检测血液中抗体的方法及实施该方法所用的膜带和膜片组技术

用凝固血液样品在载体上，检测血液中抗体的方法，例在一片滤纸上的血斑，该滤纸与公知的洗脱和培养液及涂有与检测所需的抗体类型相应的抗原的膜带共同放入容器。培养和着色后进行阳性或阴性反应的检测。本发明专利技术也涉及用于该方法的膜带或膜片组以及洗脱和培养液，还有一种试验工具，包括完成试验时所必需的装置。（*该技术在2009年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种使用涂有与被测抗体相应的已筛选过的抗原的膜片的免疫吸印技术(Western吸印技术)检测血液中抗体存在的方法。本专利技术还涉及实施该方法所用的膜带和膜片组。检测抗体和抗原的许多方法已为人们熟知。例如将抗原用凝胶电泳法分离和检测〔例如十二烷基硫酸钠(SDS)〕用这种方法可能将几乎任何一种蛋白质混合物分解成各个组分。然而，由于已分离的蛋白质组分比较难以达到所使用凝胶基质内部，因此对它们作进一步分析受到了限制。为了克服上述缺点，用一膜片代替凝胶基质，使蛋白质能固定在膜片上，处在不能移动的状态。所谓吸印技术的优点是在膜片表面不出现处在不能移动状态的抗原的集中，因此易于对各个分离的抗原进行进一步的鉴定。以免疫吸印技术为基础的分析方法能用于鉴定抗体和抗原二者。用这种方法检测抗体的例子包括所有种类的接种疫苗，例如HIV-Ⅰ，HIV-Ⅱ、HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ。其他的例子为疟疾、血吸虫病、丝虫病、非洲锥虫病和laishmaniasis。还能检测过敏症产生的物质。常规免疫吸印技术使用的血液试样是经处理后分离出的血清。被分离出的血清与一典型的宽4-5毫米长120毫米的带状膜片接触，膜片涂有与被测抗体相应的已筛选过的抗原。在经过适宜的培养时间后去掉膜片，然后进行阳性反应试验。试验可用任何已知方法，例如着色。本专利技术是对已有的免疫吸印技术的进一步改进和简化，从而有效地缩短了分析时间。此外，分析是用整个血液来代替血清，例如是在已经转移至载体上且已凝固的血液样品上进行分析。因此本专利技术涉及权利要求1前序部分描述的一种方法，其特征在于带有血液样品的载体即血液样品在涂敷以后已凝固在载体上，与涂有筛选过的抗原的带状膜片，与洗脱和培养液共同放入容器中，经予定的培养时间以后，去掉膜片，再用本领域已知的方法做试验。根据本专利技术，已证明用一张滤纸作为载体，将血液样品吸收在滤纸上是合适的。用滤纸吸收血液样品是已知的，然而根据已知方法，第一步必须从血液样品中洗脱血清，然后在后续步骤中试验血清中的抗体的含量。由于用本专利技术能够洗脱和培养在一个步骤中完成，所以必然有效地简化了步骤和缩短分析时间。使用本专利技术的方法使分析时间缩短的另一个原因是使用尺寸特别小的带状膜片。膜带的最佳尺寸是宽1.1至1.8毫米和长10至100毫米。这就大大地降低了过程的费用，也大大地缩短了用于洗脱和将抗体转移到膜片上的时间，例如从3至4小时缩短到1至1.5小时。实施本专利技术的方法所用的最佳膜带为聚偏氟乙烯箔，按指出的尺寸切割成膜带，即其最好的宽度为1.1至1.8毫米和长度为10至100毫米，例如70至75毫米，其他合适的膜片材料例如为硝化纤维或酰胺。每一膜带能标上识别码标记，如直接在膜带上贴上流水号标签或条型码。为了实施该试验，可使用任何能盛膜片，带血液样品的载体以及洗脱和培养液的容器。如果需要同时进行试验的数量大，可使用带有许多样品池的架，在其中能装入相应数量的膜片和带血液样品的载体。这种带有许多样品池的试验架最佳实施例如图所示附图说明图1是本专利技术架的透视图;图2是相同架的局部剖面图;图3是架的两个盖之一的透视图;图4是与图2相似的剖面图，其中已装入膜片，带血液样品的载体和洗脱及培养液;图5是有15个涂有相同或不同抗体的膜带的膜片组;图6是如图5所示相同型式的膜片组，但每一膜带分成三部分。图7是图6膜片组的侧视图;图8是适于装入如图7所示膜片组的带有许多样品室的试验架的局部剖面的侧视图;图9是图8所示试验架的顶视图;图10是图8中沿a-a向的试验架的样品室剖面图;图11是适于装入如图8至10所示试验架样品室的具有许多片带有血液样品的滤纸载体条带。试验架由耐高压蒸煮材料例如聚甲醛制造的板1组成。在板上钻有许多平行通孔2，在孔中插入两端伸出板1的通孔管3。在图示实施例中板1的厚度为30毫米。孔2的直径为φ10毫米。80毫米长的管已插入孔中，在板1两边伸出25毫米，以使管的开口6离开板的表面，在每个管端部设置有一个同心硅橡胶密封圈9。开口6能用两个设置有与管开口相应的凹槽7的盖4和5密闭。图4所示已装入一片带血液样品的滤纸8和膜带10的管的剖面图。两管开口6a和6b用盖4、5密闭。在下面将用检测爱滋病毒抗体来描述本专利技术，但该过程应理解为同样适合于许多其他抗体或抗原。例1如图所示板块的每一孔中装入具有加强肋的聚偏氟乙烯膜片，膜片分别用公知的方法涂有筛选过的HIV抗原。膜带长70毫米，宽1.6毫米。使用的膜带用印刷有流水号的标签做上标记。然后将带有待试验人的血液样品滤纸片都切成尺寸为5×5毫米。这些滤纸片分别装入所示每一个管中，所有管的三分之二体积中都装有pH值为7.2的洗脱和培养缓冲剂以及盛有PBS(丁二酸-1)、0.1%非离子活性剂(Twen 20)、1%(w/w)兔子血清、0.05当量浓度(N)的NaN3。管的开口用盖4、5密闭，然后将整个膜片组放入旋转装置中，于是在每一样品池中的液体溅泼于带有筛选过的抗原的已装入的膜带上。洗脱和培养液约在一小时以后倒出，用蒸馏水清洗，再用HRP(蔊菜根过氧化物酶的共轭免疫蛋白G)培养3/4小时，随后在蒸馏水中清洗，用TMBS/DONS作用物着色，在完全着色后除去膜带，然后进行阳性或阴性反应检测。例2使用如图5所示的膜片组，包括许多膜带3，其连接端4与防水塑料组成的载体带1上的片状垂悬物2相连接。膜片带3涂有相同或不同的与被检测抗体相应的抗原。将膜片组装入一具有相同数目孔或通孔的架中，膜带间有相同间隔距离且与如图1至4所示架中的排相对应。洗脱和培养液以及带有已干燥的待试验人的血液样品的滤纸片同时装入所述孔或通孔中。试验做法与例1描述相同。例3图6和7所示一膜片组包括带有若干片状垂悬物12的支座或肋11，且在这些垂悬物12上配有相应数目的塑料膜带13，例如聚偏氟乙烯。每个膜带分成三部分13a、13b和13c，每一部分涂有与另外两部分不同的抗原，但应与待检测抗体相对应。因此每一膜带可同时适用于检测同一个人的血液试样的三种不同抗原。肋11的形状成管形，以便借助于由一个能插入该管状肋中的细杆所组成的工具(图中未示出)方便地取出膜片组。如图8至10所示使用了适于膜片组的试验架。膜片组包括一个具有许多两端为半园形的长槽样品室或样品池22的架21，其顶部是敝开的。样品池22之间距离根据片状垂悬物12和带有抗原的膜带13之间距离来设计。架21设有一纵向槽23，适合于容纳带片状垂悬物12的肋11以及膜片组的膜带。此外，架21设有另一纵向槽24，适于容纳供带血液样品滤纸用的支座上的肋31，见图11。所述支座包括一个带有涂有血液样品的滤纸33的具有许多片状垂悬物32的肋31。图10所示已插入供血液样品31、32、33用的支痛ご 1、12、13用的支座的样品池22的剖面图。将洗脱和培养液14装入样品池，再按例1提出的相同条件完成培养和后处理。在清洗和着色后，去掉膜片组，再读出试验结果。当然，这些例子仅仅是作为实施例，普通技术人员能容易地理解该方法并作出不同的变化。如上所述，该方法不仅可用于检测血液中的抗体，而且也可用于检测各种液体中的抗原。在后面这种情况下，可用带有筛选过的多系抗体或单系抗体的膜带。权利要求1.用免疫吸收技术(Wester本文档来自技高网...

【技术保护点】
用免疫吸收枝术（Ｗｅｓｔｅｒｎ吸印技术）检测血液中抗体的方法，使用涂有与被测抗体相应的筛选过的抗原膜片，其特征在于当涂敷在载体上的血液样品凝固后，将载体与涂有筛选过的抗原的膜带及洗脱和培养液一起放入容器中，经予定的培养时间后，去掉膜片，用公知的试验方法进行试验。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：科斯马弗朗希斯迪苏萨，
申请(专利权)人：安克斯公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]