具有下式结构的化合物： ＊＊＊。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
技术介绍
专利
本专利技术涉及共价连接到聚合物颗粒试剂上和用作抗原的新氨甲酰氮化合物，包括其制备，特别涉及具有亲核特性的氨甲酰氮化合物。
技术介绍
的描述在美国专利号2,948,718中对氨甲酰氮进行了描述。 它是用作为止痛和避免或消除抽搐的抗惊厥药物，当用该药如氨甲酰氮对病人进行治疗时，监测病人血清中药物的水平是重要的。在美国专利号3,221,011中描述的各种氨甲酰氮即二苯并氮杂卓衍生物是用于肠内或肠胃外给药的药物制剂，它们具有下面的通式结构 其中，Am可以表示为基团-NH2，一甲基氨基，一乙基氨基，一正丙基氨基，一异丙基氨基，一正丁基氨基，一异丁基氨基，或一叔丁氨基基团，二甲基，二乙基，二正丙基，二异丙基，二正丁基，因为它没有合适的亲核部分，所以它不是适合于连接到美国专利号为4,401765和4,480,042的亲电子环氧化物聚合物颗粒上的候选物。本专利技术的目的是提供用于监测病人血清中氨甲酰氮的免疫测定中共价连接到颗粒上的新氨甲酰氮化合物，本专利技术的另一个目的是提供用于竞争免疫测定和测定病人血清中氨甲酰氮的其它免疫测定的氨甲酰氮抗体产生的氨甲酰氮免疫原，本专利技术的最后目的是提供新氨甲酰氮化合物的制备方法。专利技术概述本专利技术的目的是提供具有下列通式 的适合于共价连接到颗粒试剂上或由蛋白质性质的物质上的新氨甲酰氮酰肼化合物，本专利技术还提供了用于氨甲酰氮免疫原产生的适合于连接到蛋白质上的新氨甲酰氮酸化合物，本专利技术的氨甲酰氮抗原具有下列通式结构 其中X是C＝O，CH2，或SO2；Y是C＝O，CH2，SO2；R是烷基和P是蛋白质或半抗原。本专利技术还包括可以用于制备氨甲酰氮抗原的方法，方法一般包括步骤(i)在基本上无氧的环境中，使三光气与亚氨基均二代苯烯反应，(ii)在基本上无氧的环境中，加入一水合肼并使其回流，其回流时间为足以使具有上述结构式的氨甲酰氮酰肼化合物形成沉淀，(iii)将沉淀过滤，(iv)优选在碱存在下，使纯化的沉淀与选自于琥珀酸酐、溴代乙酸、和卤素取代的脂族磺酸基团反应，反应时间为足以使具有下式结构的 氨甲酰氮酸形成，其中X选自于C＝O，CH2，和SO2.，Y选自于C＝O，CH2，和SO2，和R是烷基，(v)溶解氨甲酰氮酸，并在碱存在下，使溶解的氨甲酰氮酸与碳酸琥珀酰亚氨基酯反应来合成氨甲酰氮-NHS酯，和(vi)使氨甲酰氮-NHS酯与蛋白质的缓冲水溶液反应。或选择代替使溶解的氨甲酰氮酸与碳酸琥珀酰亚氨基酯反应和后来的(v)-(vi)步骤，通过选择下列步骤可以进行该方法(v)将氨甲酰氮酸和水合羟基苯并三唑溶解在溶剂中，(vi)使混合物与二环己基碳化二亚胺混合，得到活化的氨甲酰氮-羟苯并三唑酸，和(vii)使活化的氨甲酰氮-水合羟基苯并三唑酸与蛋白溶液反应。本专利技术进一步包括氨甲酰氮颗粒试剂和在免疫测定中使用该试剂的方法。优选的实施方案描述本专利技术的新氨甲酰氮酰肼化合物为共价连接到亲电聚合物颗粒上提供了在此以前没有得到过的优异的亲核氨甲酰氮。任何亲电颗粒试剂都可以共价连接到本专利技术亲核氨甲酰氮化合物上。优选的颗粒试剂是聚合物颗粒，并最优选具有内芯和外壳的聚合物颗粒，其中内芯是在氘化钠线型波长下测量具有不少于1.54折射率的聚合物，外壳是烯化未饱和单体的聚合物，该单体具有能与生物特性的化合物如本专利技术的氨甲酰氮酰肼化合物的互补官能团反应的官能团。例如，聚合物颗粒的外壳聚合物的官能团通常可以是环氧，羧基、氨基、羟基和醛。用于描述本专利技术的官能团将是环氧官能团，这仅是为了说明本专利技术的优选方案并不是为了限定可以附着到本专利技术氨甲酰氮化合物上的颗粒试剂的范围。此外，特性官能团例如，环氧官能团，聚合物表面或外壳可以进一步包括其它烯化未饱和单体，其量足以产生所需特征的水不溶聚合物颗粒。外壳可以是均聚物，在内芯存在下，它可以通过聚合作用而形成，并且，如果不是均聚物，应当包括不大于10、优选不大于5份重量内芯的单体，优选用于本专利技术的聚合物颗粒直径可以大约在0.03-0.1μm。直接或通过蛋白质性质的物质使颗粒试剂共价连接到生物特性的化合物或其抗体上。被用于制备聚合物的单体和其制备方法被描述在美国专利4401765和4480042中，这两个专利的内容在此引入作为参考，优选对于具有环氧官能团颗粒的单体包括异丁烯酸缩水甘油酯、丙烯酸缩水甘油酯、乙烯基缩水甘油基醚，和甲代烯丙基缩水甘油基醚。亲核氨甲酰氮酰肼和氨甲酰氮酸(CBMP-酸)的合成和其免疫原通常进行如下 下列表1中列出了用于实施例1和2的试剂。表I </tables>实施例1三光气与亚氨基均二苯代乙烯反应1〕将0.9650g(0.0050mol)化合物I(亚氨基均二苯代乙烯)，0.5441g(0.00183mol)化合物II(三光气)和30ml作为溶剂的甲苯加到配备有回流冷凝装置、附加漏斗和氮气入口管的100ml三颈烧瓶中。搅拌混合物并在氮气氛下使其回流超过2小时，直到溶液变成淡黄色为止。如果回流2小时后颜色没变化，应当加入40mg三光气，并使其回流1小时以上。将含有化合物III的溶液冷却至室温。2〕伴随着搅拌，将1.250g一水合肼(0.02497mol)加到含有上述溶液的三颈瓶中，然后，在氮气氛下使反应物回流2小时，并在室温下，将其搅拌2小时，然后，将混合物冷却至室温，产生完全的沉淀，将沉淀过滤得到白色(淡黄色)固体化合物IV。3〕将步骤2〕中固体沉淀物，即化合物IV溶解在30ml氯仿中以纯化化合物IV，用IN HCl(10ml×3)萃取氯仿。产物是在HCl溶液中。用氯仿(10ml×3)洗涤HCl溶液，然后将2N氢氧化钠加到HCl溶液中并将PH调至11。用氯仿(15ml×3)萃取碱溶液，用硫酸钠(2-3g)干燥氯仿溶液。通过旋转蒸发除去氯仿并剩下纯化的产物，即化合物IV。产物经真空干燥后，其重量是0.9661g，表明从亚氨基均二苯代乙烯得到化合物IV的产率是76.9％。具有附加胺官能团的化合物IV(酰肼氨甲酰氮)可以共价被键接在聚合物颗粒上，如键连到蛋白质性质的物质如蛋白质或半抗原上的上述和美国专利4,401,765和4,480,042中描述的颗粒，或进一步处理形成的氨甲酰氮酸(上述化合物V)，实施例12说明了氨甲酰氮颗粒试剂的制备。实施例2通过使化合物IV与琥珀酸酐反应制备氨甲酰氮酸1〕将0.5g(0.0019897mol)化合物IV和0.404g(0.0040mol)三乙胺溶解在30mlTHF中，伴随着搅拌，将0.1990g琥珀酸酐(0.001990mol)的10mlTHF溶液加到化合物IV溶液中。在室温下，搅拌混合物过10小时，用硅胶TLC和85％EtOAc/15％EtOH溶剂的薄层液相色谱(TLC)监测反应，直到化合物IV消耗尽。化合物IV和CBMP-酸，化合物V的Rf值分别是0.5-0.6和0-0.1。2〕通过旋转蒸发除去THF，并将残余物溶解在30ml氯仿中。用0.1N氢氧化钠(10ml×3)从溶液中萃取产物(氨甲酰氮酸)。然后，用氯仿(10ml×3)洗涤NaOH溶液。用1NHCl酸化NaOH溶液，直到达到PH2-3。用氯仿(15ml×3)萃取酸溶液，然后用硫酸钠(2-3g本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王成荣，
申请(专利权)人：达德化学系统公司，
类型：发明
国别省市：
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