本发明专利技术涉及一种无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基及其应用，所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括重组人血清白蛋白、重组人碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1和DGEA肽。该培养基是一种完全无异源(Xeno‑free)的培养体系，因此不会带来异源污染；创造性地加入DGEA肽，并配合重组人血清白蛋白、重组人碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1等添加剂成分，使得在培养间充质干细胞时无需对培养容器进行预包被而直接培养，细胞拥有较高的贴壁率、扩增倍数和细胞活率，细胞生长状态良好。这大大简化了操作步骤，节省了成本，有利于大规模产业化生产。
【技术实现步骤摘要】
一种无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基及其应用
本专利技术属于细胞培养
，涉及一种间充质干细胞无血清培养基及其应用，尤其涉及一种无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基及其应用。
技术介绍
间充质干细胞(MesenchymalStemCells，MSC)是一种多能细胞，它能分化为多种细胞类型，包括：成骨细胞，软骨细胞和脂肪细胞，这种分化的能力已经在多种情况下得到证明，包括活体动物中的特定细胞和组织以及组织培养中生长的对应细胞和组织。近年来，由于MSC具有广泛的治疗用途，加之其具有的修复受损或患病组织的巨大潜能，使MSC成为科研和临床研究的热点。目前所采用的MSC培养基基本都含有胎牛血清(FoetalBovineSerum，FBS)，因为这样才能提供细胞附着和增殖所必需的激素和生长因子。因此MSC的分离和培养在很大程度上取决于动物产品的使用，特别是胎牛血清(FBS)的使用。而FBS是从在肉类加工业中获得的胎牛的血液中提取的，在MSC培养过程中通常以10％(体积)的浓度添加到生长培养基中。大量使用FBS的主要问题是传染性物质传播的风险，这种风险不仅体现在患者身上，对产品技术人员及医务人员(在处理产品时)也存在风险。在使用含有FBS的培养基时，需要关注通常称为疯牛病的牛海绵状脑病(Bovinespongiformencephalopathy，BSE)，以及变异型克-雅二氏病(variantCreutzfeldt-Jakobdisease，vCJD)。另外，FBS需要在-20℃下冷藏保存。且批次间差异很大。为了解决FBS供应及使用安全的问题，研发人员对无血清培养基展开了研究，并取得了一定的成果。CN108300690A公开了一种骨髓间充质干细胞的分离培养方法和无血清培养基，所述无血清培养基为基础培养基中加入抗坏血酸、碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子和人血白蛋白，无血清干细胞培养基中组分浓度为抗坏血酸60-80mg/L，碱性成纤维细胞生长因子10-30μg/L、血小板衍生因子10-30μg/L和人血白蛋白4-8g/L。能高效、快速分离脂肪间充质干细胞，利于脂肪间充质干细胞的生长，大大提高了脂肪间充质干细胞增殖率。CN108251359A公开了一种间充质干细胞无血清培养基及培养方法，无血清培养基包括基础培养基和添加成分，所述的添加成分包括低氧诱导因子-1，所述低氧诱导因子-1的浓度为10-20ng/mL；还包括力生长因子，所述力生长因子的浓度为20-50ng/mL。该专利技术的无血清培养基配合低氧的培养条件，对间充质干细胞的生长具有协同促进作用，间充质干细胞生长情况大大改善，同时多次传代次后仍保持了间充质干细胞的“干性”及分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等类型细胞的能力。对于无血清培养基，现有的产品(包括上述所引用的专利CN108300690A和CN108251359A)都需要对培养容器进行预先包被，因为若不进行预先包被，则细胞的贴壁性明显低于含血清培养基，但预先包被的操作不利于大规模产业化生产。因此，开发出一种无须对培养容器进行预包被且能促进细胞贴壁的培养基显得尤为重要。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种间充质干细胞无血清培养基及其应用，尤其提供一种无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基及其应用。为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一方面，本专利技术提供一种无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基，所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括重组人血清白蛋白、重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF2)、转化生长因子β1(TGF-β1)和DGEA肽。本专利技术所涉及的无血清培养基是一种完全无异源的培养体系，因此不会带来外源污染；创造性地加入DGEA肽，并配合重组人血清白蛋白、重组人碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1等添加剂成分，使得在培养间充质干细胞时无需对培养容器进行预包被而直接培养，细胞依旧拥有较高的贴壁系数、扩增系数和细胞活率，细胞生长状态良好。这大大简化了操作步骤，节省了成本，有利于大规模产业化生产。其中DEGA肽，是一种短肽，CAS号为134580-64-6。优选地，所述重组人血清白蛋白在所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基中的浓度为0.5-50μg/mL，例如0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL或50μg/mL等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再详细赘述，优选1-10μg/mL。本专利技术所涉及的无血清培养基对添加的重组人血清白蛋白有特定的浓度要求，当其超过上述特定的数值范围浓度时会导致细胞出现聚团、形状不规则等现象，当其小于上述特定的数值范围浓度时，细胞的贴壁率将明显降低，其导致的结果是终产品得率降低。其中1-10μg/mL是效果更佳的范围。优选地，所述重组人碱性成纤维细胞生长因子在所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基中的浓度为3-10ng/mL，例如3ng/mL、4ng/mL、5ng/mL、6ng/mL、7ng/mL、8ng/mL、9ng/mL或10ng/mL等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再详细赘述，优选3-5ng/mL。本专利技术所涉及的无血清培养基对添加的重组人碱性成纤维细胞生长因子有特定的浓度要求，当其超过上述特定的数值范围浓度时会导致细胞分裂速度过快，从而出现分化现象，最终加速其衰老速度，当其小于上述特定的数值范围浓度时会减缓细胞增殖的速度，使培养效率降低。其中3-5ng/mL是效果更佳的范围。优选地，所述转化生长因子β1在所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基中的浓度为2-20ng/mL，例如2ng/mL、3ng/mL、8ng/mL、10ng/mL、15ng/mL或20ng/mL等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再详细赘述，优选3-8ng/mL。本专利技术所涉及的无血清培养基对添加的转化生长因子β1有特定的浓度要求，当其超过上述特定的数值范围浓度时会使细胞失去原有的形状(由于渗透压过高导致细胞失水)，当其小于上述特定的数值范围浓度时会使细胞的贴壁率降低。其中3-8ng/mL是效果更佳的范围。优选地，所述DGEA肽在所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基中的浓度为10-50μg/mL，例如10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL或50μg/mL等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再详细赘述。本专利技术所涉及的无血清培养基对添加的DGEA肽有特定的浓度要求，当其超过上述特定的数值范围浓度时会吸附培养基中的脂类及生长因子，使细胞缺乏增殖所需的成分，当其小于上述特定的数值范围浓度时会使细胞的贴壁率降低。优选地，所述基础培养基包括α-ΜΕΜ培养基。本专利技术所涉及的基础培养基包括但不仅限于α-ΜΕΜ培养基。优本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括重组人血清白蛋白、重组人碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1和DGEA肽。/n
【技术特征摘要】
1.一种无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括重组人血清白蛋白、重组人碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1和DGEA肽。
2.如权利要求1所述的无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述重组人血清白蛋白在所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基中的浓度为0.5-50μg/mL，优选1-10μg/mL。
3.如权利要求1或2所述的无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述重组人碱性成纤维细胞生长因子在所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基中的浓度为3-10ng/mL，优选3-5ng/mL。
4.如权利要求1-3中任一项所述的无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述转化生长因子β1在所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基中的浓度为2-20ng/mL，优选3-8ng/mL。
5.如权利要求1-4中任一项所述的无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述DGEA肽在所述无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基中的浓度为10-50μg/mL。
6.如权利要求1-5中任一项所述的无需预先包被的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基包括α-ΜΕΜ培养基。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈东煌，陈海佳，王小燕，崔梓豪，姜交华，戚康艺，
申请(专利权)人：生物岛实验室，广东国科细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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