使用蛋白质和抗体的检测制造技术

免疫球蛋白上的蛋白质结合位点由封闭剂，例如标记物与其疏水偶联而封闭，这就导致了可用于免疫检测的检测制剂，其中免疫球蛋白和蛋白质可以同时但又独立使用。该制剂可以用于对ＩｇＧ和疏水标记的ＩｇＡ或ＩｇＭ、抗－ＩｇＡ－ＩｇＧ或抗－ＩｇＭ－ＩｇＧ中的一种同时进行测定。标记物优选染料和色素。这些标记物封闭ＩｇＧ上的蛋白质Ａ的结合位点，在使用时包括加入被标记的蛋白质Ａ。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测试剂、方法和设备。更具体而言，涉及在一次检测中以抗体和蛋白质作为鉴定物，并利用它们之间的特异性相互作用的免疫检测。与本专利技术相关的
技术介绍
样品的免疫检测已经被使用很多年了。这类免疫检测可以从样品流体中检测出是否存在有害物质，例如，可以检测体液中是否存在细菌，水中是否有污染物。它们还可以探查体液中是否存在着抗体，从而指示是否有存在着致病物，癌细胞或自身免疫疾病。虽然很多的这类检测都对以往的确定样品中存在着的物质的方法有着明显的改进，但是，建立快速和灵敏的免疫检测仍然是所追求的目标。现在使用的几乎所有免疫检测中共存的缺陷是速度慢(5～30分钟)，或速度较快而灵敏度不足(或两种缺点同时存在)。当对疾病进行检测时，灵敏度的降低是无法接受的，而且现有的那些最灵敏的检测也显得麻烦和缓慢。动物在不同的疾病阶段可以产生对某一抗原为特异性的各类抗体，例如IgA，IgG及IgM。在不同的时间，某类或某些类的抗体会占主要地位。最理想的是在单一检测中可确定对某一抗原为特异性的各类抗体。这种检测将是高度灵敏的，因为它将确保对占主要地位的那类抗体的探查。然而，迄今以前的已知检测均无法达到这种灵敏度，其主要原因是在检测试剂之间发生的不利的特异性结合和/或聚合，以及在检测试剂与被分析物之间的不利的结合。为了确定样品中的某一类的抗体，现有的检测都是先将不需检测的抗体用耗费时间的方法从样品溶液中选择性地除去，然后再对目标抗体进行分析。这种方法可见于1989年5月9日授与Cambiaso等人的第4,829,012号美国专利。在该专利的方法中，先进行选择性的去除，再对目标抗体引起凝集并测定其凝集度来测定该抗体。因此，由于这种问题，就使得大多数的检测只能对单一种类的免疫球蛋白，例如IgG进行测定。要发展在一次测定中就可以完成对某一抗原为特异性的任何一种或所有IgA、IgG或IgM的测定的检测，所遇到的主要问题是常规的作为捕捉不同种类抗体的结合配体的蛋白质和抗体还会自己相互结合。具体而言，当蛋白质A与IgG相结合，则这一结合可以用来确定IgG的存在；如果要确定是否存在着IgA或IgM，那么就要使用抗-IgA或抗-IgM的IgG，因此，根据已知技术，如果要同时用蛋白质A来确定IgG，用抗-IgA和/或抗-IgM的IgG来确定IgA或IgM，就会是很复杂的，因为作为检测试剂的蛋白质A，抗-IgA及抗-IgM之间会相互结合。因而，根据已知技术用蛋白质A和IgG类的结合配体在样品中检测某一物质就会是很复杂的。免疫检测中，一般都采用标记物以确定抗体与被分析物之间的结合，常用的是放射性同位素，但由于各种原因，例如安全性，使其日益不受欢迎。在免疫检测中作为标记物的还有荧光团、酶、化学发光物。1983年2月15日授与Gribnau等人的第4,373,932号美国专利描述了确定免疫化学反应成分的试剂及测试盒，其中，被标记的一种或更多种的物质连结到疏水性染料或色素的分散水液的液滴上，或连结到用这些色素或染料包被的聚合物核团上。使用这种染料可以有很多好处，例如，安全、花费小。但是，在免疫检测中尚未广泛采用染料，其原因可能是对染料的测定问题。本专利技术的目的本专利技术的目的是提供对同一被分析物的各类特异性免疫球蛋白同时进行测定的产品及方法。本专利技术的有益效果通过使用本专利技术的试剂，提高了免疫检测的灵敏度，并使这类免疫检测的操作更快。本专利技术还扩展了特异性结合蛋白质，例如蛋白质A和蛋白质G、染料及色素等在免疫检测中的使用范围。本专利技术的技术方案根据本专利技术的一个方面，提供了检测试验用的检测试剂。该检测试剂包括某一类的对选定分析物产生特异结合的免疫球蛋白。该检测试剂还包括测定物，例如，对该类免疫球蛋白的Fc区域的结合位点发生结合的蛋白质。与免疫球蛋白疏水偶联的封闭物，以封闭免疫球蛋白的结合位点与蛋白质的相互作用。这样，可以在免疫检测中同时使用蛋白质和免疫球蛋白，例如，可以同时测定数种的免疫球蛋白。免疫球蛋白和蛋白质中的任何一个或两者同时可被标记。上述的封闭物与免疫球蛋白偶联。以封闭结合位点与蛋白质的相互作用。封闭指的是对结合位点与封闭物之间的相互结合作用的物理性干扰，例如，对结合位点的一部分或全部进行掩盖或遮挡，干扰蛋白质与结合位点的接触(立体构型或电荷性)，以及其它的对结合的干扰。封闭物一般包括通过共价或非共价力与免疫球蛋白相结合的任何分子。优选的封闭物质，具有疏水区并能在免疫球蛋白的Fc部分与封闭物之间发生疏水结合。最优选的是那些可起双重功能的封闭物，既封闭免疫球蛋白Fc区的结合位点又能对该免疫球蛋白进行标记，从而在本专利技术的结合检测中测定该免疫球蛋白的存在。免疫球蛋白可与封闭物，例如与标记的颗粒分散液相联合。通过将免疫球蛋白与封闭物相混合，就可以在它们之间形成高强度的非共价疏水键。因此，免疫球蛋白就被标记了，并且也封闭了其与蛋白质的相互作用。优选的结合位点是免疫球蛋白Fc部分的疏水区，更为优选的结合位点是免疫球蛋白恒定重II部分疏水区。因此，封闭物与免疫球蛋白的结合方式就可以不影响免疫球蛋白的结合特异性。优选的免疫球蛋白是抗-IgA-IgG和抗-IgM-IgG。优选的蛋白质是蛋白质A。根据本专利技术的另一方面，提供了一种用于免疫检测的装置。该装置包括具疏水区的支持物。免疫球蛋白通过其Fc结合位点与该支持物的疏水区之一间的疏水偶联而偶联到该支持物上。该支持物上还结合有能与免疫球蛋白Fc区结合位点相结合的蛋白质，但是，在本专利技术的支持物上的蛋白质和免疫球蛋白之间并不发生疏水偶联。以上所述是可以实现的，例如，根据本专利技术的方法，用以上所述的支持物作为封闭物，将免疫球蛋白的结合位点对蛋白质封闭。免疫球蛋白与支持物之间的相互作用干扰了蛋白质与免疫球蛋白结合能力。因此，可先将免疫球蛋白施加到支持物上，然后，将蛋白质施加到支持物上。在施加免疫球蛋白和蛋白质的步骤中，可在其中的任何一步之后，或两步之后都进行水洗。这样，免疫球蛋白和蛋白质就会被疏水偶联地结合到支持物上，但它们之间不发生相互作用，不发生疏水偶联。同样，它们各自都可与样品中的被分析物发生特异性作用。优选的支持物是片、珠粒、试验室设备的表面、不溶于水的颗粒物、多孔膜以及诸如染料颗粒和色素颗粒等标记物。根据本专利技术的另一方面，提供了一种在有蛋白质存在的条件下对某类免疫球蛋白的结合配体进行捕捉的方法。该方法包括使可能含有结合配体的样品与同免疫球蛋白Fc区结合位点相结合的蛋白质和免疫球蛋白同时相接触。然而，免疫球蛋白的结合位点被封闭以防止蛋白质与免疫球蛋白之间的相互作用。免疫球蛋白和蛋白质可以以游离方式存在于溶液中，其中之一或者它们两者也可以与支持物偶联，优选疏水性偶联。如果与支持物发生偶联，则优选的支持物选自染料颗粒和色素颗粒。根据本专利技术的另一方面，提供了一种检测试剂的制备方法。该方法包括对免疫球蛋白上面的与预定的分析物发生特异性结合的结合位点进行封闭，防止该位点与蛋白质的结合，然后将该免疫球蛋白与蛋白质一起使用。例如可以将该免疫球蛋白与蛋白质溶液一起按单一检测试剂提供。这些检测试剂也可以分开装入同一试剂盒中。优选的是用封闭剂与免疫球蛋白疏水偶联来封闭住其结合位点，而最优选的是将标记物如染料或色素与免疫球蛋白发生疏水偶联本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测试验的检测制剂，包括：能与预定的被分析物特异性结合的某类免疫球蛋白；与该类免疫球蛋白的Ｆｃ区结合位点相结合的蛋白质；和与该免疫球蛋白疏水偶联的并且封闭该免疫球蛋白的蛋白质结合位点的封闭剂。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：布伦特L多维尔，利力伯斯K登汉姆，沃尔特凯尔，亚力山大M卡利伯诺夫，
申请(专利权)人：英彻塞尔公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]