一种快速富集和检测2019-nCoV的方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供一种快速富集和检测2019‑nCoV的方法及试剂盒，属于生物检测分析技术领域，本发明专利技术可针对较大体积的测试样本中的病毒进行免疫特异性富集，再对富集病毒样品进行裂解释放病毒的核酸和蛋白质物质，然后再针对2019‑nCoV病毒中带有特异氨基酸序列的SPIKE蛋白进行检测，检测快速、灵敏，减少假阳性现象的产生，具有良好的实际应用之价值。

【技术实现步骤摘要】
一种快速富集和检测2019-nCoV的方法及试剂盒
本专利技术属于生物检测分析
，具体涉及一种快速富集和检测2019-nCoV的方法及试剂盒。
技术介绍
本专利技术
技术介绍
中公开的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。新型呼吸道病毒的爆发严重威胁人类生命安全，已经给社会和经济发展造成了无法估量的损失。2002年由非典型冠状病毒(SARS-nCoV)引起的急性呼吸道传染病，很快成为全球性传染病疫潮，累计8422人感染，919人死亡。时隔17年，新型冠状病毒(2019-nCoV)从2019年12月发现至今，已经确诊感染人数已超过了7万，死亡人数超过了2000。冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具囊膜(envelope)、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。冠状病毒仅感染脊椎动物，如人、鼠、猪、猫、犬、狼、鸡、牛、禽类。2019新型冠状病毒(2019-nCoV；SARS-CoV-2)是目前已知的第7种可以感染人的冠状病毒，其余6种分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV(引发重症急性呼吸综合征)和MERS-CoV(引发中东呼吸综合征)。现认为此次疫情是因蝙蝠携带的冠状病毒(Bat-CoVRaTG13)传染到人而造成疫病爆发。专利技术人发现，由于临床样本中的病毒滴度往往非常低，所以，现有以病毒核酸为目标检测物质的检测方法，都需要经过RT-PCR的扩增和放大，其主要缺点是扩增和放大过程中的假阳性，或病毒滴度太低灵敏度不够，从而使得在2019-nCoV疫情爆发的早期阶段存在大量不能确诊的疑似病例，影响治疗方案的实施。
技术实现思路
针对现有技术中的不足，本专利技术提供一种快速富集和检测2019-nCoV的方法及试剂盒。本专利技术可针对较大体积的测试样本中的病毒进行免疫特异性富集，再对富集病毒样品进行裂解释放病毒的核酸和蛋白质物质，然后再针对2019-nCoV病毒中带有特异氨基酸序列的SPIKE蛋白进行检测，检测快速、灵敏，减少假阳性现象的产生，具有良好的实际应用之价值。为实现上述技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术的一方面，提供一种多肽，所述多肽序列为如下任一种或多种；a)TPGDSSSGWT(SEQIDNo.1)和/或其多聚物形式；b)QTNSPRRAR(SEQIDNo.2)和/或其多聚物形式；其中，多肽多聚物形式具体为便于宿主表达和/或纯化重组蛋白的形式，如在多肽多聚物C端或N端上添加组氨酸标签，因此，本专利技术的一个具体实施方式中，所述多肽序列为(TPGDSSSGWT)5-6His或(QTNSPRRAR)5-6His。根据目前研究，蝙蝠携带的Bat-CoVRaTG13病毒与造成此次疫病的2019-nCoV的核酸序列最为接近。而在它们用于编码同源蛋白SPIKE的核酸上有些序列只出现在2019-nCoV的核酸序列中。因此本专利技术以2019-nCoV病毒的SPIKE蛋白上的2段特异氨基酸TPGDSSSGWT和QTNSPRRAR序列作为检测目标，从而可以检测样本中是否存在2019-nCoV病毒。进一步地，所述多肽通过化学人工合成方法或者生物合成方法获得。其中，所述多肽通过化学人工合成方法如固相多肽合成法或液相多肽合成法合成或者通过生物合成方法如通过基因重组由基因工程菌生产而得。进一步的，所述生物合成方法具体包括：合成编码上述多肽的核苷酸；将核苷酸导入表达载体构建重组表达载体，然后导入宿主进行培养，收集。本专利技术又一方面，提供多肽在2019-nCoV病毒检测和/或制备2019-nCoV病毒检测产品中的应用。本专利技术的又一方面，提供一种抗体，所述抗体特异性结合并识别上述多肽。其中，所述抗体可以是嵌合抗体或者人源化抗体或者去免疫化抗体。进一步的，所述抗体为抗上述多肽的单克隆抗体或多克隆抗体。进一步地，所述抗体的制备方法包括针对上述抗原对非人动物进行免疫获得。所述非人动物包括但不限于小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴。进一步地，所述制备方法包括：制备免疫抗原、免疫非人动物、测定血清效价、纯化抗血清和抗体特异性检测。本专利技术又一方面，提供上述抗体在2019-nCoV病毒检测和/或制备2019-nCoV病毒检测产品中的应用。进一步地，所述2019-nCoV病毒检测方法包括但不限于基于ELISA、胶体金法或蛋白质芯片技术所进行的方法。进一步地，所述2019-nCoV病毒检测产品包括但不限于基于ELISA、胶体金法或蛋白质芯片技术所需的物质。进一步地，，所述2019-nCoV病毒检测产品包括试剂盒。本专利技术又一方面，提供一种快速富集和检测2019-nCoV的试剂盒，所述试剂盒包括：免疫磁珠，所述免疫磁珠用于对样品中的2019-nCoV病毒进行富集；以及检测试剂条，所述检测试剂条具体为胶体金试纸条，用于对样品中的2019-nCoV病毒进行检测；其中，所述免疫磁珠上偶联有上述抗体；所述抗体优选为抗上述多肽的单克隆抗体；所述检测试纸条为常规胶体金试纸条，在一种具体实施方式中，所述检测试纸条是由PVC底板1上粘贴样品垫2，胶体金垫3，硝酸纤维素膜4和吸水垫5，胶体金垫3上喷涂有胶体金标记的抗体，硝酸纤维素膜上包被有抗体作为测试线6和包被有抗鼠抗体作为控制线7。本专利技术又一方面，提供一种快速富集和检测2019-nCoV的方法，所述方法包括以下步骤：利用上述免疫磁珠对待检测的样品中的2019-nCoV病毒进行富集，以便获得2019-nCoV病毒经过富集的样品；以及利用上述检测试剂条对所述2019-nCoV病毒进行检测。进一步的，所述待检测的样品包括但不限于血液、唾液、鼻腔分泌物和尿液。本专利技术的有益技术效果：本专利技术提供一种快速富集和检测2019-nCoV的方法及试剂盒，具体的，本专利技术研究发现在2019-nCoV的SPIKE蛋白中存在两段特异性多肽序列，从而基于上述多肽序列制备特异性抗体，实现对2019-nCoV的富集和检测，本专利技术大大提高了针对2019-nCoV病毒的特异性(SPIKE蛋白独特序列)、灵敏度(病毒富集>1000倍)和检测速度(时间20-50分钟)，因此具有良好的实际应用之价值。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1为本专利技术不同冠状病毒中同源蛋白SPIKE的不同的核酸序列。图2为本专利技术检测试纸条示意图。图3为本专利技术检测试纸条结果判定图。图中，1-PVC底板，2-样品垫，3-胶体金垫，4-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽序列为如下任一种或多种；/na)TPGDSSSGWT(SEQ ID No.1)和/或其多聚物形式；/nb)QTNSPRRAR(SEQ ID No.2)和/或其多聚物形式。/n

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽序列为如下任一种或多种；
a)TPGDSSSGWT(SEQIDNo.1)和/或其多聚物形式；
b)QTNSPRRAR(SEQIDNo.2)和/或其多聚物形式。


2.根据权利要求1所述的一种多肽，其特征在于：所述多肽通过化学人工合成方法或者生物合成方法获得，其中，所述生物合成方法具体包括：合成编码权利要求1所述多肽的核苷酸；将核苷酸导入表达载体构建重组表达载体，然后导入宿主进行培养、收集。


3.根据权利要求1或2所述的一种多肽，其特征在于：所述多肽在2019-nCoV病毒检测和/或制备2019-nCoV病毒检测产品中的应用。


4.一种抗体，其特征在于：所述抗体特异性结合并识别权利要求1所述多肽，其中，所述抗体为抗上述多肽的单克隆抗体或多克隆抗体。


5.根据权利要求4所述的一种抗体，其特征在于：所述抗体的制备方法包括针对上述多肽对非人动物进行免疫获得；所述非人动物包括但不限于小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴。


6.根据权利要求4或5所述的一种抗体，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨永芳，朱庆庆，
申请(专利权)人：浙江聚康生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33