本发明专利技术涉及免疫试剂和免疫方法。概述了免疫分析试剂:该分析试剂是由含有待分析物质抗原或抗体结合生物素形成的缀合物的组合物和含有抗生物素蛋白结合微粒子的组合物构成的,且在上述缀合物中与抗原或抗体结合的生物素量实质上是在没有待分析物质存在的情况下与上述抗生物素蛋白结合微粒子不凝集的量。另外概述了免疫分析方法:该方法是使被检测样品和与待分析物质抗原或抗体结合生物素形成的缀合物(抗原或抗体结合生物素的量实质上是在没有待分析物质存在情况下与上述抗生物素蛋白结合微粒子不凝集的量)以及抗生物素蛋白微粒子接触,检测由待分析物质和缀合物形成的免疫复合物以及抗生物素蛋白微粒子引起的凝集程度的免疫分析方法。上述免疫分析试剂和分析方法不需要使抗体或抗原附载到胶乳粒子上的操作,没有胶乳粒子的自凝发生,可以正确测定待分析物质,获得与通常致敏胶乳法同等或以上的反应性。(*该技术在2021年保护过期,可自由使用*)
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及到。更详细地讲涉及到通过 利用免疫反应的凝集反应的分析试剂和分析方法。本说明书中的上述 r分析J包括对分析物质的量进行定量或半定量的r测定J和判断是 否存在待分析物质的r检测」两个方面。
技术介绍
作为定量分析生物体液微量成分的方法之一,常用利用待分析物 质的抗体或抗原的免疫测定方法。作为该免疫测定手段,可以利用对 抗原抗体反应生成的免疫复合物进行光学测定的免疫比色(比3,) 法和免疫比浊法,以及利用放射性物质或酶作为标记物的放射免疫分 析和酶免疫分析法。近年来为了适应在短时间内可处理多个被检测样 品的自动分析仪器的普及,以及要求更高灵敏度,广泛应用利用被检 测物质与结合抗体(或抗原)的胶乳粒子反应的胶乳凝集法。所谓的 胶乳凝集法是通过检测待分析物质与结合胶乳的抗体(或抗原)反应 生成的胶乳粒子的凝集程度测定待分析物质的方法。作为检测该凝集 程度的方法有目测观察或使光照射反应液,测定散射光或透射光的方 法。光学分析方法可以用于样品中的抗原或抗体的定量。然而,为了实施上述那样的胶乳凝集法,必须使待分析物质的抗 体(或抗原)附载到胶乳粒子上。这样的方法有诸如使抗体(或抗原) 和胶乳粒子混合之后使它们结合的物理吸附法,或使抗体(或抗原) 和胶乳粒子共价结合的化学结合法。无论哪一种方法,其操作都很烦 瑣,是胶乳凝集法存在的问题之一。而胶乳凝集法的最大问题是当象 上述那样将抗体(或抗原)附载到胶乳粒子上时,由于维持胶乳粒子 自身溶液中分散性的电双层的平衡被破坏,所以与抗原抗体反应无 关,胶乳粒子自凝。由此不仅丧失了测定的正确性,而且由于胶乳粒子自身的保存稳定性变成不稳定,随时间变化灵敏度有时高,有时低。另外使待分析物质的抗体(或抗原)附载到胶乳粒子上时,由于抗体(或抗原)吸附胶乳粒子表面,有时使得作为蛋白质的抗体(或抗原)变性了。如果发生这样的变性,由于待分析物质的抗体(或抗原)的反应性发生变化,目的免疫反应不会发生,或发生了目的以外的反应,所以无论出现哪一种情况,都会显著地降低测定结果的可信赖程度。在以往方法中,为了消除上述问题,进行了诸如通过改进胶乳粒子的成分或制造方法使抗体(或抗原)能够容易附栽,抑制自凝的手段等有关方面的各种研究。然而这些研究即便是对胶乳粒子的制造者和供应商有益,但对于接受胶乳粒子供给的人来说也没有参加的余地。虽然想出了使由表面活性剂或多糖类组成的稳定剂在使抗体(或抗原)附载后的胶乳粒子的保存液中共存等办法,但实际情况是没有 达到一举解决上述问题的程度。.本专利技术人为了克服出现在胶乳凝集反应中的上述问题进行了深 入研究,结果开发了使待分析物质的抗体(或抗原)不直接附栽到胶 乳粒子上,而是使胶乳粒子凝集,对其凝集程度进行分析的方法。本专利技术正是源于这样的见解。专利技术的概述在一个实施方案中,本专利技术涉及包括如下(1)和(2)步骤的胶 乳凝集方法(1) 首先使可能含有待分析物质的被检测样品与待分析物质的 抗原或抗体结合了 l分子生物素的缀合物接触,接下来再与结合了抗 生物素蛋白的胶乳粒子接触的步骤;以及(2) 通过检测由待分析物质和缀合物之间形成的免疫复合物以 及抗生物素蛋白结合胶乳粒子引起的凝集程度,分析待分析物质的步 骤。本专利技术涉及到包括(1) 含有待分析物质的抗体或抗原结合了生物素的缀合物的组 合物(以下有时也称之为第1组合物)和(2) 含有结合了抗生物素蛋白的微粒子的组合物(以下有时也 称之为第2组合物),在上述缀合物中抗原或抗体结合的生物素量是在没有待分析物质存在的情况下与上述抗生物素蛋白结合微粒子实 质上没有凝集的量的免疫分析试剂。按照本专利技术的免疫分析试剂的比较理想模式,上述第l组合物中 含有的缀合物是抗原或抗体结合了l分子生物素的缀合物。按照本专利技术的免疫分析试剂的比较理想模式,上述第2组合物中 含有的抗生物素蛋白结合微粒子是结合了抗生物素蛋白的胶乳粒子。另外本专利技术包括如下(1)和(2)步骤的免疫分析方法 (1 )可能含有待分析物质的被检测样品和待分析物质抗原或抗 体结合了生物素的缀合物(其中抗原或抗体结合的生物素量是在没有 待分析物质存在的情况下与上述抗生物素蛋白结合微粒子实质上没 有凝集的量)和结合了抗生物素蛋白微粒子接触的步骤;(2)通过检测待分析物质和缀合物之间形成的免疫复合物以及 抗生物素蛋白结合微粒子引起的凝集程度,分析待分析物质的步骤。按照本专利技术的免疫分析试剂的理想模式,缀合物是抗原或抗体结 合1分子生物素的缀合物。按照本专利技术的免疫分析方法的比较理想模式,最初使可能含有待 分析物质的被检测样品和待分析物质抗原或抗体结合1分子生物素 的缀合物接触,然后继续与抗生物素蛋白结合微粒子接触,或是同时 使可能含有待分析物质的被检测样品和待分析物质抗原或抗体结合1 分子生物素的缀合物、抗生物素蛋白结合微粒子接触。按照本专利技术的免疫分析方法的更理想模式,抗生物素蛋白结合微 粒子是结合了抗生物素蛋白的胶乳粒子。附图的简单说明图l是表示使用实施例1中制备的本专利技术2液体系分析用试剂时 和使用比较例l和2制备的SF抗体致敏胶乳时的吸光度变化量的比 较图。实施专利技术的最好模式本专利技术中使用的第1组合物含有的缀合物是待分析物质抗原或 抗体上结合了特定量生物素的缀合物。在本专利技术中,作为上述缀合物, 使用上述抗原或抗体结合生物素的缀合物,其中结合的生物素量是在5没有待分析物质存在的情况下与上述抗生物素蛋白结合微粒子实质 上没有凝集的量(理想的是l分子生物素)。例如作为上述缀合物,制备待分析物质抗原或抗体上结合了 2分 子生物素的缀合物,如果使该缀合物与抗生物素蛋白结合微粒子共 存,由于即使不存在待分析物质,抗生物素蛋白也可与生物素特异结 合,所以形成以抗生物素蛋白结合微粒子、缀合物和抗生物素蛋白结 合微粒子顺序连接的复合物,发生自凝。在本说明书中,所谓r没有待分析物质存在的情况下,与抗生物 素蛋白结合微粒子实质上没有凝集的量」的生物素意思是指在不存在 待分析物质情况下,使待分析物质抗原或抗体结合生物素的缀合物与 抗生物素蛋白结合微粒子共存时,实质上不发生自凝的生物素量。而 r实质上不凝集」指的是实施该方法时,不会给分析结果带来影响。就象先前叙述的那样,抗原或抗体结合了 2分子生物素的缀合物 在上述条件下发生自凝。因此在本专利技术中使用的缀合物中抗原或抗体 结合的生物素量不要超过2个分子,最好是l个分子。本专利技术中使用的缀合物可以根据众所周知的方法制备,例如,通 过使用生物素化试剂,使l分子或l分子以上生物素(优选l分子) 通过化学方式结合于抗原或抗体,或是使1分子或1分子以上生物素 (优选1分子)通过物理方式吸附于抗原或抗体上,然后继续将没有 与抗原或抗体结合或吸附的残存生物素除去后,通过用緩冲液稀释到 最适浓度可以得到本专利技术中使用的缀合物。通过将得到的缀合物在没 有待分析物质存在的情况下与抗生物素蛋白结合微粒子共存,分析实 质上是否发生自凝,可以判断结合于抗原或抗体的生物素量是否是 r在没有待分析物质存在的情况下实质上没有与抗生物素蛋白结合 微粒子凝集的量J 。将上述稀释液可以直接或添加适当添加剂(例如,众所周知的稳 定剂)之后作为第l组合物使用。或者将上述稀释液直接冷冻干燥或 添加适本文档来自技高网...
【技术保护点】
胶乳凝集试剂,其包括:含有结合了生物素的、待分析物质的抗原或抗体的第1组合物,和含有结合了抗生物素蛋白的胶乳粒子的第2组合物,其中,一个生物素分子与所述结合了生物素的、待分析物质的抗原或抗体中的所述抗原或抗体结合。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员:中原邦彦,泽井时男,
申请(专利权)人:株式会社三菱化学药得论,
类型:发明
国别省市:JP[日本]
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