内毒素稳定剂，内毒素组合物和内毒素的分析方法技术

本发明专利技术提供了一种内毒素稳定剂，它能在较长时间内，在稳定状态下保持样品或参考标准中的内毒素活性，以及制备每瓶之间差异很小的内毒素参考标准，该内毒素参考标准在长时间内特别是在溶液状态下能保持稳定且能重复使用。本发明专利技术还提供一种包含上述内毒素稳定剂和内毒素的内毒素组合物以及利用上述物质分析内毒素的方法。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及样品或参考标准中所含的内毒素的稳定。例如，它涉及内毒素参考标准或样品中所含的稳定内毒素的内毒素稳定剂，该内毒素稳定剂是用于利用鲎变形虫状细胞的溶解物而发生的鲎反应的内毒素分析过程中的，还涉及包含内毒素和内毒素稳定剂的内毒素组合物和用其分析内毒素的方法。特别的，本专利技术涉及一种改进方法，它能在保持鲎反应中内毒素的活性的恒定分散状态下，对内毒素参考标准进行定量分析，进一步说，它能用于需要例行处理的临床试验的样品，主要是血液透析(人工透析)产生的透析液，在保持透析液的内毒素活性稳定和可进行相应的医疗处理的情况下，进行安全处理的内毒素试验。现已知的内毒素分析方法是利用鲎变形虫细胞的溶解产物(以下简称为溶解产物)，它是一种热原物质。这种方法被作为一种权威方法取代了兔热原试验。这种试验方法依据由于微量内毒素的存在致使溶解产物凝固的反应原理(以下称为鲎反应)。后来的生化研究表明这个反应包含一些凝固因子的逐步激活(附图说明图1)。在此反应中起触发器作用的内毒素是一种革兰氏阴性细菌的细胞壁的外膜成分，被称为脂多糖(LPS)。它是一个亲水脂物质，在其分子中既有一个亲水性的糖链，又有一个疏水性的脂链A部分。在正常情况下，LPS的亚基形成一个借助憎水键，离子键结合，分子量为108道尔顿的大分子。现已知这些亚基与蛋白质和与之辅合存在的脂类一起形成一个复杂的分子团。这个分子团的结构极大地影响了鲎反应中LPS的反应活性(以下简称为鲎活性)，并存在一个具最大活性和分子团结构的分子大小。当加入阴离子表面活化剂如胆酸或脱氧胆酸，其结合完全被分开而成为单体或二聚体，因此鲎活性完全丧失。一个不稳定的分子团不仅导致分析数据的变化，而且损害内毒素溶液的稳定性。1981年，联邦食品和药品管理局(U.S.A.)设法通过乳糖，聚乙二醇代替常规添加清蛋白以稳定内毒素活性的方法来提高由大肠杆菌E.Coli 0113菌株产生的内毒素参考标准。由此而获得的参考标准作为美国药典(USP)的参考标准EC-5，通过FDA分发下去。1988年，日本全国卫生科学学院设法用甘露醇作为大肠杆菌E.Coli UKT-B产生的内毒素参考标准的填充物来达到稳定的内毒素活性的目的。如此获得的产品作为日本药典的参考标准被广泛使用。然而，美国药典和日本药典的参考标准在试验前都应被稀释，因为它们所含内毒素分别高达10,000内毒素单位/每瓶和16,000内毒素单位/每瓶。因此稀释过程所产生的误差不可避免，这样严重损害了作为定量分析所要求的高准确性和高重复性。也就是说，制备低浓度的内毒素参考标准的方法将更为可取。因此，需要提供一种稳定的，高重复性的添加物。目前还知道当内毒素溶液溶于水中并贮存时，该水溶液的内毒素活性在短时间内就会降低，特别是在低浓度情况下更如是。因此一般是在使用前立即配制内毒素溶液。使用后剩余物由于它的不稳定性而被废弃，这样不仅需要一个麻烦的后处理过程而且导致经济上的损失。因此，人们试着把内毒素以冷冻干燥状态贮存，这样就解决了在其水溶液中所遇到的上述问题理。然而，另一问题又出现了，它增加每瓶之间的差异。也就是说，在低浓度下，不同瓶之间由于内毒素粉末的分散，其含量变化很大。又产生的另一个问题是冷冻干燥产物在某些情况下使用时不能完全溶解。医学界已知在感染性疾病，尤其是脓毒症的症状诊断，以及它的治疗，推测的断定，治疗后的监视等过程中体液中内毒素的常规控制非常重要。而且它对于血液透析病人在其透析的安全处理中也是必不可少的。近年来，有人指出透析液中的内毒素活性不稳定并随时间推移而降低。因此准确地判定透析液中内毒素含量是困难的，这就严重地妨碍了透析液的恰当处理。本专利技术的目的是提供一种内毒素稳定剂，它能在较长时间内保持样品或参考标准的内毒素活性处于稳定状态，并制备一种每瓶之间差异很小的内毒素参考标准，特别是，在溶液状态下能长时间保持稳定并能重复使用，以及提供一种包含上述内毒素稳定剂和内毒素的组合物和分析内毒素的方法。通过下面的试剂可达到本专利技术的目的。1)一种内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖以及螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成份；2)如上1)所述的内毒素稳定剂至少包含氨基醇和多元醇；3)如上1)或2)所述的内毒素稳定剂特征在于所说的多元醇为甘油或其衍生物作为有效成分；4)如上1)至3)所述之一的内毒素稳定剂进一步包含聚乙二醇作为有效成分；5)如上1)所述的内毒素稳定剂至少包含多聚蔗糖，碱土金属盐和/或聚乙二醇。6)至少包含内毒素和内毒素稳定剂的一种内毒素组合物，其中内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖和螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分；7)如上6)所述的内毒素组合物以干物质或者液体形式存在；8)一种内毒素分析方法，包含加入到样品中用来稳定样品所含的内毒素的内毒素稳定剂，其中内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖和螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分。9)如上述8)所述的内毒素分析方法是运用鲎反应物。10)如上述8)所述的内毒素分析方法特征在于所说样品是血液透析的透析液。11)分析内毒素的药盒其至少包含鲎反应物和内毒素稳定剂，其中内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖和螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分。图1，示鲎变形虫细胞溶解产物与内毒素和(1→3)-L3-D-葡聚糖发生反应的机理。本专利技术内毒素稳定剂特别优选的实例如下(1)一种内毒素稳定剂其至少包含氨基醇，多元醇和/或聚乙二醇作为有效成分。(2)一种内毒素稳定剂其包含甘油或它的衍生物作为有效成分。(3)一种内毒素稳定剂其至少包含一种螯合剂或非离子表面活性剂作为有效成分(以下简称为稳定剂(3)]。(4)一种内毒素稳定剂其包含由氨基醇，螯合剂和非离子表面活化剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分和聚乙二醇。(5)一种内毒素稳定剂其包含聚乙二醇，碱土金属盐作为有效成分。(6)一种内毒素稳定剂是包含多聚蔗糖，聚乙二醇和碱土金属盐作为有效成分。本专利技术的内毒素稳定剂能够适用作内毒素分析的参考标准和稳定一般分析样品中所含内毒素。稳定剂可以任意方式使用。它可以固体或者溶液形式使用，优选的是水溶液。当它以固体形式使用时，可定量称取并加入到样品中。这样，以固体形式存在的定量的稳定剂可预先放置到容器中，这样操作很方便。当稳定剂是溶液形式时，调节溶液PH至4-9之间，更优选的范围为6-8。当本专利技术内毒素组合物用作定量分析内毒素的参考标准时，应预先知道组合物中内毒素的含量。当内毒素组合物用于其它目的时，例如，定性分析，不需预先知道内毒素的含量，参考标准的内毒素含量通常在内毒素组合物配制之前就已知道，虽然它也可以在配制之后确定。虽然内毒素可以无限制从任何来源产生，但是它一般利用公众已知的方法从革兰氏阴性细菌如大肠杆菌EColi和属于沙门氏菌属的微生物而制得。本专利技术的内毒素组合物是将稳定剂与上述内毒素制备物的含水悬浮液或同样产物的冷冻干燥物混合而获得的溶液或冷冻干燥物形式。制备时，内毒素组合物的各组分可以任意顺序加入。当悬浮于水中时，根据本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种内毒素稳定剂，包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖和螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：田村弘志，田中重则，明田川纯，小田俊男，
申请(专利权)人：生化学工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]