乳品抗生素快速检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开的乳品抗生素快速检测试剂盒包括：具有层析膜、洗涤液、显色液和吸水纸的检测盒以及包含有酶标抗原的样品管，其中层析膜包被有抗生素抗体的乳胶、对照抗体的乳胶。检测盒由活动组件与底座装配而成。由于检测盒自身带有洗涤液和显色液，因此只要加入样品，随后按下活动组件就可以完成检测，无需手工加入试剂，大大提高了检测的便利性及可靠性，减少失误的可能性；由于该试剂盒采用层析法进行反应，使反应物能够与抗体充分接触，有利于提高反应效率，提高检测的灵敏度，缩短检测时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测领域，尤其是食品安全检测领域。
技术介绍
奶牛由于经常挤奶极易发生乳腺炎等疾病，注射抗生素是目前最直接有效 的治疗手段。而给病牛注射药物后，分泌的牛奶中会有大量的抗生素残留。即 使在停药后，牛奶中的抗生素含量仍会在一段时间内持续超标。如果长期饮用 抗生素超标的奶，会使正常人被动接受、积累抗生素，造成人体生理紊乱，对 抗生素产生耐药性。欧美各国多年前即立法禁止抗生素残留超限量的牛奶上市， 抗生素含量达标已成为通用的国际化的原料奶收购标准。目前乳品中抗生素残留的检测方法大致分为三类生物测定法、理化分析 法和免疫法。分别介绍如下1.微生物检测法微生物检测法是应用较广泛的方法，其测定原理是根据抗生素对微生物的 生理机能、代谢的抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留，如Delvotest法、纸片法(PD)、 TTC法、拭子法(STOP)等。Delvotest法和TTC 法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物检测法。Delvotest法其原理是在牛奶样品中加入嗜热芽胞菌，在64。C条件下培养 2.5 3小时后会产酸，酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色。若牛奶样品中不 含抗生素,培养后样品呈黄色；如样品中含有抗生素，嗜热芽胞菌生长受到抑制 而无法产酸，指示剂将不变色。TTC法即氯化三苯基四氮唑法(tripheyetetrazolium chloride),是目前我国 食品卫生标准中规定的检査牛奶中抗生素残留的检测方法(GB5409—85)。其原理是 嗜热链球菌在牛奶中生长时会将无色的2， 3， 5 —氯化三苯基四氮唑(2， 3， 5-Triphenyltetrazolium Chloride, TTC)还原为红色的三苯甲瓒。当牛奶中存在 抗生素等抗菌物质时，会抑制嗜热链球菌的生长，TTC则无法被还原。微生物检测方法的优点是，设备、试剂成本低；可以检测广谱的抗生素。 缺点是1.时间长，通常需要等待3小时以上；2.显色状态判断通过肉眼辨别， 易产生误差，无法做出准确判断；3.操作复杂，要求操作人员需有一定专业知 识且实验过程中要求严格遵守操作规程；4.检测容易受干扰，导致结果出现假 阳性或假阴性。2. 理化检测法理化检测方法是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定 其含量，包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等等，其中以高效液相色谱(HPLC)法最为常用。高效液相色谱(HPLC):是目前广泛应用的一种理化检测方法，利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应来测定其含量。它引入了气相色谱理论，在 技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分离速度快、效 率高和操作自动化。几乎所有的化合物包括高极性/离子型待测物和大分子物质，均可用HPLC进行测定。检测过程一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、 层析柱净化、衍生化等步骤，能检测抗生素的具体含量，敏感性较高。其它用于乳品抗生素残留检测的理化法还包括气相色谱法(GC)、高效薄层 色谱(HPTLC)、超临界流体色谱(SFC)和毛细管区域电泳法(CZE)等。这些方法 尽管在残留检测中不常用，但因其各自特有的性能，能弥补常用方法中不足之 处。如GC有许多高灵敏、通用性或专一性强的检测器供选用，如氢焰离子化检 测器(FID)、氯磷检测器(NPD)等，检测限可达吗/kg级；HPTLC的斑点原位扫 描定量、定性和高效分离材料(O3 10,)改变了常规TLC在灵敏度和重现性方 面的不足，但保持了TLC的简便、快速和样品容量大的优点，可使用正相或反 相板，分辨率几乎与HPLC相当，在抗生素残留的快速筛选性检5测方面应用 广泛；SFC可弥补GC和HPLC的不足，方便地连接各种灵敏的检测器(MS， ECD 等)；CZE是90年代以来研究最活跃的分析技术之一，兼有高压电泳的高速、 高分辨和HPLC灵活、高效的优点。理化法的优点是能进行定性、定量和药物鉴定，敏感性较高。缺点是但检 测程序复杂，费用较高，需购买昂贵的检测设备，不适合小型检验室。3. 免疫法免疫测定法(immunoassays， IAs)可分为酶联免疫法(EIA)、放免法(RIA)等，是利用抗体与抗原之间特异性的免疫反应进行定性或定量检测。目前在乳 品抗生素检测领域较为常见的免疫检测法有ELISA法和金标层析法等。ELISA法在包被有抗体的96孔板上加入样品和酶标抗原，样品中含有的 抗生素(抗原)与酶标抗原竞争板上有限的抗体结合位点。样品中的抗原含量 越高，与抗体结合的量就越多，而酶标抗原的结合量就越低，即样品中抗原含 量与结合的酶标抗体含量成反比。加入显色液，显色深浅与样品中抗原含量成 反比。ELISA法的优点是检测灵敏度高，可精确定量。4金标层析法在包被有抗体的膜上加入样品和金标抗原，样品中含有的抗 生素(抗原)与酶标抗原利用毛细作用通过膜上的抗体并被捕获。样品中的抗 原含量越高，与抗体结合的量就越多，而金标抗原的结合量就越低，抗体位置 的显色就越浅，即显色深浅与样品中抗原含量成反比。金标法的优点是反应速 度快，通常几分钟即可出结果。但通常只能定性判断，同时在灵敏度方面存在 欠缺。免疫分析技术最突出的优点是操作简单，速度快、分析成本低。以使用96孔板的ELISA为例，免疫测定法取样量小，前处理简单、容量大，仪器化程度 低，检测奶与GC/MS或GC/ECD相似，可方便地达到ng/ml级，分析效率则为 HPLC或GC的几十倍以上。缺点是定量检测时需要操作人员具备一定的专业知 识和技巧；同时检测时间需要1小时以上，不能完全满足牛奶公司收购鲜奶时 需要即时出报告的需要；而金标层析法通常只能定性判断，结果不够稳定，同 时在灵敏度方面存在欠缺。目前大部分抗生素已经建立了免疫测定法，如磺胺 二甲基嘧啶、氯霉素、链霉素、四环素、莫能菌素等。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的是提供一种简便、快速、稳定的 基于酶联免疫层析技术的乳品抗生素检测试剂盒。本专利技术的乳品抗生素快速检测试剂盒，包括具有层析膜、洗涤液、显色 液和吸水纸的检测盒以及包含有酶标抗原的样品管，所说的层析膜包被有抗生 素抗体的乳胶、对照抗体的乳胶；其中，包被在层析膜上的抗生素抗体乳胶包括青霉素类抗体、头孢菌素 类抗体、氨基糖苷类抗体、磺胺类抗体、四环素类抗体、氯霉素抗体、黄曲霉 素抗体酶标抗原包括青霉素类抗原、头孢菌素类抗原、氨基糖苷类抗原、磺胺 类抗原、四环素类抗原、氯霉素抗原、黄曲霉素抗原显色液0.02%TMB， 1.5%PVP， 0.75%DMSO， 0.1%硫酸葡聚糖，0.015 %H202, pH5.0。洗涤液O.OlMTris画HCl， 0.5%NaCl， 0.1 %Tween-20， pH6.9乳品抗生素快速检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤1) 取纯的抗生素标记辣根过氧化物酶，-S(TC保存待用；2) 取上述步骤l)标记的抗生素-辣根过氧化物酶溶液，分装在样品管内，冻干；3) 取抗生素抗体，对照抗体包被商品化乳胶，将抗体包被的乳胶用点样仪 分别喷在层析膜的检测点及对照点位置，37'C烘干1小时；4) 取蓝色染料水溶液，用点样仪喷在层析膜位于检测盒指示窗的位置，烘干；5) 配制洗涤液、显色本文档来自技高网...

【技术保护点】
乳品抗生素快速检测试剂盒，其特征在于包括：具有层析膜、洗涤液、显色液和吸水纸的检测盒以及包含有酶标抗原的样品管，所说的层析膜包被有抗生素抗体的乳胶、对照抗体的乳胶；　其中，包被在层析膜上的抗生素抗体乳胶包括：青霉素类抗体、头孢菌素类抗 体、氨基糖苷类抗体、磺胺类抗体、四环素类抗体、氯霉素抗体、黄曲霉素抗体　酶标抗原包括：青霉素类抗原、头孢菌素类抗原、氨基糖苷类抗原、磺胺类抗原、四环素类抗原、氯霉素抗原、黄曲霉素抗原　显色液：０．０２％ＴＭＢ，１．５％ＰＶＰ，０ ．７５％ＤＭＳＯ，０．１％硫酸葡聚糖，０．０１５％Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］，ｐＨ５．０。　洗涤液：０．０１ＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ，０．５％ＮａＣｌ，０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０，ｐＨ６．９。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王强，厉永纲，陈宇鹏，孙科，
申请(专利权)人：杭州博日科技有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]