一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，该方法包括如下步骤：S1：蛋白PABPN1L抗原表位分析；S2：将选定的目的片段的DNA通过PCR扩增后插入到表达载体构建含有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得重组蛋白PABPN1L抗原；S3：将所述重组蛋白PABPN1L抗原免疫动物，经血清获得特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体；在重组蛋白制备中采用大肠杆菌表达系统，能很好的保证重组蛋白的表达，表达产量高，有利于大批量的制备特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法
本专利技术涉及生物科学和检测试剂
，具体为一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法。
技术介绍
PABPs(poly(A)-bindingprotein)蛋白家族是一类高度保守的真核RNA结合蛋白。这类蛋白的特征在于特异性识别聚核苷酸序列polyA。PolyA存在于mRNA的3’端，这意味着PABPs可结合几乎所有的mRNA，参与mRNA相关的生物学事件。PABPs可分为七种，分别为：PABPC1、PABPC3、PABPC4、PABPC4L、ePABP、PABPN1和PABPC5。其中PABPC1、PABPC3、PABPC4、PABPC4L为细胞质蛋白，PABPN1为核蛋白，ePABP为胚胎蛋白，PABPC5为X染色体编码蛋白。PABPs家族蛋白功能重要：决定mRNA的尾部长度，协助mRNA运输到胞质，参与mRNA蛋白翻译等。核蛋白PABPN1蛋白特殊之处在于，它只含有一个RRM(RNArecognitionmotif，RNA识别模体)。PABPN1L(PABPN1like,类聚腺苷酸核蛋白1)在人体广泛表达于多个组织脏器，在肾上腺、睾丸、子宫内膜等多组织器官均有高表达(PMID24309898)，在小鼠则体现为卵巢优势表达(PMID25409824)。PABPN1L的功能、特殊性值得更进一步的研究，因此，本专利技术提供的高效的、高特异性的PABPN1L抗体制备方法为相关研究提供重要基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，以解决
技术介绍
中提出的问题。为实现目的，本专利技术提供如下技术方案，一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，该方法包括如下步骤：S1：蛋白PABPN1L抗原表位分析，通过抗原表位分析选择目的片段用作蛋白PABPN1L的重组表达，所述目的片段的基因序列如序列表中SEQIDN0.1所示；S2：将选定的目的片段的DNA通过PCR扩增后插入到表达载体构建含有如SEQIDNO.1所示核昔酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得重组蛋白PABPN1L抗原；S3：将所述重组蛋白PABPN1L抗原免疫动物，经血清获得特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体。优选的，步骤S2中PCR扩增的引物序列为SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示。优选的，步骤S2中的表达载体为pET-28a(+)。优选的，大肠杆菌感受态为大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。优选的，步骤S3中重组蛋白PABPN1L抗原免疫的动物为新西兰大白兔、ICR小鼠。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术提供的特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，通过对蛋白A的抗原表位分析，把可产生较强免疫原性位点的基因片段选择合适的引物进行扩增，并采用该位点的氨基酸序列制备重组蛋白片段，用此片段免疫动物得到特异性针对该位点的抗体。在重组蛋白制备中采用大肠杆菌表达系统，能很好的保证重组蛋白的表达，表达产量高，有利于大批量的制备特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体。(2)本专利技术制备的特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体可应用于定量检测试验样品中ProteinPABPN1L的残留水平，同时也便于ProteinPABPN1L纯化介质制造商监测特定条件下ProteinPABPN1L的脱落特征。(3)本专利技术的特异性识别PABPN1L蛋白的多克隆抗体是免疫新西兰大白兔和ICR小鼠得到的，这两种都是符合实验室规范的常用实验动物，易于获得，品系稳定，取其血液，获得血清(血清无须纯化)即获得抗体，步骤简单，符合现代动物伦理制度。ICR小鼠适应性强，体格健壮，繁殖力强，生长速度快，抗体特异性高，实验重复性较好。附图说明图1为本专利技术实施例1中蛋白PABPN1L的梯度胶考马斯亮兰染色结果示意图；图2为实施例1中的PABPN1L亲水性，免疫原性及表位暴露性示意图；图3为实施例1中的信号肽预测。具体实施方式下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供一种技术方案：下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明实施例1：特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，一、抗原表位分析采用DNAstar软件进行抗原表位分析和疏水性分析，在SignalP4.1线上网站进行信号肽预测，选定目标序列并设计引物序列，所选片段的核酸序列：GTCTCCTCAGATCCTGAGGCCCAAGGTTGGGGGGCCTGGGGCAGGACTGAAAAGACCTCCTTGGTGCCAAGGGCTGGGAGTAGAGCAGGAAGTGACAAGGAAGCAGAGGAAAATGAAGATGCGAGCTTCCTTCTCTCCCTGCTGGAACCAGAGAACCTGGCCAAGTCCCCAGTATTCAACCAGGAGTTGGAGGCCATCAAGCTGAAACTGTGGGCCATGGAGCATGCTGAAGCCCAGCCGGAGCCACCCTGTGTACAGAGAAAGGCCACAGAGGAAGAGAGGGCTGAGGTCAGACAGCTG，其对应的氨基酸序列：VSSDPEAQGWGAWGRTEKTSLVPRAGSRAGSDKEAEENEDASFLLSLLEPENLAKSPVFNQELEAIKLKLWAMEHAEAQPEPPCVQRKATEEERAEVRQL。二、表达载体的构建1、蛋白A目的片段获取在南京金斯瑞生物科技有限公司通过全基因合成的方法，合成用于原核表达载体构建的DNA序列前引引物与后引引物，即合成如下所示的核苷酸序列。同源序列：上游同源序列(绿色是EcorI，红色是同源臂)：ATGGGTCGCGGATCCGAATTC下游同源序列(绿色是NotI，红色是同源臂)：TGGTGGTGCTCGAGTGCGGCCGCPABPN1L前引序列：ATGGGTCGCGGATCCGAATTCGTCTCCTCAGATCCTGAGGCCCA后引序列:TGGTGGTGCTCGAGTGCGGCCGCCAGCTGTCTGACCTCAGCCCTCTC2、PCR扩增以SEQIDNo.1所示的核苷酸序列为模板，按表1体系将溶液依次从多至少加入PCR管中(模板cDNA最后加入)进行PCR扩增。扩增的引物序列：前引序列：ATGGGTCGCGGATCCGAATTCGTCTCCTCAGATCCTGAGGCCCA；后引序列:TG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：/nS1：蛋白PABPN1L抗原表位分析，通过抗原表位分析选择目的片段用作蛋白PABPN1L的重组表达，所述目的片段的基因序列如序列表中SEQ ID N0.1所示；/nS2：将选定的目的片段的DNA通过PCR扩增后插入到表达载体构建含有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得重组蛋白PABPN1L抗原；/nS3：将所述重组蛋白PABPN1L抗原免疫动物，经血清获得特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
S1：蛋白PABPN1L抗原表位分析，通过抗原表位分析选择目的片段用作蛋白PABPN1L的重组表达，所述目的片段的基因序列如序列表中SEQIDN0.1所示；
S2：将选定的目的片段的DNA通过PCR扩增后插入到表达载体构建含有如SEQIDNO.1所示核苷酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得重组蛋白PABPN1L抗原；
S3：将所述重组蛋白PABPN1L抗原免疫动物，经血清获得特异性识别蛋白PABPN1L的多克隆抗体。


2.根据权利要求1所述的一种特异性识别蛋白PABP...

【专利技术属性】
技术研发人员：王莹，刘明兮，冯天昊，吴佳艳，
申请(专利权)人：南京市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：江苏;32