菌种的西林瓶保藏方法技术

本发明专利技术提供菌种的西林瓶保藏方法，属于微生物工程技术领域。包括以下步骤：(1)西林瓶平面培养基准备：将配制并调好pH的固体培养基，趁热分装至西林瓶中，盖胶塞、包包头布、灭菌；(2)接种与培养：将菌种接种于西林瓶内的培养基中，封口、培养；(3)培养结果确认：培养结束观察培养物状态，确认菌落特征，镜检观察菌体形态，确认菌体特征；(4)菌种保存：菌种放入2‑8℃的环境保存。使用西林瓶代替试管作为菌种保存的容器，减少了菌种保存所用储存空间，增加实验室菌种保藏容量，解决菌种保藏容量不足的问题。

【技术实现步骤摘要】
菌种的西林瓶保藏方法
本专利技术涉及微生物工程
，具体涉及菌种的保藏方法。
技术介绍
菌种保藏在微生物研究及实际应用中必不可少，尤其是在无菌控制领域，无菌控制是无菌制剂生产控制的要点，保存有代表性或指征作用的菌株对于提高验证水平，提高无菌工艺水平，意义重大。比如：在灭菌或消毒后的物品中检出的微生物，可将其保存，用于物品灭菌或消毒验证的试验菌。随微生物鉴定技术不断成熟，许多企业已具备对检出微生物进行鉴定，并保存有代表性或指征作用的菌株的能力，但由于存储空间有限、常规菌种保存需耗费较大的人力成本，斜面培养基是固体培养基的一种形式；制作时应趁热定量分装于试管内，并凝固成斜面的称为斜面培养基，用于菌种扩大转管及菌种保藏。采用试管进行斜面保藏是非常常见的一种保藏形式，但是此种保藏形式需要占用大量的空间，每个车间和实验室均只保留了一株代表菌株，QC只能先建立不同车间和实验室微生物检查洁净区的检出微生物菌株信息库。要建立完善的微生物菌种库，需要提高实验室存储菌种量的能力，需要降低单支菌种储存占用空间，调整菌种储存过程摆放方式。
技术实现思路
鉴于上述的分析，本专利技术旨在提供一种菌种的西林瓶保藏方法，减少了菌种保存所用储存空间，增加实验室菌种保藏容量，解决菌种保藏容量不足的问题。本专利技术的目的主要是通过以下技术方案实现的：一种菌种的西林瓶保藏方法，包括以下步骤：(1)西林瓶平面培养基准备：将配制并调好pH的固体培养基，趁热分装至西林瓶中，盖胶塞、包包头布、灭菌；(2)接种与培养：将菌种接种于西林瓶内的培养基中，封口、培养；(3)培养结果确认：培养结束观察培养物状态，确认菌落特征，镜检观察菌体形态，确认菌体特征；(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存。菌种为大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、科氏葡萄球菌、白色念珠菌或黑曲霉。当菌种为大肠埃希菌时，步骤(2)接种与培养：打开包头布和胶塞，沾取一接种环大肠埃希菌原斜面菌种，划线接种于7ml胰酪大豆胨琼脂西林瓶培养管，盖上胶塞，压铝盖，同法再作2个平行，30-35℃培养18-24小时；步骤(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存1个月。当菌种为生孢梭菌时，步骤(2)接种与培养：打开包头布和胶塞，使用接种针沾取生孢梭菌原液体菌种，穿刺接种于10ml高层硫乙醇酸盐固体培养基西林瓶培养管，盖上胶塞，压铝盖，同法作2个平行，30-35℃培养18-24小时；步骤(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存2个月。当菌种为枯草芽孢杆菌，步骤(2)接种与培养：打开包头布和胶塞，沾取一接种环枯草芽孢杆菌原斜面菌种，划线接种于7ml胰酪大豆胨琼脂西林瓶培养管，盖上胶塞，压铝盖，同法再作2个平行，在30-35℃培养18-24小时；步骤(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存2个月。当菌种为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌或科氏葡萄球菌时，步骤(2)接种与培养：打开包头布和胶塞，打开包头布和胶塞，沾取一接种环金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌或科氏葡萄球菌原斜面菌种，划线接种于7ml胰酪大豆胨琼脂西林瓶培养管，盖上胶塞，压铝盖，同法再作2个平行，在30-35℃培养18-24小时；步骤(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存1个月。当菌种为白色念珠菌时，步骤(2)接种与培养：打开包头布和胶塞，沾取一接种环白色念珠菌原斜面菌种，划线接种于7ml沙氏葡萄糖琼脂西林瓶培养管，盖上胶塞，压铝盖，同法再作2个平行，在20-25℃培养24-48小时；步骤(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存2个月。当菌种为黑曲霉菌时，步骤(2)接种与培养：打开包头布和胶塞，沾取一接种环黑曲霉菌原斜面菌种，划线接种于7ml沙氏葡萄糖琼脂西林瓶培养管，盖上胶塞，压铝盖，同法再作2个平行，在20-25℃培养5-7天；步骤(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存2个月。原斜面菌种指试管斜面保存的菌种。1、法规可行性分析：《中国药典》2015年版指导原则<9203>只要求：菌种必须定期转种，传代不得超过5代。《中国药典分析检验技术指南》对菌种保存方法要求：所保存的菌种应为处于对数生长期的纯培养物，无论应用何种方式保存菌种都应进行验证，确保在相应保存条件下的菌种的活性、不发生变异且性能稳定。因此，只要进行验证，确保在相应保存条件下的菌种的活性、不发生变异且性能稳定，法规可以接受使用西林瓶代替试管保存菌种。2、技术可行性：高层培养基：应趁热定量分装在试管内，直立凝固而制成，常用于保存菌种。优点：培养基的厚度相对斜面增大，营养丰富，不容易干燥、开裂。回收西林瓶与试管相比：成本低，体积小，自身可直立，培养基相对厚度差异不大。3、使用可行性分析：3.1工作用菌种用途：主要用于制备小于100个/ml的菌悬液，一般需要洗脱后10倍递增稀释到10-7左右。只需从每支工作用菌种中取出的很少的菌体，就能满足日常工作需要。3.2试管斜面保存与西林瓶保存菌种方法优缺点比较结果显示：只要建立西林瓶保存菌种方法步骤并验证其保存菌种的稳定性符合菌种质量的标准，西林瓶保存菌种方法其他各方面均优于试管斜面保存法，从使用角度分析，具有可行性，结果见下表1。表1项目试管斜面保存法西林瓶保存菌种方法结论(西林瓶菌种保存法：)容器/体积试管/50ml或110ml西林瓶/7ml～25ml体积小放置试管架直接直立放置在白盒内好放置，放置占用空间小培养基10ml或20ml2ml～8ml节省培养基保存菌量大小不影响使用密封性符合要求符合药典密封要求更安全操作步骤已知无需摸索方法菌种稳定待验证需确认本专利技术有益效果如下：使用西林瓶代替试管作为菌种保存的容器，减少了菌种保存所用储存空间，增加实验室菌种保藏容量，解决菌种保藏容量不足的问题。为组建微生物菌种库提供了基础，可以更好的实现无菌控制，无菌控制是无菌制剂生产控制的要点，保存有代表性或指征作用的菌株对于提高验证水平，提高无菌工艺水平，意义重大。附图说明图1为大肠埃希菌西林瓶压盖形式封口培养外观图图2为枯草芽孢杆菌西林瓶压盖形式封口培养外观图图3为生孢梭菌西林瓶压盖形式封口培养外观图图4为金黄色葡萄球菌西林瓶压盖形式封口培养外观图图5为铜绿假单胞菌西林瓶压盖形式封口培养外观图图6为白色念珠菌西林瓶压盖形式封口培养外观图图7为黑曲霉菌西林瓶压盖形式封口培养外观图图8为科氏葡萄球菌西林瓶压盖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.菌种的西林瓶保藏方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)西林瓶平面培养基准备：将配制并调好pH的固体培养基，趁热分装至西林瓶中，盖胶塞、包包头布、灭菌；(2)接种与培养：将菌种接种于西林瓶内的培养基中，封口、培养；(3)培养结果确认：培养结束观察培养物状态，确认菌落特征，镜检观察菌体形态，确认菌体特征；(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存。/n

【技术特征摘要】
1.菌种的西林瓶保藏方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)西林瓶平面培养基准备：将配制并调好pH的固体培养基，趁热分装至西林瓶中，盖胶塞、包包头布、灭菌；(2)接种与培养：将菌种接种于西林瓶内的培养基中，封口、培养；(3)培养结果确认：培养结束观察培养物状态，确认菌落特征，镜检观察菌体形态，确认菌体特征；(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存。


2.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述菌种为大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、科氏葡萄球菌、白色念珠菌或黑曲霉。


3.根据权利要求2所述的保藏方法，其特征在于，步骤(2)接种与培养：打开包头布和胶塞，沾取一接种环大肠埃希菌原斜面菌种，划线接种于7ml胰酪大豆胨琼脂西林瓶培养管，盖上胶塞，压铝盖，同法再作2个平行，30-35℃培养18-24小时；(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存1个月。


4.根据权利要求2所述的保藏方法，其特征在于，步骤(2)接种与培养：打开包头布和胶塞，使用接种针沾取生孢梭菌原液体菌种，穿刺接种于10ml高层硫乙醇酸盐固体培养基西林瓶培养管，盖上胶塞，压铝盖，同法作2个平行，30-35℃培养18-24小时；(4)菌种保存：菌种放入2-8℃的环境保存2个月。


5.根据权利要求2所述的保藏方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：张静，
申请(专利权)人：河北化工医药职业技术学院，
类型：发明
国别省市：河北;13