膜雄激素受体(mAR)调节剂的检测方法技术

公开了能调节膜雄激素受体（ｍＡＲ）的调节剂的检测方法。在一个实施方案中，本发明专利技术提供用于检测和任选鉴别ｍＡＲ结合配体的方法。相对于结合经典胞内雄激素受体（ｉＡＲ或ＡＲ）而言，本发明专利技术的一个测定方法检测能选择性结合ｍＡＲ的结合剂。本发明专利技术具有广泛用途，包括提供优先结合ｍＡＲ的化学实体的文库的筛选方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
一般而言，本专利技术涉及可调节膜雄激素受体(membrane androgen receptor, mAR)的配体和其它调节剂的检测方法。更具体地讲，本专利技术 提供这类调节剂的检测方法。优选本专利技术的测定方法检测配体，相对 于结合胞内雄激素受体(intracellular androgen receptor, iAR或AR)而 言，这类配体选择性结合mAR。本专利技术具有广泛用途，包括提供用于 筛选特异性结合mAR的实体化学文库的方法。背景众所周知，雄激素活性是通过与胞内雄激素受体(在本文称为iAR 或AR)结合而介导的。认为iAR是核受体超家族成员，其作用是作为 配体激活的转录因子。已经报告了雄激素对表达iAR的细胞的效应， 包括与受体结合。额外效应包括雄激素内化、二聚化、核易位、核酸 结合、以及雄激素敏感基因的活化/阻遏。雄激素介导的基因表达是通 过AR起作用，通常需要数小时。 一般性介绍可参见Pietras， RJ.等(2001) 14: 417-427， Kumar， MV (1998) /Vog. iVwc/e/c 7 仏Afo/. 所o/. 59: 289-306;及其中引用的参考文献。人们一直认为某些雄激素衍生物例如二氢睾酮(DHT)是天然AR 配体。为了开发模拟或抑制这些效应的物质所进行的研究工作已有报 道。例如，许多小分子AR调节剂包括醋酸环丙孕酮、氟他胺、chloramidone、比卡鲁胺、以及某些唾啉和会啉酮(quinolinone)衍生物。 参见例如PCT/IB2005/002592 (WO 2006/024931); PCT/US2004/038859 (WO 2005/052118) ; PCT/2004/027483 (WO 2005/018573); PCT/2005/013775 (WO 2005/105091) ; PCT/US2005/029592 (WO 2006/026196);和PCT/IB2005/002592 (WO 2006/024931);及其中公开 的参考文献。逐渐公认至少某些雄激素的生物活性比AR结合(以小时计戌快 得多(以分钟计)。因此，已经报告了不包括AR的"非经典，，甾体结 合实体，即结合实体。参见Papakonstanti, E.等(2003) Mo/ecw/w ￡"<iocn'"o/ogy 17: 870; Koukouitaki， S.B.等(1999) Mo/. Me^ 5: 731;及 其中引用的参考文献。更具体地讲，报道了在表达最少量iAR或不表达iAR的细胞中 的雄激素膜结合位点。这类细胞包括但不限于T淋巴细胞、单核细胞、 成骨细胞(ostoblast)、前列腺组织和某些细胞系。已报道的参与调节 mAR的共同要素包括胞内4丐的增加，可检测的前列腺特异性抗原(PSA) 的增加，细胞死亡(细胞凋亡)的增加和大量肌动蛋白重组构。参见 Gorczynska， E.和Handelsman, DJ (1995)五"c/orm'wo/ogy 136: 2052; 和 Kampa，M.等(2002)i^5EBJ: 16: 1429。已经综述了 mAR的分布和作用。参见Kampa, M. E. Castanas (2006) Mo/, Ce〃.五"^cn'"o/ogy 246: 76;及其中公开的参考文献。 简而言之，认为mAR活化在肌动蛋白重组构、细胞凋亡和胞内钾水 平的调节上起到重要作用。已经提出，mAR可代表新型治疗靶标。参 见Kampa， M.E.和Castanas (2006),出处同上；Hatzoglou， A.等(2005) J. of Clinical Endocrinology & Metabolism, 90: 893; Kampa, M.等(2002), 出处同上；Stathopouos， E.等(2003) 5MC C"m'ca/ P^/zo/ogy 3:1;及其 中引用的参考文献。希望检测能调节mAR的调节剂。更希望拥有检测调节剂的方法， 相对于调节AR而言，所述调节剂优先调节mAR。更优选的方法是能8够检测受体结合配体，相对于结合AR而言，所述配体特异性结合 mAR。专利技术概述一般而言，本专利技术涉及可检测用于调节(增加或降低)膜雄激素受 体(mAR)的调节剂的方法。更具体地讲，本专利技术涉及可用于4企测调节 剂的方法，相对于调节胞内膜受体(iAR或AR)而言，所述调节剂优先 调节mAR。更具体的方法可用于检测和鉴定配体，相对于AR而言， 所述配体特异性结合mAR。本专利技术具有广泛用途，包括提供可用于筛 选化学文库的方法，以筛选与mAR特异性结合的分子。说明性的调节剂是受体结合配体和类似分子。可通过采用本文所 述的体外和体内方法中的一种或其组合，鉴定这类调节剂。可根据有 待分析的调节剂数量、所需的特异性和选择性、以及使用者可完成的 方法数量等公知的参数，指导对本专利技术具体方法(或方法的组合)的选 择。因此， 一方面，本专利技术提供可调节(增加或降低)mAR功能的调 节剂的4企测方法。在一个实施方案中，该方法包括至少一个和优选所 有以下步骤a. 在允许mAR与雄激素化合物结合的条件下，使mAR与带有 可检测标记的雄激素化合物接触，形成第一复合物；b. 在允许调节剂与mAR之间结合的条件下，使第一复合物与调 节剂接触，形成第二复合物；和c. 检测自第一复合物中释放的带有可检测标记的雄激素化合物， 作为所述调节剂存在的标志。可以理解，带有可检测标记的雄激素化合物和调节剂用于本专利技术 的顺序并不重要，只要能得到预期结果。因此，在一个实施方案中， 可采用这样的方法，使得能形成第一复合物(有时用过量雄激素)，然9后添加待测调节剂(饱和形式)。或者，可以同时加入调节剂和带有可 检测标记的雄激素，形成第一复合物(竟争形式)。在另一个方法实施 方案中，在加入待筛选调节剂之后，加入带有可检测标记的雄激素。因此，在一个实施方案中，本专利技术包括检测可调节mAR功能的 调节剂，所述检测包括至少一个和优选所有以下步骤a. 在允许mAR与雄激素化合物结合的条件下，使mAR与带有 可检测标记的雄激素化合物和调节剂接触(通过例如将它们全部混合 在一起或一次加一种地混合它们)，形成第一复合物；和b. 检测与第一复合物结合的带有可检测标记的雄激素化合物水 平的下降，作为所述调节剂存在的标志。在上述本专利技术实施方案中，当待测调节剂存在时，形成第一复合 物。带有可检测标记的雄激素和调节剂竟争性结合mAR。 mAR与调 节剂间形成的任何复合物在本文称为"第二复合物"。在该实施方案 中，认为带有可检测标记的雄激素化合物水平下降(例如检测到比第一 复合物更多的第二复合物)，就表明存在可调节mAR的调节剂。尽管 筛选组分的加入顺序未必重要，但是通常先形成第一复合物，然后再 添加待测调节剂。尽管未必需要优化实践本专利技术(例如当特定调节剂的受体活性已 知时)，但是包括合适的对照之一或其组合通常是4艮有用的。 一般而言， 与调节剂不存在时相比，"合适的对照"将会给出有关所述调节剂活 性的信息。或者，或另外，"合适的对照"将会给出有关调节剂对 AR的活性的信息。谨慎使用这样本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测能调节膜雄激素受体（ｍＡＲ）功能的调节剂的方法，所述方法包括以下步骤：　ａ．在允许ｍＡＲ与雄激素化合物结合的条件下，使ｍＡＲ与带有可检测标记的雄激素化合物接触，形成第一复合物；　ｂ．在允许所述调节剂与ｍＡＲ之间结合的条件 下，使第一复合物与所述调节剂接触，形成第二复合物；和　ｃ．检测自第一复合物中释放的所述带有可检测标记的雄激素化合物，作为所述调节剂存在的标志。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：N贝科普洛斯，K阿列维佐普洛斯，RL布查南，C斯图尔纳拉斯，
申请(专利权)人：美德爱克西斯公司，
类型：发明
国别省市：GR[希腊]