多特异性抗原结合蛋白及其使用方法技术

提供了多特异性例如三特异性抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含：含有重链可变域和轻链可变域的第一抗原结合域、含有第一单域抗体的第二抗原结合域和含有第二单域抗体的第三抗原结合域。还提供了包含所述多特异性抗原结合蛋白的药物组合物、试剂盒及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多特异性抗原结合蛋白及其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2018年1月8日提交的国际专利申请第PCT/CN2018/071729号的优先权权益，所述国际专利申请的内容通过引用整体并入本文中。以ASCII文本文件形式的序列表的提交ASCII文本文件形式的以下提交内容通过引用整体并入本文中：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：761422001041SEQLIST.txt；记录日期：2019年1月4日；大小：88KB)。专利
本专利技术涉及特异性地结合至三种或更多种不同抗原或表位的多特异性抗原结合蛋白及其使用方法。专利技术背景单克隆抗体(mAb)已广泛用作治疗剂来治疗多种人类疾病，例如癌症和自身免疫疾病。目前，存在超过30种单克隆抗体，包括鼠类、完全人源化和嵌合抗体，它们已经被FDA批准用于治疗用途。利妥昔单抗(rituximab)和曲妥珠单抗(trastuzumab)是最畅销的抗癌蛋白质治疗剂。近来，已证实靶向免疫检查点分子的单克隆抗体(例如伊匹单抗(ipilimumab)和纳武单抗(nivolumab))通过诱导针对肿瘤的T细胞免疫来促进临床结果。由于许多患者对单一治疗方法反应不佳，因此经常将单克隆抗体与其它免疫调节方法(例如针对其它靶标的单克隆抗体)组合以增强其功效。例如，临床研究已证明纳武单抗与伊匹单抗的组合在黑色素瘤患者中产生提高的客观反应率。多特异性抗体已经被设计来同时调节两个或更多个治疗靶标以便提供增强的治疗功效和加宽的潜在效用。据报道双特异性抗体可比两种单克隆抗体的简单组合更有效。已开发多种多特异性抗体形式。例如，双特异性抗体已通过将抗原结合(Fab)片段或单链可变片段(scFv)融合至单克隆抗体而制得(参见例如Weidle等,CancerGenomics&Proteomics2013；10:1-18)。不同形式的多特异性抗体在大小上不同，通常通过不同技术产生，并且在体内分布、组织渗透和药代动力学性质方面不同。尽管在概念上的优势，但目前的多特异性抗体难以制造并开发成生物药物。作为人工构建体，多特异性抗体不能由正常B细胞产生。产生多特异性抗体的最初尝试涉及单特异性抗体的化学结合和表达mAb的细胞的融合，但这些方法具有低效率并且需要从丰富的副产物进行纯化。在蛋白质工程与分子生物学中的高级方法能够实现多种新的多特异性抗体形式的重组构建。然而，一旦采用这些已知的工程化多特异性抗体形式，个别组分(例如scFv和mAb)便丧失其有利的生物化学和/或生物物理学性质、血清半衰期和/或稳定性，导致不良功效、不稳定性和高免疫原性。单域抗体(sdAb)是各自具有单一单体抗体可变域的抗体片段。尽管sdAb比具有两条重链和两条轻链的常见单克隆抗体的尺寸小得多，但其可以与mAb相似的亲和力和特异性结合抗原。sdAb用作结构单元时，其可融合至IgGFc域以产生IgG样抗体，包括二价和双特异性抗体(参见例如HmilaI.等,Mol.Immunol.2008；45:3847-3856)。本文提及的所有出版物、专利、专利申请和公开的专利申请的公开内容在此通过引用整体并入本文中。
技术实现思路
本申请提供多特异性(例如三特异性)抗原结合蛋白或由此衍生的抗原结合片段，所述抗原结合蛋白包含两种或更多种融合至全长四链抗体的单域抗体(sdAb)。因此，本申请的一个方面提供一种多特异性(例如三特异性)抗原结合蛋白(“MABP”)，其包含：(a)含有重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)的第一抗原结合部分，其中VH与VL一起形成特异性地结合第一表位的抗原结合位点，(b)含有特异性地结合第二表位的第一单域抗体(sdAb)的第二抗原结合部分，和(c)含有特异性地结合第三表位的第二单域抗体(sdAb)的第三抗原结合部分，其中第一抗原结合部分、第二抗原结合部分和第三抗原结合部分彼此融合。在一些实施方案中，第一表位、第二表位和第三表位来自相同抗原。在一些实施方案中，第一表位、第二表位和第三表位来自不同抗原。在一些实施方案中，第二表位和第三表位来自相同抗原，并且第一表位来自不同抗原。在一些实施方案中，第一表位和第三表位来自相同抗原，第二表位来自不同抗原。在根据任何一种上述MABP的一些实施方案中，第一抗原结合部分是由两条重链和两条轻链组成的全长抗体。在一些实施方案中，第一抗原结合部分是包含含有VH的重链和含有VL的轻链的抗体片段。在一些实施方案中，第二抗原结合部分和/或第三抗原结合部分包含单一多肽链。在一些实施方案中，第一sdAb和/或第二sdAb是VHH。在根据任何一种上述MABP的一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一sdAb和第一抗原结合部分的重链；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第二sdAb和第一抗原结合部分的轻链。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的重链和第一sdAb；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第二sdAb和第一抗原结合部分的轻链。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一sdAb和第一抗原结合部分的重链；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的轻链和第二sdAb。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的重链和第一sdAb；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的轻链和第二sdAb。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一sdAb、第一抗原结合部分的重链和第二sdAb；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的轻链。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的重链；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第一sdAb、第一抗原结合部分的轻链和第二sdAb。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一sdAb、第二sdAb和第一抗原结合部分的重链；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的轻链。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的重链、第二sdAb和第一sdAb；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的轻链。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的重链；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第一sdAb、第二sdAb和第一抗原结合部分的轻链。在一些实施方案中，MABP包含：(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的重链；和(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：第一抗原结合部分的轻链、第二sdAb和第一sdAb。在一些实施方案中，MABP包含第一多肽的两条链和第二多肽的两条链。在根据任何一种上述MABP的一些实施方案中，第一表位、第二表位和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多特异性抗原结合蛋白(MABP)，其包含：/n(a)含有重链可变域(V

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180108 CN PCT/CN2018/0717291.一种多特异性抗原结合蛋白(MABP)，其包含：
(a)含有重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)的第一抗原结合部分，其中所述VH与所述VL一起形成特异性地结合第一表位的抗原结合位点，
(b)含有特异性地结合第二表位的第一单域抗体(sdAb)的第二抗原结合部分，和
(c)含有特异性地结合第三表位的第二单域抗体(sdAb)的第三抗原结合部分，
其中所述第一抗原结合部分、所述第二抗原结合部分和所述第三抗原结合部分彼此融合。


2.如权利要求1所述的MABP，其中所述MABP是三特异性抗原结合蛋白。


3.如权利要求1或2所述的MABP，其中所述第一抗原结合部分是由两条重链和两条轻链组成的全长抗体。


4.如权利要求1或2所述的MABP，其中所述第一抗原结合部分是包含含有所述VH的重链和含有所述VL的轻链的抗体片段。


5.如权利要求1至4中任一项所述的MABP，其中所述第一sdAb和/或所述第二sdAb是VHH。


6.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一sdAb和所述第一抗原结合部分的重链；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第二sdAb和所述第一抗原结合部分的轻链。


7.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的重链和所述第一sdAb；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第二sdAb和所述第一抗原结合部分的轻链。


8.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一sdAb和所述第一抗原结合部分的重链；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的轻链和所述第二sdAb。


9.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的重链和所述第一sdAb；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的轻链和所述第二sdAb。


10.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一sdAb、所述第一抗原结合部分的重链和所述第二sdAb；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的轻链。


11.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的重链；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一sdAb、所述第一抗原结合部分的轻链和所述第二sdAb。


12.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一sdAb、所述第二sdAb和所述第一抗原结合部分的重链；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的轻链。


13.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的重链、所述第一sdAb和所述第二sdAb；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的轻链。


14.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的重链；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一sdAb、所述第二sdAb和所述第一抗原结合部分的轻链。


15.如权利要求5所述的MABP，其中所述MABP包含：
(1)第一多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的重链；和
(2)第二多肽，其从N末端至C末端包含：所述第一抗原结合部分的轻链、所述第一sdAb和所述第二sdAb。


16.如权利要求6-15中任一项所述的MABP，其中所述MABP包含所述第一多肽的两条链和所述第二多肽的两条链。


17.如权利要求1-16中任一项所述的MABP，其中所述第一表位、所述第二表位和/或所述第三表位来自免疫检查点分子。


18.如权利要求17所述的MABP，其中所述免疫检查点分子选自由下列各物组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3、TIM-3、LAG-3、TIGIT、VISTA、ICOS、4-1BB、OX40、GITR和CD40。


19.如权利要求18所述的MABP，其中所述第一抗原结合部分是抗PD-1抗体或其抗原结合片段。


20.如权利要求19所述的MABP，其中所述抗PD-1抗体来源于派姆单抗。


21.如权利要求17-20中任一项所述的MABP，其中所述第二抗原结合部分包含抗TIGITsdAb。


22.如权利要求21所述的MABP，其中所述抗TIGITsdAb包含SEQIDNO:31的氨基酸序列或其包含至多约3个氨基酸取代的变体。


23.如权利要求17-21中任一项所述的MABP，其中所述第三抗原结合部分包含抗LAG-3sdAb。


24.如权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亚峰，周传初，潘琦，武术，杨帅，
申请(专利权)人：南京传奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32