日本血吸虫UDP-4基因的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了日本血吸虫UDP‑4基因的siRNA，具体的siRNA为：SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。本发明专利技术还公开了日本血吸虫

【技术实现步骤摘要】
日本血吸虫UDP-4基因的siRNA及其应用
本专利技术涉及分子生物学和生物医药
，尤其涉及一种日本血吸虫UDP-4基因的siRNA及其应用。
技术介绍
血吸虫病是由血吸虫感染引起的一种人畜共患寄生虫病，是世界上最严重的寄生虫疾病之一，感染者超过2亿，有将近8亿人面临着感染的风险，每年造成数千人的死亡。目前该病的防治药物主要是吡喹酮，但该药不能阻止再次感染，且长期使用有产生耐药性的风险。因此，制备新的治疗血吸虫病的疫苗或药物迫在眉睫。UDP-4在细菌和哺乳动物半乳糖代谢机制中介导UDP-葡萄糖和UDP-半乳糖的相互转化，参与细胞壁的合成，对锥虫和果蝇的生长发育起调控作用。该基因在日本血吸虫的免疫保护中也起一定作用，曹宇凡等（]曹宇凡,乔洪宾,刘萍萍,等.日本血吸虫重组抗原rSjGALE对小鼠的免疫保护效果分析[J].中国动物传染病学报,2013,21(03):51-56.）将其与206弗氏佐剂混合免疫小鼠，发现有一定的减卵和减孵化作用。RNAi现象广泛存在于生物体中，由双链RNA介导，能特异性的降解目标mRNA，使其产生相应的表型缺失。RNAi具有以下几点鲜明的特征：RNAi具有很高的特异性，只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA；RNAi抑制基因表达具有很高的效率，表型可以达到缺失突变体表型的程度，而且相对很少量的siRNA分子就能完全抑制相应基因的表达，是以催化放大的方式进行的RNAi技术；siRNA不得短于21个碱基，并且长链siRNA也在细胞内被Dicer酶切割为21bp左右的siRNA，并由siRNA来介导mRNA切割。而且大于30bp的siRNA不能在哺乳动物中诱导特异的RNA干扰，而是细胞非特异性和全面的基因表达受抑和凋亡。该技术的广泛应用推进了科学和医学的进步。
技术实现思路
日本血吸虫UDP-4基因（UDP-4），其基因序列在GenBank中的编号为AY815833.1。在前期研究工作中本课题组通过qRT-PCR技术验证了UDP-4在正常发育雌虫与发育阻遏雌虫的表达，结果显示UDP-4在双性感染雌虫中表达较高，这与本实验室前期转录组学分析结果相符，这表明UDP-4在雌虫发育过程中起着一定的作用。研究UDP-4基因的功能及其在雌虫中的作用将对于我们从控制雌虫生殖发育及产卵的角度来控制血吸虫病奠定基础。因此，本专利技术要解决的技术问题是提供一种日本血吸虫UDP-4基因的siRNA，该siRNA可抑制UDP-4基因的转录，可用于制备治疗血吸虫病的药物。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:本专利技术首先提供一种干扰日本血吸虫UDP-4基因的siRNA。更具体地，所述的siRNA，其特征在于，其序列为SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。本专利技术还提供一种干扰日本血吸虫UDP-4基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。更优选地，所述siRNA的正义链序列为SEQIDNO.5所示的核苷酸序列,反义链序列为SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。本专利技术另外提供一种治疗血吸虫病的药物，其特征在于，所述药物的活性成分为抑制日本血吸虫UDP-4基因表达的siRNA。更优选地，所述siRNA的正义链序列为SEQIDNO.5所示的核苷酸序列,反义链序列为SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。此外，本专利技术进一步提供干扰日本血吸虫UDP-4基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的疫苗中的应用。更优选地，所述siRNA的正义链序列为SEQIDNO.5所示的核苷酸序列,反义链序列为SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。本专利技术日本血吸虫UDP-4基因的siRNA，可用于干扰日本血吸虫UDP-4基因转录、表达及血吸虫的生长发育，小鼠的体内RNA干扰实验表明，该siRNA能显著降低感染小鼠肝脏虫卵孵化率，适于制备治疗血吸虫病的药物。附图说明图1是本专利技术实施例1实时定量PCR分析各处理组UDP-4基因的转录结果图。图2是本专利技术实施例2实时定量PCR分析各处理组UDP-4基因的转录结果图。图3是本专利技术实施例2扫描电镜观察各处理组UDP-4基因干扰的结果图。具体实施方式为深入研究血吸虫雌虫的生殖发育，本实验室前期对感染后25天的两性感染雌虫和单性感染雌虫进行了差异蛋白质组学的分析，分别找到25天两性感染雌虫和单性感染雌虫的392个差异表达蛋白（foldchange>1.5，P<0.05）[]LiXiaochun,QiaoHongbin,QinFanglin,ChengGuifeng,LiuJinming,LiHao,GuShaopeng,JinYamei.ComparativeanalysisofiTRAQ-basedproteomeprofilesofSchistosomajaponicumfemalewormscomingfromsingle-sexinfectionsandbisexualinfections[J].Journalofproteomics,2019,(213):16-21.]，生信分析发现，两性感染雌虫高表达的蛋白主要和代谢，转录，降解，运输和分解等通路相关，这可能和两性感染雌虫为满足大量产卵需吞噬大量血细胞有关。虫卵的主要构成成分是蛋白质，为满足每天的高产卵量，雌虫需要合成大量的蛋白质，转录翻译相关蛋白高表达才能满足高产卵的需求。雌虫大量产卵需要消耗大量血红蛋白，此过程会导致产生许多有害物质，降解，分解和运输功能相关的蛋白大量表达就应需而生；单性感染雌虫高表达的蛋白主要参与移动、生理粘附、细胞信号通讯和神经传递通路，这应该是与单性感染雌虫为了寻求与雄虫相遇需保持活跃的状态有关。虽然两性感染雌虫和单性感染雌虫差异表达蛋白的发现和生物信息学分析结果符合正常发育雌虫或未合抱雌虫的生理生化特性，但很难从25天这单一时间点的差异表达蛋白中找出调控血吸虫雌虫生殖发育的关键分子。因此，本专利技术人对不同发育时间节点的两性感染雌虫和单性感染雌虫的蛋白表达差异进行了更为系统的分析。分析发现：两性感染雌虫与单性感染雌虫的差异表达蛋白在感染后第18天（合抱后三天）即达286个，在卵壳形成和产卵前后，差异表达蛋白逐渐增多，从21天的220个到23天的300个，25天的447个（Foldchange>1.5，Q-value<0.05）。生信分析表明随着血吸虫的生长发育，在两性感染雌虫中较多的蛋白参与合成与代谢，催化，抗氧化，在单性感染的未合抱雌虫中较多的蛋白参与生物体运动和细胞周期，信号传递，能量代谢。本专利技术人从中选出在18、21、23、25d的MF中都高表达，差异倍数在1.5倍以上的蛋白进行简述，分别为：TCTP、UL-30、CAX70812、SjGST、AnnexinA13、CAX70849、和UDP-4。其中按产生虫体表面的角度进行归类：干扰TCTP、UL-30、CAX70812、AnnexinA13、CAX70849的表达造成雄虫头部乳头状突起或刺突减少本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种干扰日本血吸虫UDP-4基因的siRNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种干扰日本血吸虫UDP-4基因的siRNA。


2.如权利要求1所述的siRNA，其特征在于，其序列为SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。


3.一种干扰日本血吸虫UDP-4基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述siRNA的正义链序列为SEQIDNO.5所示的核苷酸序列，反义链序列为SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。


5.一种治疗血吸虫病的药物，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：金亚美，秦芳林，吴洛斌，任雨琪，李肖纯，程贵凤，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：上海;31