基本上不具有激动剂活性的C5a受体拮抗剂制造技术

人Ｃ５ａ肽类似物，其中所述类似物是基本上不具有激动剂活性的Ｃ５ａ受体拮抗剂。２．权利要求１的人Ｃ５ａ类似物，其中所述类似物包含不同于相应人Ｃ５ａＣ－末端区的Ｃ－末端区，因为它包含半胱氨酸残基，并且在其Ｃ－末端截短至少两个氨基酸残基。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫学领域，特别涉及哺乳动物补体介导疾病和炎症的治疗。专利技术背景炎症是局部保护反应，由损伤引起，用来除灭，稀释或阻塞有害试剂和损伤组织。它包括复杂的一系列反应，包括动脉、毛细管、小静脉的扩张，伴随着增加的血管渗透性，增加的血液流速，和体液及血浆蛋白质的渗出。这些过程经常很快接着白细胞对血管内壁的粘连，接着是细胞流入周围组织。已证明抗外源物质的主要免疫防御机理的补体系统影响每一构成炎症应答的因子。通常补体包括一套减少组织和血液中微生物和其它抗原的蛋白质。这一任务或者通过单独的补体成分或者通过补体成分与抗体或与表达补体受体的细胞共同作用来完成。更特别地，该系统由大约30种血浆蛋白，其相应的细胞受体和几种膜调节蛋白质组成。Kinoshita，Immunology Today，12291-300(1991)。补体系统的激活作用，例如抗原-抗体复合物或细菌表面结构对补体系统的激活作用，触发补体成分蛋白酶裂的裂解和装配蛋白发生的放大级联，其最终导致外源抗体的消灭和最终减少。Muller-Eberhard，Annu.Rev.Biochem，57321-347(1988)。补体系统激活作用产生几种生物活性肽。含有74个氨基酸且Mr为11000的糖蛋白C5a是由补体的第五成分C5的N-末端通过C5转化酶的蛋白酶解的裂解而产生的。Nilsson等，J.Immunol.114815-822(1975)。C5a生物性质蔓延急性和慢性炎症过程中所涉及的大量细胞和组织。Hugli，CRC Crit.Rev.Immunol.，1321-366(1981)。这些性质中的许多是有利于免疫的。已发现C5a介导应答各种病理状态的宿主防御机理。C5a参与一般与炎性反应相关的多种特异生物功能，例如平滑肌收缩，血管渗透性的增强，当注入人皮肤时风块和潮红的产生，组胺由肥大细胞释放，诱发氧化性爆发集落和溶酶体酶自多形核白细胞(PMNLs)释放。C5a刺激来自每种循环白血细胞的可测反应，包括嗜碱性白细胞，嗜酸性细胞，单核细胞和嗜中性白细胞。Hugli，上文；Bautsch等，Immunobiol，18541-52(1992)。还进一步证明C5a是一潜在的化学引诱物。Fernandez等，J.Immunol.120109-115(1978)。这种蛋白质是引诱PMNLs如炎性位点噬细胞的中枢刺激物。当补体定向于抗一合适的靶物如侵入微生物或肿瘤细胞时是有益的，但如果激活不得当，则有明显致病潜力。过敏毒素，例如C5a，在一些炎性疾病如成年人呼吸窘迫综合症和类风湿性关节炎发病机理中作为致病和恶化因子。Bautsch等，Biochem.J.288261-266(1992)；Haslett等，J.Immunol.1423510-3517(1989)。特别是，患者体内可检测到组织中C5a的异常存在会引起类风湿性关节炎，骨关节炎，牛皮癣，和非贲门肺水肿。Hammerschmidt，J.Amer.Med.Soc. 244199-(1980)。已发现C5a是由凭借包括炎性白细胞的募集现象和刺激作用以及抗体产生的加强的增加活性的补体激活产生的主要炎性间介器。参见Mollison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86292-296(1989)。假设炎症的体内或药理学控制是依赖于趋化性的调制。已认识到有三种抑制作用的水准发生，它们是(1)对趋化性刺激物应答的白细胞的抑制作用；(2)防止化学吸引素产生；和(3)化学吸引素的失活。另外，因为C5a通过与一些人细胞如嗜中性白细胞，嗜酸性白细胞和单核细胞衍生细胞膜中发现的特异C5a受体结合而产生各种功能，C5a介导趋化性的抑制作用，特别是C5a受体拮抗剂的设计已引起相当的关注。Cleary等人在U.S.4772584中公开了由链球菌A属分离的肽，它通过从C5a C-末端切割六个氨基酸肽来抑制C5a对PMNLs的结合。Hahn在U.S.4692511中公开了C5a的肽受体拮抗剂，它含有必需的核心四肽Tyr-Asp-Gly-Ala(SEQID NO.1)或Asp-Gly-Ala-Tyr(SEQ ID NO.2)，或核心三肽Asp-Gly-Ala，它具有C5a阻断活性。Abbott Laboratories在U.S.5190922，WO 90/09162和92/11858公开了各种寡肽，其与C5a受体结合并且主旨调整过敏毒素活性。但是，这些分子中的一些被证明保持明显的激动剂活性。参见Mollison等人在Progress in InflammationResearch and Therapy，Birkhauser Verlag，Basel，(1991)，pp.17-21中的“C5a Structural Requirements for Neutrophil Receptor Interaction”，Kawai等，J.Med.Chem.35220-223(1992)；Kawai等，J.Med.Chem.342068-2071(1991)；和Or等J.Med.Chem.35402-406(1992)。因此非常需要基本上无激动剂活性的有潜力和治疗效果的C5a受体拮抗剂。专利技术概要本专利技术的一个方面涉及人C5a肽类似物，它是C5a受体拮抗剂且基本上不具有过敏毒素和激动剂活性，这种类似物的衍生物，以及类似物及衍生物的二聚体形式。编码肽(即其类似物及其衍生物)的DNA分子，质粒，载体和DNA分子转化的宿主细胞，并且也提供了制备C5a类似物的方法。含C5a类似物，其衍生物或二聚物的药物制剂被有益地应用在治疗哺乳动物的C5a介导炎性症状和疾病的方法中，并且作为防止这种炎症的预防剂。本专利技术的另一方面涉及特异于C5a类似物及其衍生物的抗体，它基本上不具有与人C5a的交叉反应活性。这些抗体被用来检测或计量受治疗者(预先给药相同物质)体内循环C5a类似物和衍生物，以及用来改变，例如中和，体内C5a类似物和衍生物的活件。附图简要说明附图说明图1是说明通过寡核苷酸偶联合成编码人C5a合成基因的流程图；图2是pB-6/C5a质粒图谱。优选实例的详细说明本专利技术C5a肽类似物是基本上不具有激动剂活性的C5a受体拮抗剂。术语“C5a受体”在本领域公知是指C5a，其去ArgC5a降解产物，和本专利技术拮抗剂与之结合的人血细胞如PMNLs和单核细胞表面上的位点。参见例如U.S.5177190；和Oppermann等，J.Immunol.151(7)3785-3794(1993)。C5a通过羧肽酶B-类酶在人血清中酶促转化为去ArgC5a，去ArgC5a是人体内主要生理终产物。Chenoweth等，Md.Immunol.17151-161(1980)。术语“拮抗剂”是指马上公开的肽是C5a抑制剂。即它们阻碍C5a对C5a受体的结合。尽管不趋向于结合任何特别理论，申请人相信C5a类似物是C5a竞争抑制剂，它们与C5a竞争与C5a受体结合。本专利技术C5a类似物的拮抗作用可以以Seligmann等人在Agents and Action21375-378(1987)中公开的，实施例7详细描述的钙升高测定中的IC50进行定量测定。IC50定义为100p本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：J范奥斯特卢姆，WC波亚，NG加拉卡托斯，JV佩帕，
申请(专利权)人：诺瓦蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：