利用磁场检测样品中的靶分子制造技术

本申请涉及用于检测可疑含有靶物的样品中的靶物的方法。该方法包括将样品和附着于磁性颗粒上的第一结合分子与附着于固体支持物上的第二结合分子接触。所述第一结合分子能够结合第二结合分子，靶物能够干扰这种结合。施加磁力使得磁性颗粒与固体支持物紧密接近。检测出于固体支持物结合的磁性颗粒的数目。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用磁场检测样品中的靶分子本专利技术涉及用于检测样品中的靶物的方法。本专利技术具体的涉及用于检 测靶分子，特别是具有单一表位的靶物的竞争性检测方案，其中溶液中的 靶物与附着于磁性颗粒或者固体表面的分子竞争。卫生健康研究涉及开发用于确定是否存在特殊化合物例如DNA、 RNA、激素、代谢物、药物等的诊断性方法。免疫检测法常常被用于确定出体液中的特异蛋白的量，以便有助于进 一步的诊断和治疗。最熟知的检测理论是夹心检测法。样品液体中的相关 分子被夹裹("夹心化")在生物学活性传感器表面和生物学活性标记 (例如磁性颗粒)之间。因此，夹心检测法要求靶物具有至少两个表位。 但是，更小的分子例如滥用药物通常只具有一个表位，因此不能被常规的 夹心检测法检测到。竞争性或抑制性检测法是检测这些分子的方法。公知的竞争性检测方 案是将相关的靶分子连接到表面之上，并将抗体和检测标记(酶/荧光团/磁 珠)相连接。利用所标记的抗体，该系统被用于实施样品中的靶分子和表 面上的耙分子之间的竞争性检测(见例如GB 2404022A和GB 2404023A )。因为在溶液中的游离靶分子和结合于表面或标记上的靶分子的移动性 (mobility)方面存在着不同，因此竞争并非公平的，剂量效应曲线也不是线 性的。这可能使得难以用这个检测法进行定量测定。此外，结合于表面或 标记的靶物的有限移动性造成了相当缓慢的反应时间。本专利技术的目的是克服这些缺点中的至少一个缺点。5本专利技术的另一个目的是提供用于检测样品中的靶分子的竞争性检测 法，其适用于单室模式实施。发现通过权利要求1所述的方法以及所从属的权利要求书可以满足这 些目的中的至少一个目的。因此，在一个部分，本专利技术涉及用于检测可疑含有靶物的样品中的所 述耙物的方法，包括a) 使得样品以及附着于磁性颗粒的第一结合分子同时或在不同时间与附着于固体支持物的第二结合分子接触，其中所述第一结合分子能结合第二结合分子，并且其中所述靶物能干扰所述的结合；以及施加磁力使得所 述磁性颗粒与固体支持物紧密接近；和b) 通过所述第一结合分子与第二结合分子的结合检测与固体支持物结 合的磁性颗粒的数目。在所述方法的步骤b)中检测到的颗粒数目与样品中的耙物浓度相 关。数目的减少例如与参照值相比的数目减少说明所分析的样品中含有靶 物。参照值可以是已知的数值。或者，参照值可以是在同时或分开进行的 利用不含任何靶物的样品的对照检测法中获得的数值。在另一个部分，本专利技术涉及磁铁用于向附着有第一结合分子的磁性颗 粒应用磁力使得所述颗粒与附着有第二结合分子的固体支持物紧密接近的 用途，其中第一结合分子能够结合第二结合分子，并且其中存在能够干扰 这种结合的靶分子。通过参照下面所述的具体实施方式，本专利技术的这些和其他方面都是显 而易见的。附图说明图1显示了本专利技术的单室竞争性检测方案的示意图，其中目的耙分子 (a)与附着于磁性颗粒的耙分子或靶分子类似物(d)竞争与附着于固体 支持物表面的抗体的结合。图2显示了关于吗啡的竞争性结合检测法的剂量反应曲线，所述检测 法使用磁激动将经抗OPI抗体涂覆的磁珠浓聚到经BSA-OPI涂覆的表面或 没有进行上述浓聚处理。图3显示了经吗啡-HRP和鲁米诺/发光检测到的抗吗啡抗体涂覆金表 面的效率。图4显示了通过MP-吗啡与附着于表面上的抗吗啡抗体的结合所检测到的吗啡所结合的微粒(MP)的功能性。图5显示了竞争性检测法的结果，其中在存在不同量的吗啡的溶液中 检测MP-吗啡与附着于表面的抗吗啡抗体的结合。"靶物"可以其浓度或存在等待确定的任意分子。本专利技术的合适靶物 的实例是分子靶物例如小分子、药物、蛋白、酶、激素、肽和核酸。分子 靶物常常能够确定出更大成分例如细胞、病毒或细胞或病毒的部分、组织 提取物等的浓度和/或存在。特别优选的靶物是那些只具有单一表位的靶物，包括单一表位的小分 子、药物、激素、和肽。特别优选的靶物是成瘾药物。优选作为靶物的成 瘾药物的实例是吗啡。优选作为靶物的其他成瘾药物是可卡因、THC、促 合成药物或苯丙胺/甲基苯丙胺族的药物。靶物可以存在于所分析的样品内 或者可以原位形成，例如在接触步骤期间如通过在该步骤期间发生的反应 形成所述靶物。如果用传感器监测反应，靶物例如可以是反应的原材料或 反应产物。要明白本专利技术的方法所检测的靶物是以竞争方式干扰第一结合分子和 第二结合分子之间的结合的靶物。还要明白可以选择第一和第二结合分 子，使得所检测的靶物可以以竞争方式干扰它们彼此之间的结合。可以用 感受法直接检测反应产物。同样，还可以在检测之前进一步加工处理反应 产物。进一步加工处理的实例是加入材料或者修饰靶物的(生物)化学或 物理性能，以便促进检测。如上所提及的那样，本专利技术的方法包括使得样品以及附着于磁性颗粒 的第一结合分子与附着于固体支持物的第二结合分子接触。在溶液中实施 所述接触。术语"在溶液中"在此表示在液体环境中实施上下文中所指的步骤、 (结合)反应或检测。优选地，液体环境是水性液体环境。所涉及的试剂 不必一定要溶解于液体环境内，也可以是悬浮的或分散的状态。样品以及附着于磁性颗粒的第一结合分子与附着于固体支持物的第二 结合分子的接触可以同时或者在不同的时间发生。例如，可以首先使样品 与固体支持物的第二结合分子接触，此后不久可以加入附着于磁性颗粒上 的第一结合分子。或者，可以首先使附着于磁性颗粒的第一结合分子与结 合于固体支持物的第二结合分子接触，此后不久可以加入样品。在本专利技术的一个特别优选的实施方式中，所述样品和附着于磁性颗粒 的第一结合分子将同时与结合于固体支持物的第二结合分子接触。这一点 可以通过例如混合样品和附着于磁性颗粒的第一结合分子以及随后接触结 合于固体支持物的第二结合分子来实现。或者，可以向结合于固体支持物 的第二结合分子中分开但同时地加入样品和附着于磁性颗粒上的第一结合 分子。本专利技术的方法还包括在步骤a)中施加磁力，使得磁性颗粒与固体支 持物紧密接近。换句话说，颗粒被用力推到固体支持物上。这个磁激动步 骤一般会造成就参与检测的竞争性结合事件的组分的结合而言反应时间縮 短。此外，已经吃惊的发现，在本专利技术的某些实施方式中，可以通过这种 方式影响检测的敏感性。优选地以这种方式在激动步骤期间应用磁力，以 便减少或消除耙物和附着于磁性标记的第一结合分子的移动性差异对结合 的影响。因此，施加磁力将磁性颗粒浓聚于固体支持物例如传感器表面， 以便补偿附着于磁性颗粒上的第一结合分子的降低了的移动性。可以用电磁铁施加磁力。但是，空心线圈或永久磁铁也是合适的。在本专利技术的一个实施方式中，第一结合分子能够选择性地结合样品中 的靶物和第二结合分子。接触步骤还包括允许第二结合分子与靶物竞争与 第一结合分子的所述的选择性结合。合适的第一结合分子的实例是AffibodiesTM、抗体、受体分子、适体和 螯合剂。当耙物是核酸时，第一结合分子包括具有与靶物序列的一部分序列互 补的碱基序列的核酸。特别优选的第一结合分子是特异性结合靶物的抗体。当第一结合分子能够选择性结合样品中的靶物和第二结合分子时，第 二结合分子与靶物相同，或者是靶物类似物。"靶物类似物"在此用于表 示含有至少部分靶物(优选的是使其与其他相关分子区分开的部分)本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测可疑含有靶物的样品中所述靶物的方法，包括：　ａ）使得样品以及附着于磁性颗粒的第一结合分子同时或在不同时间与附着于固体支持物的第二结合分子接触，其中所述第一结合分子能结合第二结合分子，并且其中所述靶物能干扰所述的结合；以及施加磁力使 得所述磁性颗粒与固体支持物紧密接近；和　ｂ）通过所述第一结合分子与第二结合分子的结合检测与固体支持物结合的磁性颗粒的数目。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：T范德维克，EGM佩尔塞斯，J阿马迪奥，
申请(专利权)人：皇家飞利浦电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]