一种细胞培养基质制造技术

本发明专利技术解决了现有的细胞培养基质因微环境营造不好、抗菌效果差、易降解造成的细胞培养效果差的问题，研发了一款能够较完全模拟细胞体内生长环境同时具有抗菌及抑制降解功能的细胞培养基质，包括：混合粉末基质材料，由60‑80wt％的胶原蛋白I型、10‑30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5‑10wt％脱细胞羊膜基质组成；基质降解抑制剂，含量为所述混合粉末基质材料的0.01‑1.5wt％；阳离子抗菌材料，含量为所述混合粉末基质材料的0.01‑1.5wt％。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞培养基质
本专利技术涉及生物材料领域，具体涉及一种细胞培养基质。
技术介绍
细胞培养技术已广泛应用于科研、生产和临床应用,正在发挥着日益重要的作用。细胞培养中除了对培养容器、培养基、温度、溶氧和PH等有精确的要求外，其实对支持细胞贴壁生长的细胞培养基质载体有着更高的要求，因为其会直接影响细胞培养的结果，对获得优异的科研、生产和临床应用效果起着关键作用。传统的细胞培养基质材料主要包括天然、合成和半合成材料。天然材料由于具有良好的细胞相容性，为目前主要研究对象。近年来人们主要应用胶原蛋白、Matrigel等基质进行细胞培养，相对于合成材料而言，这些材料在生物活性成分上有了一定改进，在科研、生产和临床应用中都获得了一定的效果。但是考虑到人体微环境的复杂性，这些细胞培养基质材料在模拟生物微环境方面，距离理想的生物微环境尚远，仍有很大的提升空间。细胞培养过程经常会碰到细胞被细菌污染问题，一旦细胞被污染，只能将丢弃，给实验带来严重影响及损失，不能进行长期的细胞培养观察,传统解决办法是在细胞培养基质中添加青链霉素两性霉素B庆大霉素等抗生素，但是此类抗生素添加容易造成对细胞的损害，多加无益。此外目前常用的胶原蛋白、Matrigel等细胞培养基质存在降解过快的问题，不利于长期的细胞培养观察，通过交联等方法可以一定程度降低降解速率，但是同时也改变了基质材料本身的物理化学性质对于细胞培养不利，目前尚无有效解决办法。基于上述的调研及日常的科研应用，专利技术人认为，目前还缺乏一种能够较完全模拟细胞体内生长微环境的用于细胞的体外培养基质产品，该产品还要同时具备抗菌和抑制降解的功能。
技术实现思路
本专利技术解决了现有的细胞培养基质因微环境营造不好、抗菌效果差、易降解造成的细胞培养效果差的问题，研发了一款能够较完全模拟细胞体内生长环境同时具有抗菌及抑制降解功能的细胞培养基质。根据本专利技术的第一个方面，提供了一种细胞培养基质，其特征在于，包括：混合粉末基质材料，由60-80wt％的胶原蛋白I型、10-30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5-10wt％脱细胞羊膜基质组成；基质降解抑制剂，含量为所述混合粉末基质材料的0.01-1.5wt％；阳离子抗菌材料，含量为所述混合粉末基质材料的0.01-1.5wt％。进一步地，所述的脱细胞小肠粘膜下层基质和脱细胞羊膜基质的制备方法包括：步骤一：化学萃取，取猪的小肠粘膜下层/羊膜，依次使用TritonX100、脱氧胆酸钠水溶液进行化学萃取，用蒸馏水漂洗后冻干；步骤二：基质粉末，将步骤一获得的冻干物使用迷你粉碎机粉碎，获得脱细胞猪小肠粘膜下层/羊膜基质粉末；步骤三：将步骤二获得的基质粉末置于胃蛋白酶的盐酸溶液消化，其中，基质粉末与胃蛋白酶的质量比为10:1，待基质粉末溶液变为均匀、半透明态，超速离心除去未消化的颗粒物，得到消化液；步骤四：将步骤三得到的消化液在-40℃冻存，冷冻干燥后获得脱细胞猪小肠粘膜下层/羊膜基质。进一步地，所述的基质降解抑制剂为四环素类似物，包括以下的一种或多种：多西霉素、强力霉素、土霉素；所述的阳离子抗菌材料，包括以下的一种或多种：氯己定及其各种盐，其中，所述盐包括二葡糖酸盐、二乙酸盐、二甲硫酸盐、和二乳酸盐；聚合物型季铵化合物，其中，包括聚六亚甲基双胍；可溶性天然阳离子高分子材料，其中，包括壳聚糖根据本专利技术的第二个方面，提供了一种细胞培养基质，其特征在于，由80wt％的胶原蛋白I型、10wt％的脱细胞小肠粘膜下层基质、10wt％脱细胞羊膜基质组成混合粉末基质材料；以所述混合粉末基质材料的量为准，添加0.1wt％的多西霉素以及0.15wt％的壳聚糖。进一步地，所述的脱细胞小肠粘膜下层/羊膜基质为自制，制备方法为本专利技术第一方面阐述的制备方法。本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术相对于现有细胞培养基质具有丰富的细胞生长所需的各种生长因子，有利于细胞粘附、增殖；(2)本专利技术相对于现有细胞培养基质具有促血管化再生的生长因子，利用后期组织培养的血管再生；(3)本专利技术相对于现有细胞培养基质含有具有免疫特性脱细胞羊膜基质，利于组织培养及临床应用；(4)本专利技术相对于现有细胞培养基质，本专利技术细胞培养基质具有抗菌性能；(5)本专利技术相对于现有细胞培养基质，本专利技术细胞培养基质具有抑制蛋白类基质降解的功能。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图图1为本专利技术实施例体外细菌培养计数测试实验；图2为本专利技术实施例体外细菌胶原蛋白酶降解实验。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获的的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供一组不同配比的细胞培养基质的实施例，由此确定其各组份的使用范围，其配方遵循如下的内容：一种细胞培养基质，由60-80wt％的胶原蛋白I型、10-30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5-10wt％脱细胞羊膜基质组成混合粉末基质材料，然后以混合基质材料的量为准，添加0.01-1.5wt％的基质降解抑制剂以及0.01-1.5wt％阳离子抗菌材料。其中，胶原蛋白I型、基质降解抑制剂、阳离子抗菌材料均为市场购买产品；但是，脱细胞小肠粘膜下层基质和脱细胞羊膜基质是专利技术人基于其对脱细胞技术的研究特别研发的制备方法，其具体步骤以及试剂使用的最佳用量如下：步骤一：化学萃取，取猪的小肠粘膜下层/羊膜，依次使用TritonX100、脱氧胆酸钠水溶液进行化学萃取，用蒸馏水漂洗后冻干；步骤二：基质粉末，将步骤一获得的冻干物使用迷你粉碎机粉碎，获得脱细胞猪小肠粘膜下层/羊膜基质粉末；步骤三：将步骤二获得的基质粉末置于胃蛋白酶的盐酸溶液消化，其中，基质粉末与胃蛋白酶的质量比为10:1，待基质粉末溶液变为均匀、半透明态，超速离心除去未消化的颗粒物，得到消化液；步骤四：将步骤三得到的消化液在-40℃冻存，冷冻干燥后获得脱细胞猪小肠粘膜下层/羊膜基质。上述提到的基质降解抑制剂为四环素类似物，专利技术人还进一步优选，确定多西霉素作为基质降解抑制剂。上述提到的阳离子抗菌材料，有三种类型，一种是氯己定及其各种盐，盐的类型可以是：二葡糖酸盐、二乙酸盐、二甲硫酸盐、和二乳酸盐；第二种聚合物型季铵化合物，特别是聚六亚甲基双胍以及第三种类型可溶性天然阳离子高分子材料，特别是壳聚糖。为了获本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞培养基质，其特征在于，包括：/n混合粉末基质材料，由60-80wt％的胶原蛋白I型、10-30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5-10wt％脱细胞羊膜基质组成；/n基质降解抑制剂，含量为所述混合粉末基质材料的0.01-1.5wt％；/n阳离子抗菌材料，含量为所述混合粉末基质材料的0.01-1.5wt％。/n

【技术特征摘要】
1.一种细胞培养基质，其特征在于，包括：
混合粉末基质材料，由60-80wt％的胶原蛋白I型、10-30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5-10wt％脱细胞羊膜基质组成；
基质降解抑制剂，含量为所述混合粉末基质材料的0.01-1.5wt％；
阳离子抗菌材料，含量为所述混合粉末基质材料的0.01-1.5wt％。


2.根据权利要求1所述的细胞培养基质，其特征在于，所述的脱细胞小肠粘膜下层基质和脱细胞羊膜基质的制备方法包括：
步骤一：化学萃取，取猪的小肠粘膜下层/羊膜，依次使用TritonX100、脱氧胆酸钠水溶液进行化学萃取，用蒸馏水漂洗后冻干；
步骤二：基质粉末，将步骤一获得的冻干物使用迷你粉碎机粉碎，获得脱细胞猪小肠粘膜下层/羊膜基质粉末；
步骤三：将步骤二获得的基质粉末置于胃蛋白酶的盐酸溶液消化，其中，基质粉末与胃蛋白酶的质量比为10:1，待基质粉末溶液变为均匀、半透明态，超速离心除去未消化的颗粒物，得到消化液；
步骤四：将步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨习锋，陈诗浩，曾晨光，周启明，丁雪玲，
申请(专利权)人：广州新诚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44