本发明专利技术提出鉴别和计数表达选定特性的细胞的光学筛选法和仪器（１２０，１３８），其中细胞与一或多组且每组结合可与一或多类细胞（１６２，１７４）上的特异性分子结合的反应物，载玻片上已知体积中的细胞和中心球光学观测而鉴别并计数有无不同组中心球结合的细胞类型，细胞数与体积关联得绝对细胞数，并且用多份不同样品和反应物可得多份ＷＢＣ差另／绝对数，不同组中心球因大小，形状，颜色或其组合不同而可光学区别。（*该技术在2012年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术一般涉及鉴别和筛选细胞以获得研究或诊断用细胞绝对数和/或多份差别/绝对数的方法和仪器。更具体地讲，本专利技术涉及在已知样品体积中光学鉴别和计数具有特异性表面分子的细胞以获得以前用简单光学技术而不可能得到的感兴趣群体的4份差别和/或绝对细胞数。染色的细胞是常规细胞形态研究的基础。一般是将细胞放在载玻片上，然后染色，再通过显微镜对其进行光学和肉眼观察。由显微图像得到的光学或肉眼信息也可被用于自动扫描仪中，如图像分析仪。19世纪后叶，Ehrlieh报道了血细胞的生态学，生理学和病理学，其通过建立检测和区别白血病和贫血的方法将血液学带进了新纪元。Ehrlih观察到酸性，碱性和中性染料与细胞成份如白血细胞(WBC)的颗粒和胞核有专一反应。Romanowsky通过将多色染色用于细胞而进一步发展了血液学。目前，Wright染色(对Romanowsky染色的修饰)常被用于细胞的视觉检测。将外周血涂片染色并通常用于对异常形态变化的视觉检查。细胞类型的分类和细胞分化的阶段在鉴定疾病的方法中是关键因素。尽管可利用自动血液分析仪和流动血细胞计数器，但仍需要对细胞的直接视觉(显微的)评估。当在外周血涂片上发现异常时，免疫研究也是重要的。因此测定白血病的特殊亚类以便更好地选择治疗疾病方法并尽可能地给患者提供专一的预后是必要的。例如，在急性白血病中，外周血中的胚细胞显著增加。由于缺乏分化，鉴别这些未成熟的细胞是淋巴细胞还是粒细胞是困难的。如果快速繁殖的胚细胞亚群被发现是带T11受体，则白血病可分类为急性成淋巴细胞白血病(ALL)，T-细胞类。一般讲，T谱系ALL要比B谱系ALL的预后差。另外，也常常根据它们的分化程度，将这些白血病进一步分成亚组。组Ⅰ和组Ⅱ显示出在早期胸腺前体细胞上可见的抗原;而在组Ⅲ中表达的那些与在成熟T细胞上发现的表面抗原相似。免疫实验首先通过利用光学显微镜测定淋巴细胞的亚类而发展起来的。Coombs和其它人在1970年观察到了人淋巴细胞和羊血红细胞(RBC)间形成的玫瑰花结。后者研究发现，所有或至少大部分胸腺衍生的淋巴细胞(T-细胞)在适宜条件下都会显出玫瑰花结形成现象。这些研究利用了Ficoll分离的淋巴细胞并且采用光显微镜，用适宜的时间对分离的淋巴细胞进行了亚型分类。现在淋巴细胞亚类通常是在带有荧光标记的单克隆抗体的样品中对细胞进行荧光标记来测定。该荧光标记的单克隆抗体结合到表达抗原的细胞表面上的抗原上。细胞样品然后通过用荧光显微镜或高尖端流动血细胞计数仪分析。当用流动血细胞计数仪时，必须由专门训练的技术人员进行细胞样品的制备，数据采集和数据分析。流动血细胞计数仪包括激光和复杂的光学系统，高能量计算机和电及流体系统。流体血细胞计数仪的部件系统必须定期和经常地进行维护和校准。虽然目前流动血细胞计数仪是作为淋巴细胞亚类的测定的标准方法，但该方法仍有几个缺陷，这包括仪器价格昂贵，需要正确保持该义器的专门技能。淋巴细胞亚类也可利用由本专利技术的受让人，Coulter Electronics，Inc，开发的自动仪和方法来测定。一种改善的简单自动仪和用其的方法披露于US申请号587，646，1990，9，20提出，标题为“AUTOMATED ANALYZER AND METHOD FOR SCREENING CELLS OR FORMED BODIES FOR ENUMERATION OF POPULATIONS EXPRESSING SELECTED CHARACTERISTICS”，其是1987，3，13提出的同一标题的US申请号025，345的继续申请。该申请将电子视觉孔径原理，用于鉴定和/或计算所定义的胞群或形成的群体的选择生物分子的专一性和显微镜材料技术结合起来。自动分析仪可和特殊的溶解试剂和/或偶联到显微中心球或变化组分的支持物上的抗体合起来使用。第二个申请，US系列号285，856，1988，12，16提出，标题为“METHOD AND APPARATUSFOR SCREENING CELLS OR FORMED BODIES WITH POPULATIONS EXPRESSING SELECTED CHARACTERISTICS”，披露了从全血样品或部分全血样品直接筛分亚类。第三个申请，US号339，156，1989，4，14提出，标题为“METHOD AND APPARATUS FOR SCREENING CELLS OR FORMED BODIES WITH POPULATIONS EXPRESSING SELECTED CHARACTERISTICS UTILIZING AT LEAST ONE SENSING PARAMETER”，披露了多份或五份白血细胞差别，淋巴细胞亚类和由全血样品或带血红细胞和/或通过消除群体排除了白血细胞的群体和/或带有一或多种光或电参数的白血细胞亚类的样品进行的重叠测定。第四个申请，US No.07/525，231，1990，5，17提出，标题为“METHOD AND APPARATUS FOR SCREENING OBSCURED OR PARTIALLY OBSCURED CELLS”，披露了暗细胞分析，其是利用具有能结合到暗细胞上的专一抗体中心球产生由一个细胞群体到另一细胞群体的暗色细胞的辨别特征。上述四篇对比申请在此收入为参考文献。实现该专利技术的方法和仪器可用各种免疫反应，如包括反应物和形成的胞体或细胞的免疫反应。该专利技术也用于形成的胞体悬浮液分析，如其中的一些细菌和病毒。这里所用的细胞定义为动物或植物细胞，其包括细胞类细菌，真菌，它们是分开辨别的或在聚集中辨别的。细胞是能以独立单位起作用的生命物质的最小结构聚集。例如，细胞可是人体血红细胞(RBC)和WBC群体，来自组织或血样的癌细胞或其它异常细胞。形成的胞体定义为一些细菌和病毒，细胞和形成的胞体适宜标记。这样它们就能按与鉴别人体血细胞的同样方式，通过本专利技术的方法和仪器进行光学鉴别。虽然已在上面申请中使用的术语“反应物”定义为溶解剂和单克隆抗体，但反应物包括各种试剂，它们可检测和与细胞或形成的胞体上的一或多个专一分子反应。一些实例如下反应物 专一性分子抗体 抗原药 药物受体激素 激素受体生长因子 生长因子受体这些反应物可偶联或结合到细胞上的专一分子上。这些反应物是起化学反应的部分;但这些反应物不必进行化学变化。先有技术中披露了用光学显微镜和抗体标记的中心球测定淋巴细胞亚型的方法。该方法来自加利福尼亚，Richmond的Bio - Rad实验室。该方法可鉴别T和B淋巴细胞。抗体标记的中心球被用来结合到显有所需表面抗原的细胞上。两种不同颜色的抗体标记的中心球被用来区别T和B淋巴细胞。显微学家通过抗体标记中心球结合到细胞上来鉴别对具体抗原呈阳性的细胞。没有抗体标记的中心球结合到其上的细胞代表了阴性细胞群体，其表达不令人感兴趣的抗原。但该方法受到这样的限制，即淋巴细胞必须利用分离介质，如Ficoll - Hypaque，首先从全血样品中分离出来。粒细胞污染可导致假的非阳性细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
光学筛选和计数显微细胞的方法，其特征在于：提供包括多个细胞的样品；将至少第一部分细胞与至少第一组其上结合有对至少第一类存在于至少一类细胞上的特异性分子具有专一性的至少第一反应物的中心球混合形成样品混合物；将特定体积的样品混合物涂到载玻片上；用显微镜观测至少某些细胞以至少鉴定并至少计数结合了第一组中心球的细胞存在数；以及将该细胞数与该特定体积关联起来而得绝对细胞数。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：RF布伦豪斯，CM哈杰科，T拉塞尔，WH科特，
申请(专利权)人：科特公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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