称取磷酸 二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液'B;用溶液B调溶液A 至pH7.20，配成溶液C;(3) 量取溶液C100毫升，称取BSA5克，蔗糖2克加入溶液C中，搅拌均 匀，配成封闭液2;(4) 将硬基质生物芯片浸入封闭液1中，35摄氏度反应5分钟；(5) 将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，30摄氏 度反应30分钟；(6) 将芯片取出吹干。 实施例6(1) 称取柠檬酸三钠5克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L 的NaOH调pH至12.0，称取BSA 2克加入溶液中，搅拌均匀，配成封 闭液1;(2) 称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A;称取磷酸 二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B;用溶液B调溶液A 至pH7.20，配成溶液C;(3) 量取溶液C100毫升，称取BSA10克，蔗糖2克加入溶液C中，搅拌均 匀，配成封闭液2;(4) 将硬基质生物芯片浸入封闭液1中，40摄氏度反应5分钟；(5) 将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，35摄氏 度反应30分钟；(6) 将芯片取出吹干。 实施例7(1) 称取柠檬酸三钠5克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L 的NaOH调pH至12.0，称取BSA 5克加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭 液l;(2) 称取磷酸氢二钠0.142克溶于100亳升纯化水中，配成溶液A;称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B;用溶液B调溶液 A至pH7.20，配成溶液C;(3) 量取溶液C 100毫升，称取BSA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硬基质生物芯片的封闭方法，其特征在于，包括如下步骤：　（１）称取柠檬酸三钠２～１２克溶于１００毫升纯化水中，搅拌均匀后，用０．５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ调ｐＨ至８．０～１２，称取ＢＳＡ０．５～５ｇ加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭液１；　 　（２）称取磷酸氢二钠０．１４２克溶于１００毫升纯化水中，配成溶液Ａ；称取磷酸二氢钾０．１３６克溶于１００毫升纯化水中，配成溶液Ｂ；用溶液Ｂ调溶液Ａ至ｐＨ７．２０，配成溶液Ｃ；　（３）量取溶液Ｃ１００毫升，称取ＢＳＡ２～１５克，蔗 糖１～８克加入溶液Ｃ中，搅拌均匀，配成封闭液２；　（４）将硬基质生物芯片浸入封闭液１中，３０～４０摄氏度反应２～５分钟；　（５）将硬基质生物芯片从浸入的封闭液１中取出，浸入封闭液２中，２５～３７摄氏度反应１５～３０分钟；　 （６）将生物芯片取出吹干。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴堂明，潘能科，陆冬雷，张必达，
申请(专利权)人：江苏三联生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]