茶褐素在制备抗黑色素瘤药物中的应用制造技术

茶褐素在制备抗黑色素瘤药物中的应用，属于茶褐素的用途技术领域。该应用包括：茶褐素在制备诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡药物中的作用；茶褐素在作为天然物质制备抑制黑色素瘤药物中的应用；茶褐素在作为天然物质制备DNA损伤剂中的应用。本发明专利技术证明了茶褐素对A375细胞具有抗增殖作用，茶褐素对A375细胞具有促凋亡作用，茶褐素引起A375细胞DNA损伤，茶褐素影响A375细胞的蛋白表达，茶褐素影响A375移植瘤斑马鱼的体内作用。本发明专利技术研究了茶褐素对A375人黑色素瘤细胞促凋亡作用及作用机制，可用于开发抗黑色素瘤药物。

【技术实现步骤摘要】
茶褐素在制备抗黑色素瘤药物中的应用
本专利技术属于茶褐素的用途
，涉及茶褐素在制备抗黑色素瘤药物中的应用，具体涉及茶褐素在诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡中的作用。
技术介绍
黑色素瘤（Melanoma）来源于表皮黑色素细胞，可发生在任何含有这些细胞的组织中，是一类恶化程度高、发病隐匿，侵袭性强的肿瘤。其临床特征差异很大，目前大多数黑色素瘤的临床特征主要表现为以下几点：不对称性；边缘不规则，参差不齐、有凹痕或模糊；颜色不均匀，呈不同程度的棕褐色、棕色或黑色；直径大于6mm；随着病情的演变会升高或扩大。虽然最常见的黑色素瘤形式是皮肤，但它也可能出现在任何非皮肤部位，包括眼、胃肠、泌尿生殖系统和鼻咽部位。虽然黑色素瘤在皮肤癌的病例中只占4%，但它的致死率极高，约占皮肤癌相关死亡病例的73%。此外，仅次于肺癌和乳腺癌的黑色素瘤还是脑转移的第三大最常见原因。作为一种潜在的致死性皮肤恶性肿瘤，黑色素瘤在世界范围内发病率持续上升。由于黑色素瘤高致死率、转移速度快、预后差的特点，极大增加了医疗资源的消耗，给社会及患者带来巨大的精神压力和沉重的经济负担。目前，针对黑色素瘤的治疗方法包括手术治疗、放疗、化学治疗、靶向治疗和免疫治疗等。有研究发现，黑色素瘤具有放射抗拒性，是一种抗放射癌，且放射治疗对人体的正常细胞也会造成伤害。达卡巴嗪和替莫唑胺是抗黑素瘤化学疗法中的常用药物，但其对黑色素瘤治疗的有效率较低，预后性较差。BRAF是黑色素瘤中最常见的致癌基因，应运而生的BRAF抑制剂，如索拉菲尼、威罗菲尼、达拉菲尼等药物，可诱导黑色素瘤转移并迅速消退，但是，BRAF单一疗法的益处只是暂时的，6～7个月后，大多数患者表现出了耐药性。免疫疗法可改善黑色素瘤患者的免疫反应，但存在严重的毒副作用，使得其在临床上的应用仍然受到限制。因此，迫切需要开发低毒性的新型药物来治疗黑色素瘤患者。黑色素瘤和非小细胞肺癌以及骨肉瘤有明显区别：1）黑色素瘤通常是指恶性黑色素瘤，是黑色素细胞来源的一种高度恶性的肿瘤，简称恶黑，多发生于皮肤，也可见于黏膜和内脏，约占全部肿瘤的3%。恶性黑色素瘤可由先天性或获得性良性黑素细胞痣演变而成，或由发育不良性痣恶变而来，也可以是新发生。恶性黑色素瘤除早期手术切除外，缺乏特效治疗，预后差。2）非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌（鳞癌）、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。目前认为吸烟是肺癌的最重要的高危因素，烟草中有超过3000种化学物质，其中多链芳香烃类化合物（如：苯并芘）和亚硝胺均有很强的致癌活性。多链芳香烃类化合物和亚硝胺可通过多种机制导致支气管上皮细胞DNA损伤，使得癌基因（如Ras基因）激活和抑癌基因（如p53，FHIT基因等）失活，进而引起细胞的转化，最终癌变。3）骨肉瘤也叫成骨肉瘤，骨肉瘤是骨恶性肿瘤中最多见的一种，是从间质细胞系发展而来，肿瘤迅速生长是由于肿瘤经软骨阶段直接或间接形成肿瘤骨样组织和骨组织。下肢负重骨在外界因素（如病毒）的作用下，使细胞突变，可能与骨肉瘤形成有关。典型的骨肉瘤源于骨内，另一与此完全不同类型的是与骨皮质并列的骨肉瘤，源于骨外膜和附近的结缔组织。后者较少见，预后稍好。由上可知，三种肿瘤从来源、发病机制、发生范围及预后都有所不同，其干预方法必然不同，即对非小细胞肺癌以及骨肉瘤有效的手段，不一定全部适用于黑色素瘤。因此，本研究首次发现茶褐素对黑色素瘤有显著干预作用，具有独创性。茶褐素（theabrownin，TB）是从茶叶中提取出的一类能溶于水，而不溶于乙酸乙酯、正丁醇的复杂天然高聚物，由茶黄素和茶红素等多酚类物质进一步氧化衍生而成，天然存在于红茶、绿茶和黑茶中。茶褐素对改善人体的综合代谢平衡大有裨益，具有降血糖、血脂、血压、尿酸等效果，同时也是一种很有前途的抗癌候选物质。目前，许多抗癌药可以通过多种途径诱导癌细胞凋亡。肿瘤蛋白p53是与人类肿瘤最广泛相关的抑癌基因。在正常情况下，p53在DNA修复和复制中起作用，在DNA损伤后阻止细胞增殖，从而抑制了肿瘤的生长。研究显示，p53在黑色素瘤的发生和发展中也起重要作用。NF-κB是在真核细胞中广泛分布的转录因子，在肿瘤细胞的增殖，凋亡中也起着关键的作用。实验证明，NF-κB途径是黑色素瘤主要的肿瘤促进途径之一。早前我们的研究已发现，茶褐素能通过激活P53信号通路，从而抑制人骨肉瘤细胞U2OS和非小细胞肺癌细胞A549增殖，并诱导其发生凋亡。然而其对黑色素瘤等皮肤癌的影响尚不清楚，也未有相关的研究报道。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供茶褐素在制备抗黑色素瘤药物中的应用。本专利技术为了评估茶褐素抗A375人黑色素瘤的体内外作用和机制，采用MTT法检测茶褐素对A375细胞活性与形态的影响；采用DAPI染色与流式细胞术检测茶褐素对A375细胞凋亡的影响；通过彗星实验和TUNEL试验检测茶褐素对A375细胞的DNA损伤程度；通过蛋白质免疫印迹法检测A375细胞中靶向蛋白表达和磷酸化水平；采用斑马鱼显微注射A375细胞建立斑马鱼异种移植瘤模型，通过对该黑色素瘤模型动物的干预作用来评价茶褐素的体内抗肿瘤效果。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：茶褐素在制备诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡药物中的作用。所述的茶褐素在制备诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡药物中的作用，其特征在于所述茶褐素通过P53和NF-κB通路引起DNA损伤，从而诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡。所述的茶褐素在制备诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡药物中的作用，其特征在于所述茶褐素以剂量依赖的方式触发DNA损伤。茶褐素在作为天然物质制备抑制黑色素瘤药物中的应用。所述的茶褐素在作为天然物质制备抑制黑色素瘤药物中的应用，其特征在于所述黑色素瘤为A375人黑色素瘤。茶褐素在作为天然物质制备DNA损伤剂中的应用。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术是关于茶褐素对A375人黑色素瘤细胞促凋亡作用和作用机制的首次报道，使茶褐素成为开发抗A375人黑色素瘤药物的天然产物的有希望的候选对象。研究证明茶褐素对A375人黑色素瘤细胞有促凋亡作用。并阐明其作用机理与DNA损伤激活途径有关，包括P53和NF-κB通路。因此，茶褐素可被视为DNA损伤的诱导剂，激活下游促凋亡基因和蛋白，导致A375人黑色素瘤细胞凋亡，最终抑制黑色素瘤的发生和发展。这项研究为茶褐素抗黑色素瘤的功效提供了证据，并有助于天然产物的开发，即DNA损伤因子，用于黑色素瘤的治疗。附图说明图1为经茶褐素处理的A375细胞在24、48、72h时的细胞抑制率曲线图（A）和细胞形态图（B），数据表示为X±SD，P<0.01表示与正常水平(0μg/mlTB)相比有显著性差异，比例尺=20μm；图2为不同浓度的茶褐素处理A375细胞后的DAPI染色显微观察图（A）和流式细胞术观察（B），不同小写字母的数据（X±SD）在LSD多次比较时存在显著差异，比例尺=50μm；图3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.茶褐素在制备诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡药物中的作用。/n

【技术特征摘要】
1.茶褐素在制备诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡药物中的作用。


2.如权利要求1所述的茶褐素在制备诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡药物中的作用，其特征在于所述茶褐素通过P53和NF-κB通路引起DNA损伤，从而诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡。


3.如权利要求1所述的茶褐素在制备诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：张进，
申请(专利权)人：杭州茗褐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33