选择性增加诊断细胞数量的新制片方法技术

选择性增加诊断细胞数量的新制片方法，是将痰液经振荡、离心后用不同比重的细胞分离液对沉淀部分进行离心分离，取含大量与诊断有关的细胞的沉淀部分离心清洗后打匀、涂片、干后染色。采用本发明专利技术，能有效地将与诊断有关的细胞成分从痰样中分离出来，使用于诊断的细胞数比常规方法高１０－２０倍。本发明专利技术为大规模普查肺癌提供了简单快速有效的诊断方法，还可用于胸、腹腔积液、脑积液、食道、胃、肠刷片标本的分离处理。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种痰细胞学检查中的痰检制片方法。目前用于呼吸系统疾病组织细胞学的诊断方法有痰细胞学检查、纤维支气管镜活检及针吸细胞学检查等方法。痰细胞学检查是唯一一种对人体无损害，并能对肺病疾病进行诊断的方法。它取样容易、经济无害，能用于许多疾病，如炎疹、肿瘤的诊断。目前在世界范围内通用的常规痰检制片方法，是将痰液直接涂于载玻片上，不仅涂片面积大，而且痰液中能用于诊断的细胞成分少，粘液成分多、炎性细胞多、干扰大，不利于医生和扫描仪器从痰液中找到相关的细胞成分，用于诊断肺癌，其阳性率仅15％左右，故使其不能在临床诊断中发挥其应有的作用。本专利技术的目的是针对上述问题，旨在提供一种可选择性提高涂片中有助于临床诊断的细胞数量，以利于医生和扫描仪能快速有效地诊断的制片方法，它还可用于宫颈刮片细胞、胸腔积液、腹腔积液、脑积液、食道、胃、肠刷片标片的制片。本专利技术目的的实现方式为，，取诊断液振荡打匀后，放入离心机中离心5-20分钟，去除上清液，向沉淀部分中加入0.1-10％二硫苏糖醇消化30-60分钟，待用。用固定液配制两种密度不同的细胞分离液、固定液采用Sedfix,4-10％福尔马林或75％酒精，细胞分离液采用Percoll或蔗糖。按先比重小、后比重大的顺序将5-15ml细胞分离液加入50ml离心管中再加入诊断液后，以2000-4000转/分的速度离心分离10-30分钟，取出与诊断有关的成分，弃去上清液及其它细胞成分。用固定液对沉淀部分再次离心清洗后，将沉淀的细胞打匀、涂片、干后染色。下面参照附图对本专利技术详细说明。附图说明图1用细胞分离液分离痰液步骤及结果示意2本专利技术和常规方法涂片面积及所含细胞对比3采用本专利技术的支气管冲洗细胞扫描状态图。本专利技术采用两种比重不同的细胞分离液2、3按图1所示的步骤将痰液1用离心分离的方式分离成细胞液4和细胞液5两层，从右边的彩色图片可见，细胞液4中绝大部分为炎性细胞，只有极少量上皮细胞，而与诊断有关的细胞则分离在细胞液5中。本专利技术细胞分离液的配制方法为，取瑞典Pharmacia，公司生产的Percoll或蔗糖用固定液Sedfix、4-10％福尔马林或75％酒精中的任一种配成不同比重的两种液体，两种液体加入离心管中。两种分离液具体为Percoll液体1d1 1.70-1.096液体2d2 1.010-1.060蔗糖 液体1重量％ 70-95％液体2 40-65％。本专利技术方法相对常规方法涂片面积小，涂片中所含诊断细胞多，具体对比如下涂片面积上皮细胞数单位面积上 细胞仪皮细胞数扫描时间本方法 25mm230000 1200＜20分钟常规方法900mm2400 0.4 2小时涂片面积及涂片中所含上皮细胞数的对比还可见图2，图2a、b为常规方法的结果，c、d为本专利技术方法的结果。采用本专利技术制片方法所涂的涂片，用扫描仪在短时间内扫描，即可从痰液中检测出如图3中所示的磷状上皮细胞6，尘细胞7、纤毛柱状上皮细胞8、肺癌细胞株9 。采用本专利技术制片方法可有目的地将与诊断有关的细胞成分从痰样中分离出来，选择性增加了诊断细胞肺上皮细胞，基底细胞、肺肿瘤细胞株的数量，且其数量比常规方法提高10-20倍，而与诊断无关的细胞数又大大减少，从而提高肺癌诊断阳性率。本专利技术明显降低了医生和细胞扫描仪的工作量，提高了工作效率，为大规模进行肺癌普查提供了简单、快速和有效的诊断方法，它还可用于其它临床细胞学诊断的标本分离，如宫颈刮片、胸腔积液、腹腔积液，脑积液、食道、胃、肠刷片标本等，提高不同疾病诊断的阳性率。权利要求1.，其特征在于取诊断液振荡打匀后，放入离心机中离心5-20分钟，去除上清液，向沉淀部分中加入0.1-10％二硫苏糖醇消化30-60分钟，待用，用固定液配制两种密度不同的细胞分离液，固定液采用Sedfix,4-10％福尔马林或75％酒精，细胞分离液采用Percoll或蔗糖，按先比重小、后比重大的顺序将5-15ml细胞分离液加入50ml离心管中再加入诊断液后，以2000-4000转/分的速度离心分离10-30分钟，取出与诊断有关的细胞成分，弃去上清液及其它细胞成分，用固定液对沉淀部分再次离心清洗后，将沉淀的细胞打匀、涂片、干后染色。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于两Pereoll细胞分离液的比重分别为1.70-1.096,1.010-1.060。3.根据权利要求1所述的制片方法，其特征在于两蔗糖细胞分离液的浓度分别为70-95％，40-65％。全文摘要,是将痰液经振荡、离心后用不同比重的细胞分离液对沉淀部分进行离心分离,取含大量与诊断有关的细胞的沉淀部分离心清洗后打匀、涂片、干后染色。采用本专利技术,能有效地将与诊断有关的细胞成分从痰样中分离出来,使用于诊断的细胞数比常规方法高10—20倍。本专利技术为大规模普查肺癌提供了简单快速有效的诊断方法,还可用于胸、腹腔积液、脑积液、食道、胃、肠刷片标本的分离处理。文档编号G01N33/50GK1232181SQ9911638公开日1999年10月20日 申请日期1999年3月19日 优先权日1999年3月19日专利技术者孙小蓉 申请人:孙小蓉本文档来自技高网...

【技术保护点】
选择性增加诊断细胞数量的新制片方法，其特征在于取诊断液振荡打匀后，放入离心机中离心５－２０分钟，去除上清液，向沉淀部分中加入０．１－１０％二硫苏糖醇消化３０－６０分钟，待用，用固定液配制两种密度不同的细胞分离液，固定液采用Ｓｅｄｆｉｘ， ４－１０％福尔马林或７５％酒精，细胞分离液采用Ｐｅｒｃｏｌｌ或蔗糖，按先比重小、后比重大的顺序将５－１５ｍｌ细胞分离液加入５０ｍｌ离心管中再加入诊断液后，以２０００－４０００转／分的速度离心分离１０－３０分钟，取出与诊断有关的细胞成分， 弃去上清液及其它细胞成分，用固定液对沉淀部分再次离心清洗后，将沉淀的细胞打匀、涂片、干后染色。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙小蓉，
申请(专利权)人：孙小蓉，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]