基于检测谷光甘肽S转移酶的一种或多种同功酶来评估器官状态的快速测定法制造技术

一种基于检测各种生物液体内的谷光甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）的一种或多种功酶对测试对象的器官状态进行快速评估的方法，该方法包括：使颗粒标记的对所述同功酶特异的抗－ＧＳＴ抗体与怀疑含有所述同功酶的生物液体样品接触，以及将颗粒标记的抗体－同功酶复合物捕获到固定化的捕获抗体上，产生视觉可检测出的信号，所述的抗体具有足以将至少皮摩尔量的所述同功酶检测出的敏感性。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种为了评估器官状态而检测和/或测定谷光甘肽S转移酶(GSTs)的快速测定法。GSTs是一类蛋白质的多基因家族，主要由α、μ、θ和π类异物体(isoform)组成，主要通过与谷光甘肽结合来负责异体生物学(xenobiotics)的一定范围内的解毒。αGST是主要的肝型同功酶，并均匀地在肝中分布。相反，πGST却主要分布于胆管内的上皮细胞中。在肾中亦存在着一种类似的独特分布情形，即αGST分布在肾单位的近端小管处，πGST分布在肾单位的远端小管区域。因此可得出结论测定血浆中或尿中的GST水平都将有助于监测个体的肝或肾的状态。事实上，许多学者已经运用GST的测定值来评价个体的肝和肾的损伤情况，所述的个体或者进行了器官移植手术，或者由于接触了肝或肾毒素而使器官受到了损害(参见，例如，Trull，A.K.等人，“移植”(1994)58，1345-1351)。目前，这种测定通常采用放射免疫测定法(RIA)来进行。然而，最近已可从市面上购得由Biotrin International Limited，Mount Merrion，County Dublin，Ireland出品的基于微滴定板的酶免疫测定试剂(EIAs)，该试剂可测定生物液体中的α和πGST水平。尽管起始时有些人抱有怀疑的态度，然而这些EIAs正被科研机构广泛地接受(c.f.Beckett，G.J.和Hayes，J.D.临床化学进展(1993)30，325页)。因此，当前RIA成了一种本领域内许多技术人员选择采用的检测方法。到目前为止，这两种技术均有一定的局限性，因为它们都要求有专门的设备和训练有素的有能力的人，来得到有意义的和精确的结果。这些测定法相对较慢，从开始到结束平均需要2小时或更长。所以，需要更加快速地测定GSTs的测定法。由于时间分辨免疫测定法(TR-IFMA)的使用，说明GST同功酶检测法正趋于变得越来越复杂。Tiainen，P等人(临床化学(1996)42 2，334-335)对αGST的酶免疫测定法(EIA)和TR-IFMA测定法做了比较。EIA所采用的是Hepkit(Biotrin International公司的商标)。发现在内部测定的精确性方面，Hepkit要比TR-IFMA好些。而且，还言道TR-IFMA比Hepkit更费力一些，因为TR-IFMA需要较多的重复(4个)及更多的洗涤循环来完成测定步骤。因此，很明显，当前GST的检测与定量的研究已聚焦在较为错综复杂的检测系统的TR-IFMA的发展上面来。那些进行了器官移植手术的人或那些由于接触了肝或肾毒素而使器官遭到损害的人必须受到仔细的监测。对于那些进行了器官移植的个体和那些用免疫抑制药物(特别是环孢菌素)进行了移植后长期治疗的个体尤其应该如此。一旦这些个体出院后，必须对他们不断地监测，目前这种监测还需患者经常返回到相应的医疗单位，以便进行必要的GST和其它测定。所以，这些患者能有一套自我监测装置则是最希望不过的了，这样患者可减少去医院的次数，更重要的是，还可向患者和医生发出需要治疗的早期信号，即当发现GST的水平高于正常值时。因此，可对血浆、尿和其它生物学液体如胆汁进行GST的快速而简单检测的方法将具有明显的优点，因为它使医生无需求助于医院内的费时费钱的试验就能监测受影响个体的肝或肾的状态。需要快速测定操作的另一领域是在移植前评价器官或进行活体外试验。目前，还没有人们普遍接受的对供体器官在移入受体前进行评估的方法。结果，如同通过供体器官的起初质量来判断一样，不可能确切地预测到移植手术的最终结果。任何在移植前有助于对供体器官做出评估的方法都会极大地有助于手术最后结果的评价，并可使医生采取移植后支持疗法对患者进行较早的治疗，以防止移植体由于质量差或宿主排斥而产生损失。作为正常器官恢复步骤的一部分，一旦供体器官被取出到器官供体体外，要用特殊的试剂(如Wisconsin大学缓冲液)平衡或灌注所述的供体器官。这种试剂及其它的此类试剂所起的作用是，在器官植入受体之前于低温下(4-10℃)在体外维持器官的完整性，并且还用来在进行手术重新使供体器官与受体附着前，将贮存的器官平衡到体温(37℃)。供体器官的质量明显依赖于许多因素如供体的健康状况、在活体外贮存的时间和温度、处理步骤、以及所用防腐试剂的质量。因此，由上述任何因素所引起的活体外移植体的损害可通过评估器官的酶渗漏而得到监测。快速测定操作法是已知的。例如，EP 0291 194B1描述并权利要求了一种分析试验装置及使用所述装置的分析方法，该装置适于在家庭、诊所或诊疗所内使用，而且该装置能给出分析性的结果，它出结果快并只需要最低程度的技能及对用户的连累程度最低。该装置被指出特别适于用作妊娠检验装置。没有专门提到GSTs。孕妇体内的标志激素如人绒毛膜促性腺激素(HCG)的水平趋于以较高的浓度存在，因而与上文所述的那些类型的患者的GSTs水平相比更容易检测到，但GSTs水平的升高对他们而言却是至关重要的，或者，事实上是表示生命受到潜在威胁的临床指标。采用酶活性测定法来区分GSTs的异构体的困难在文献中有充分的报道(BeckettG.J.和Hayes，J.P.(1993)文献号同上文所述)。如上文所述，其它研究者已采用RIA(Howie，A.F.等人(Chinica ChimicaActa)(1989)1984，269-278)和TR-IFMA(Tiainen，P.和Karhi，K.K.Clin.Chem.(1994)40-2，184-189)来检测GST。所有的这些技术均是检测生物分子的极为敏感的技术。然而，各项技术均需要专门的仪器和技术人员。例如，TR-IFMA需要采用特殊的时间分辨(time-resolved)荧光计。人们需要一项适于非专家所用的技术，或是一项在紧急情况下能快速且容易使用的技术。紧急情况的例子是移植后的肝损害或肾损害或是由于扑热息痛过量引起的潜在肝衰竭。因此，本专利技术提供了快速评估测试对象的器官状态的方法，该方法基于多种生物液体内的谷光甘肽S-转移酶(GST)的一种或多种同功酶的检测，该方法包括使颗粒标记的对所述同功酶特异的抗-GST抗体与怀疑含有所述同功酶的生物液体样品接触，所述抗体灵敏得足以检测到皮摩尔量的所述同功酶，以及将颗粒标记的抗体一同功酶复合物捕获到固定的捕获抗体上，以便产生视觉可检测到的信号。在此处的术语“快速”是指GST同功酶的检测或测定，从与颗粒标记的抗-GST接触时开始算，一般在30分钟的时间内完成。本文的术语“器官状态”包括免疫学或毒理学危害后的器官损害。对本领域的普通技术人员而言，本专利技术的主要优点显然在于它的简单性，该方法可被几乎没有或根本未受过科学训练的人采用，来监测他们自身的健康状况和/或在上文所述的紧急情形下快速地提供信息。还将认识到的是进行测定操作或结果评价和解释无需错综复杂的设备或详细的试验程序。操作和结果评估的这种简单性明显不同于当前的GST检测步骤。优选的所述的GST是肝或肾源的αGST、πGST或μGST。最优选的所述的GST是肝或肾源的αGST或πGST。任何快速测定GST的测定法的特别要求是抗体对GST具有必需的亲和性。对于αGST，已经制备出能检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·马丁·多伊尔，科马克·杰勒德·基尔蒂，
申请(专利权)人：拜奥特恩知识产权有限公司，
类型：发明
国别省市：