一种用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物制造技术

本发明专利技术属医药技术领域，涉及治疗非小细胞肺癌的药物组合物。具体涉及一种Hedgehog抑制剂与细胞自噬抑制剂组成的药物组合物或制备的方法，本发明专利技术的药物组合物中Hedgehog抑制剂单用不能有效抑制非小细胞肺癌肿瘤的增殖，而与自噬抑制剂联用后能快速减轻小鼠的肿瘤负荷且更能抑制其关键预后蛋白分子GLI2的表达；同时，该药物组合物于EGFR野生型的肿瘤同样具有显著的治疗效果；且其对于小鼠的体重没有显著的影响，证实了所述药物组合物在实验期间没有显著的药物毒性；该药物组合物具有靶向性好、疗效稳定等特点，有望成为非小细胞肺癌治疗的新一代药物。

【技术实现步骤摘要】
一种用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物
本专利技术属医药
，涉及用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物，具体涉及一种用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物的特征、组成、制备方法，及其在EGFR突变型以及EGFR野生型非小细胞肺癌治疗中的应用。
技术介绍
现有技术公开了非小细胞肺癌的研究现状，结果显示，肺癌是世界上发病率和死亡率最高的最恶性肿瘤之一，其2018年新增肺癌病例达到了210万例，死亡180万例，约占癌症死亡人数的五分之一(18.4％)[1]。肺癌通常分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)；其中非小细胞肺癌占80％～85％，其五年总生存率仅为17％，而临床IV期的肺癌患者的五年生存率低于2％[2]；因此，进一步研究新的非小细胞肺癌治疗方法是目前最急迫需要的。研究公开了EGFR是原癌基因C-ErbB的表达产物，是细胞存活、生长、分化及癌细胞转移的调控因子；EGFR突变会引起酪氨酸激酶(tyrosinekinase，TK)活化异常，可抑制细胞凋亡，并加速血管形成，增强细胞黏附性，最终导致肿瘤细胞的增殖，是非小细胞肺癌(non-small-celllungcancer，NSCLC)中最常见的驱动基因之一[3]；由于EGFR基因在非小细胞肺癌中至关重要，且EGFR是否突变对于非小细胞肺癌的生长影响较大，故而临床实践中对于非小细胞肺癌的治疗通常须先经过EGFR基因的病理分型，根据患者肿瘤组织中的酪氨酸激酶位点19外显子和21外显子是否缺失突变分为EGFR突变型和EGFR野生型[4]，并采用不同的治疗干预策略。临床实践中，对于EGFR突变型的非小细胞肺癌患者通常使用吉非替尼、厄洛替尼和埃克替尼为代表的EGFR-TKI进行治疗，虽然，EGFR-TKI作为一线治疗药物对于EGFR突变的晚期非小细胞肺癌的疗效显著，且优于传统含铂类化疗方案，然而该类患者常出现在治疗后的2年内逐渐对TKI的作用耐受，从而使疗效下降[5]；此外，对于EGFR野生型的患者，目前临床上仅能使用顺铂联合紫杉醇进行治疗，该种治疗方法不仅副作用大，而且疗效有限；据有关统计显示，当前患者经传统化疗后其中位生存期往往仅为8-10个月，临床治疗的形势极其严峻。目前有关Hedgehog信号通路及其在非小细胞肺癌中作用的研究结果显示，所述Hh信号通路组成中，(1)Hh配体果蝇和其它无脊椎动物中只有一种Hh基因，而在哺乳动物中，Hh家族包括三个同源基因：Sonichedgehog(Shh)、Deserthedgehog(Dhh)和Indianhedgehog(Ihh)，分别编码具有自我催化能力的Shh、Dhh和Ihh糖蛋白，而Hh信号传导源于这种自我催化反应[6]；Shh在神经系统、皮肤、消化道中广泛表达，Ihh主要在骨、软骨、消化道、胰腺中表达，Dhh主要在生殖腺中表达，也在外周神经和胰腺中表达。Hh蛋白属于高度保守的分泌性糖蛋白，分子量约45kDa。Hh蛋白家族成员由两个结构域组成：20kDa的氨基端(Hh-N)结构域和25kDa的羧基端(Hh-C)结构域，Hh-N具有Hh配体的全部信号传递功能，Hh-C具有自身蛋白水解酶活性及胆固醇转移酶功能。Hh前体蛋白在内质网中通过自身催化分裂成Hh-N片段及Hh-C片段两部分，其中Hh-C共价结合胆固醇分子，并将其转移到Hh-N的氨基端，随后在酰基转移酶作用下发生棕榈酰化，通过上述翻译后的修饰过程，最后才变成具有信号转导功能的成熟功能蛋白[7]；(2)跨膜糖蛋白PTCH和SMO在靶细胞膜上有两种主要的Hh下游跨膜受体PTCH和SMO，均为跨膜糖蛋白[8]；PTCH是一种12个氨基酸跨膜蛋白，有2个细胞外结合域和1个细胞内结构域，具有结合Hh配体和抑制SMO的2种功能；人类有两种PTCH同源基因，PTCHl和PTCH2；而SMO是一种7个氨基酸的跨膜蛋白，属于G蛋白偶联受体超家族成员，负责细胞内信号传导和靶基因的激活，SMO的活性对于果蝇和脊椎动物中Hh信号是必须的；PTCH是Hh转导途径的负调控因子，当PTCH1与Hh配体结合后，就可以将SMO从抑制状态释放，进而引发Hh信号级联反应；与PTCH1结合的Hh配体数量受到一些Hh结合蛋白的严密调控，保证整个信号通路的适度活性。(3)核转录因子GliHedgehog信号通路的胞内信号分子为Gli蛋白家族，Gli蛋白是分子量较大的多功能转录因子，定位于细胞核和细胞浆，将信号传送至核内；该蛋白家族成员只有在维持全长时才具有转录激活因子的功能，启动下游靶基因的转录；当羧基端被蛋白酶体水解后，就形成了转录抑制因子，抑制下游靶基因的转录。果蝇只有一种核转录因子，为Gli的同源基因；脊椎动物中已鉴定出3个成员，分别为Glil、Gli2和Gli3，其中Gli和Gli2是Hh通路激活因子，而Gli3具备激活和抑制的双向功能，但主要是转录抑制因子，个别情况下以激活因子存在来调节生长发育；由于Gli1既是Hh通路的激活因子，也是该通路激活的靶基因，因此将检测Gli1表达作为Hh通路是否激活的标志[9]。研究结果还显示了Hedgehog信号通路在肿瘤中异常激活的方式：正常情况下Hh信号通路在胚胎发育成熟后，进入失活状态，SMO蛋白的活性被抑制，但若该信号通路中Hh蛋白异常表达、SMO蛋白的抑制效应被解除，导致Hh信号通路的异常激活，Gli蛋白发挥转录激活因子功能，触发下游靶基因表达，引起细胞过度增殖，最终将导致肿瘤的发生[10]。研究发现多种肿瘤组织中，包括肺癌、乳腺癌等均存在着Hh信号通路的异常激活；在肿瘤中存在三种Hh信号通路异常激活的方式：第一种为Hh信号通路成员(PATH1或SMO)基因突变，导致Hh信号通路的异常激活，PATH1功能丧失性突变见于单发基底细胞癌、乳腺癌等，而SMO功能激活性突变在肝癌中被发现；第二种为自分泌型，即Hh配体既由肿瘤细胞分泌又作用于肿瘤细胞自身；第三种为旁分泌型，分为两种亚型：其一是肿瘤细胞分泌Hh配体后，作用于间质细胞，间质细胞通过其他通路再反作用于肿瘤细胞；另一为肿瘤间质细胞分泌Hh配体后，作用于肿瘤细胞，该种肿瘤细胞与周围间质复杂的相互作用为肿瘤细胞的生长增殖创造了有利的微环境[11]。还有研究报道了Hedgehog信号通路与非小细胞肺癌的关系：有大量的研究结果表明Hh在非小细胞肺癌，尤其是腺癌的细胞中高表达。据报道，EGFR突变型和野生型的NSCLC细胞系可通过自分泌途径阳性表达Hh，而且阳性表达下游转录因子Gli1。当把Gli1敲除后，所述细胞系开始变得对Hh信号通路抑制剂敏感，说明NSCLC可能存在其他的Hh信号通路异常激活模式，如通过旁旁分泌将信号转导给下游的转录因子Gli，代偿了药物对通路的抑制作用，使细胞继续生长增殖。有研究进一步表明，与其它肿瘤细胞不同的是，单独敲除Gli1对于非小细胞肺癌的生长无显著影响；如，通过靶向Gli1的shRNA和siRNA治疗后裸鼠皮下A549细胞的移植瘤体积与对照组相比没有显著差异，而同时抑制Gli1和Gli2则能显著抑本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗非小细胞肺癌的药物组合物，其特征在于，由Hedgehog通路抑制剂和自噬抑制剂组成，其中，/n所述Hedgehog通路抑制剂选自Vismodegib(GDC-0449)，GANT61，Mebendazole，SANT-1或RU-SKI 43；/n所述细胞自噬抑制剂选自氯喹(Chloroquine，CQ)，羟氯喹(Hydroxychloroquine)，3-MA，沃曼青霉素，巴伐洛霉素A-1，NH

【技术特征摘要】
1.一种治疗非小细胞肺癌的药物组合物，其特征在于，由Hedgehog通路抑制剂和自噬抑制剂组成，其中，
所述Hedgehog通路抑制剂选自Vismodegib(GDC-0449)，GANT61，Mebendazole，SANT-1或RU-SKI43；
所述细胞自噬抑制剂选自氯喹(Chloroquine，CQ)，羟氯喹(Hydroxychloroquine)，3-MA，沃曼青霉素，巴伐洛霉素A-1，NH4Cl或LY294002。


2.按权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物，其特征在于，所述Hedgehog通路抑制剂是Vismodegib(GDC-0449)。


3.按权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物，其特征在于，所述细胞自噬抑制剂是氯喹(Chloroquine，CQ)。


4.按权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中Hedgehog通路抑制剂和自噬抑制剂，采用序贯给药方式。


5.按权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物，其特征在于，所述的非小细胞肺癌包括EGFR突变型和野生型的非小细胞肺癌。


6.权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物，其特征在于，按下述方法制备：
(1)Vis...

【专利技术属性】
技术研发人员：鞠佃文，范佳君，戴诗瑄，章旭耀，陈伟，王一辰，孙夕林，申宝忠，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31