miRNA在诊断乳腺癌患病风险的应用制造技术

本发明专利技术公开了miRNA在诊断乳腺癌患病风险的应用，所述miRNA包含miR‑128‑1、miR‑128‑2、miR‑421。利用本发明专利技术的miRNA诊断乳腺癌患病风险的AUC值为0.95，表明本发明专利技术的miRNA诊断效能高，可用于临床。

【技术实现步骤摘要】
miRNA在诊断乳腺癌患病风险的应用
本专利技术属于生物医学领域，涉及miRNA作为诊断乳腺癌患病风险的应用。更具体而言，本专利技术涉及3个不同miRNA的组合在诊断乳腺癌患病风险中的应用，包括基于所述3个不同miRNA的组合来制备用于诊断乳腺癌患病风险的试剂盒、芯片、以及利用所述试剂盒和芯片对乳腺癌患病风险进行判断的方法。
技术介绍
乳腺癌是全球女性发病率最高的癌症，占所有癌症的23％，同时乳腺癌也是女性癌症死亡的主要原因。根据世界卫生组织2012年的统计数据(GLOBOCAN2012)，相比于2008年，在过去四年间，乳腺癌的全球发病率增加了20％，死亡率增加了14％。在欧美国家，女性乳腺癌年发病率为100～110/10万。虽然中国女性乳腺癌总体年发病率为30/10万，约为欧美国家的1/3左右，但是年死亡率与欧美国家接近。而且近10年来，中国女性乳腺癌的发病率呈明显上升趋势，正以每年3％的速度递增，城市乳腺癌发病率更是以每年7.5％的速度增长。同时，中国女性乳腺癌的发病年龄呈现出年轻化趋势，发病高峰年龄为40～50岁，比西方国家提前10年，已严重威胁我国妇女的健康。乳腺癌的诊断主要依赖于对组织活检的组织学检查、或对细针抽吸物(FNA)的细胞学检查。一种有吸引力的替代方案是使用基于血液的测试。迄今为止，血清肿瘤标志物，如CA15.3或BR27.29具有低灵敏度，并且因此不用于乳腺癌检测。因此，需要微创方法来改进对乳腺癌的检测和早期诊断。miRNA为长约22nt的内源非编码RNA。除了在正常生理过程中发挥作用外，miRNA还通过调控促癌基因或抑癌基因的表达，在肿瘤细胞的发育和增殖过程中发挥重要作用。并且，已有研究显示miRNA的差异表达能够区分乳腺癌组织和癌旁组织，提示其可能成为新的乳腺癌诊断、预后及预测标志物，不过，创伤性检测一定程度上限制了组织miRNA作为标志物的应用。因而，体液中的miRNA的发现为乳腺癌新型无创标志物的研究开创了新的空间。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种用于诊断乳腺癌患病风险的miRNA标志物。本专利技术的目的之二在于提供一种用于诊断乳腺癌患病风险的回归模型。本专利技术的目的之三在于提供一种用于诊断乳腺癌患病风险的系统。本专利技术的目的之四在于提供上述miRNA的应用。本专利技术的目的之五在于提供一种诊断乳腺癌患病风险的新方法。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了一种用于诊断乳腺癌患病风险的miRNA标志物，相比健康对照，所述miRNA标志物表达上调代表受试者患有乳腺癌的风险高；所述miRNA标志物包括miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的一个或多个；优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的任意一个；优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的任意二个；优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421的组合。根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了前面所述的miRNA标志物的检测试剂。本专利技术的检测试剂种类不受限制，只要能检测前面所述的miRNA标志物表达水平的试剂均可。所述检测试剂包括检测miRNA标志物表达水平方法中使用的试剂。本专利技术检测miRNA标志物表达水平的方法包括但不限于基于杂交的方法，例如微阵列、RNA印迹、生物发光、测序方法以及实时定量聚合酶链反应(qPCR或RT-qPCR)。由于miRNA的小尺寸(约22个核苷酸)，因此提供精确的、可再现的以及准确的定量结果和最高的动态范围的最稳健的技术是qPCR，它目前被认为是通常用于验证其它技术的结果的标准。这样的方法的变化形式是例如数字聚合酶链反应(数字PCR)，它也可以被使用。本专利技术还提供了一种用于诊断乳腺癌患病风险的产品，所述产品包括前面所述的检测试剂。进一步，所述产品还包括一个回归模型，所述回归模型包括一个数学公式，所述数据公式如下：miGISig评分＝(0.501×miRNA-421的表达水平)+(0.6808×miRNA-128-1的表达水平)+(-0.3617×miRNA-128-2的表达水平)。使用本专利技术的所述产品诊断乳腺癌患病风险的步骤如下：1)检测受试者样本中miR-128-1、miR-128-2、miR-421的表达水平；2)将步骤1检测的miRNA表达水平代入前面所述的数学公式中，计算出miGISig评分；3)当miGISig评分高于cuf-off值时，提示该受试者患有乳腺癌的风险高；当miGISig评分低于cuf-off值时，提示该受试者患有乳腺癌的风险低。本专利技术中所指的样本可以是从受试者获得的任何样本，只要所考虑的样本含有核酸序列即可。更确切地说，所述样本将含有RNA。所述样本可以是从可能患有或可能没有癌症的受试者获得的；可以是从无癌症的受试者获得的。进一步，所述样本包括但不限于组织样本、体液样本或细胞外液样本。体液或细胞外液的细胞组分和非细胞组分的实例是但不限于羊水、乳汁、支气管灌洗液、脑脊髓液、初乳、间质液、腹膜液、胸膜液、唾液、精液、尿液、泪液、全血、血浆、血清血浆、血红细胞、白细胞以及血清。进一步，所述产品包括试剂盒、芯片。所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于所述miRNA标记物的部分或全部序列。进一步，所述固相载体包括所述固相载体可采用基因芯片领域的各种常用材料，例如但不限于尼龙膜，经活性基团(如醛基、氨基等)修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片等。所述的miRNA芯片的制备可采用本领域已知的生物芯片的常规制造方法，例如，如果固相载体采用的是修饰玻片或硅片，探针的5’端含有氨基修饰的聚dT串，可将寡核苷酸探针配制成溶液，然后采用点样仪将其点在修饰玻片或硅片上，排列成预定的序列或阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本专利技术的miRNA芯片。如果核酸不含氨基修饰，则其制备方法也可参照：王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》；J.L.erisi，V.R.Iyer，P.O.BROWN.Exploringthemetabolicandgeneticcontrolofgeneexpressiononagenomicscale.Science，1997；278：680和马立人，蒋中华主编.生物芯片.北京：化学工业出版社，2000，1-130。所述试剂盒包括针对miRNA标记物的引物和/或探针。本专利技术还提供了一种用于诊断乳腺癌患病风险的系统，所述系统包括诊断模块，所述诊断模块利用前面的回归模型对乳腺癌患病风险作出判断。进一步，所述系统还可以包括数据输入模块。根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了前面所述的miRNA标志物的应用，所述应用包括以下任一项所述的应用：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于诊断乳腺癌患病风险的miRNA标志物，其特征在于，相比健康对照，所述miRNA标志物表达上调代表受试者患有乳腺癌的风险高；/n所述miRNA标志物包括miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的一个或多个；/n优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的任意一个；/n优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的任意二个；/n优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421的组合。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断乳腺癌患病风险的miRNA标志物，其特征在于，相比健康对照，所述miRNA标志物表达上调代表受试者患有乳腺癌的风险高；
所述miRNA标志物包括miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的一个或多个；
优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的任意一个；
优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421中的任意二个；
优选地，所述miRNA标志物是miR-128-1、miR-128-2、miR-421的组合。


2.权利要求1所述的miRNA标志物的检测试剂。


3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括微阵列、RNA印迹、生物发光、测序方法以及实时定量聚合酶链反应中使用的试剂；优选地，所述试剂包括针对所述miRNA标志物的引物或探针。


4.一种用于诊断乳腺癌患病风险的产品，其特征在于，所述产品包括权利要求2或3所述的检测试剂；
优选地，所述产品还包括一个回归模型，所述回归模型包括一个数学公式，所述数据公式如下：miGISig评分＝(0.501×miRNA-421的表达水平)+(0.6808×miRNA-128-1的表达水平)+(-0.3617×miRNA-128-2的表达水平)。


5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，使用所述产品诊断乳腺癌患病风险的步骤如下：
1)检测受试者样本中miR-128-1、miR-128-...

【专利技术属性】
技术研发人员：周猛，包思琪，刘嘉琦，苏建忠，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33