p53+肿瘤细胞的选择性杀伤和诊断制造技术

提供了利用病毒治疗和诊断肿瘤疾病的方法和组合物。优选对患肿瘤（含有表现ｐ５３和缺乏或基本上无错配修复活性的细胞）的患者给药缺乏结合和／或灭活ｐ５３的病毒蛋白质的突变腺病毒。该突变病毒基本上能够在所述肿瘤细胞中产生复制表型，但基本上不能在具有基本正常ｐ５３功能的非复制、非肿瘤细胞中产生复制表型。复制表型在肿瘤细胞中的优先产生导致直接地或通过在表达病毒复制表型的细胞中表达毒性基因优先杀死肿瘤细胞。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于癌症领域，描述了表现p53肿瘤抑制活性但缺乏错配修复酶活性的肿瘤细胞的病毒治疗和诊断。
技术介绍
据信由生长限制性肿瘤抑制基因平衡的生长促进性原癌基因调节正常细胞的增殖。增强原癌基因活性的突变产生使肿瘤细胞生长的致癌基因。相反地，使肿瘤抑制基因失活的基因损伤，通常经过导致形成与失活的肿瘤抑制等位基因的纯合的细胞的突变，能够使细胞从这些基因设置的正常复制限制中释放出来。通常，失活的肿瘤抑制基因(例如，p53、RB、DCC、NF-1)结合活化的致癌基因(即，含有活化结构或调控突变的原癌基因)的形成能够产生一种能够基本上不受限制生长的肿瘤细胞(即转化细胞)。细胞的致癌基因转化导致细胞代谢、生理、和形态学的一些改变。致癌基因转化细胞的一个特征性改变是失去对细胞生长调节基因的适当表达形成的细胞正常增殖和分化的限制的响应性。虽然不同类型的遗传学改变都可能导致细胞生长调节基因表达或功能的改变，并导致异常生长，通常认为需要一种以上的条件才能导致从正常细胞到恶性细胞的肿瘤转化(Land等，1983，自然，304596；WeinbergRA，1989，癌症研究(Cancer Res．)493713)。对于大多数细胞类型，导致恶性转化的准确分子途径和二级改变还不清楚。曾报道很多情况下，具有推定的细胞循环控制功能和／或涉及功能性转录复合物形成(如p53和RB)的一些蛋白质表达或活性的改变可以导致细胞中增殖控制的丧失(Ullrich等，1992，生物化学杂志，26715259；Hollstein等，1991，科学，25349；Sager R，1992，当前细胞生物学观点(Curr．Opin．Cell．Biol．)4155；Levine等，1991，自然，351453)。已经发现在某些癌症的重要部分中，一些致癌基因具有特征性活化突变。例如，rasH和rasK编码区中的特定突变(例如，密码子12、密码子61；Parada等，1984，自然，312649)与培养细胞的致癌基因转化有关，并存在于惊人百分率的特定人癌中(例如，结肠腺癌、膀胱癌、肺癌和腺癌、肝癌)。这些发现导致特异性识别这些致癌基因活性形式的诊断和治疗试剂(例如，多核苷酸探针和抗体)的发展(美国专利4798787和美国专利4762706)。其它致癌基因，例如myc，erbB-2和pim-1的过量或不适当表达看起来能够加强致癌基因转化，而不必须需要编码区出现活化突变。通常在乳房、胃、和卵巢腺癌中发现erbB-2的过度表达，这些细胞类型中erbB-2的水平可以作为肿瘤形成的诊断标记，和／或可能与特定肿瘤表型相关(例如，对特定药物的抗性、生长速率、分化状况)。已经报道带有各种致癌基因(美国专利4736866和美国专利5087571)或功能性破坏的肿瘤抑制基因(Donehower等，1992，自然，356215)的转基因动物用于致癌物质的筛选分析，以及其它潜在应用。尽管在形成较为明确的转化表型和肿瘤形成的分子机制模型方面取得了进展，但很少得到超过传统化疗的用于治疗癌症的有效的治疗方法。一些传统化疗药物的治疗指数较低，治疗剂量水平为或接近产生毒性的剂量水平。大多数传统化疗药物的毒性副作用不令人满意，并导致威胁生命的骨髓抑制以及其它副作用。最近尝试进行校正或补充导致先天性疾病(例如囊性纤维化)的缺陷性等位基因的基因治疗研究，并报道取得有限的初步成功。一些基因治疗研究涉及利用复制-缺陷重组腺病毒将一种能够表达缺陷等位基因功能性拷贝的多核苷酸序列在体内转导到细胞中(Rosenfeld等，1992，细胞，68143)。这些基因治疗方法中的一些能够有效地将多核苷酸转导到从患者体内移植出来的分离细胞中，但没有显示在体内高度有效。依赖用编码肿瘤坏死因子(TNF)和白介素-2(IL-2)的多核苷酸转染移出的肿瘤细胞的癌症治疗研究也有报道(Pardoll D，1992，当前肿瘤学观点(Curr．Opin．Oncol．)41124)。虽然某一天可能证明基因治疗方法适合于在体内纠正转化细胞中致癌基因或肿瘤抑制基因的缺陷性等位基因，目前的基因治疗方法还没有报道肿瘤的实践性原位基因治疗能够有效地转导或正确靶向(例如通过同源重组)足够百分率的肿瘤细胞。癌症生物学的性质要求，有效治疗效果为消除肿瘤细胞的实质部分，优选转化细胞的所有克隆后代。而且，目前的基因治疗方法非常昂贵，需要离体培养移出的细胞，然后再导入患者。该方法即使有效，但其广泛应用的限制将是费用昂贵。因此，本领域需要诊断和治疗肿瘤疾病的方法和组合物，尤其是选择性消除肿瘤细胞而无传统抗肿瘤化疗典型的不期望的非肿瘤细胞杀伤作用。在这点上，专利技术人最近报道的突变腺病毒对缺乏肿瘤抑制基因p53的肿瘤细胞的选择性杀伤作用尤其值得注意。参见，美国专利5677178和Bischoff，J．R．等，科学，274卷，373-376页(1996)。通过利用突变腺病毒的分化能力在肿瘤细胞中而不是非肿瘤细胞复制和溶解肿瘤细胞，实现选择性杀伤。更具体地说，已显示某些复制-缺陷重组腺病毒，尤其是E1b功能(E1b-)缺陷的腺病毒能够在缺乏p53肿瘤抑制功能的肿瘤细胞中表现复制表型，并能够有效地杀死这些细胞。还显示含有正常p53功能的非肿瘤细胞相对地对复制缺陷重组腺病毒的杀伤作用具有抗性。目前已经报道，存在一种群表现p53的肿瘤细胞，它们也可以被突变E1b-腺病毒杀死。Heise，C．等，天然药物(Nature Medicine)3卷，639-645页(1997)。在这些肿瘤细胞中促进E1b-杀伤的遗传诱因还不清楚。因此使一个将要处方治疗癌症患者的医生拥有一种判定患者的肿瘤是否由易于被突变E1b-腺病毒杀伤的p53+细胞组成的方法特别有利。提供本文涉及的参考文献主要为其在本申请申请日之前的公开内容。本文中没有什么将被解释为不允许本专利技术人通过先专利技术而提前该公开的日期承诺。专利技术概述本专利技术提供了利用缺乏能够结合功能性p53肿瘤抑制基因产物的表达的病毒癌蛋白质的重组复制缺陷腺病毒诊断和／或消除表现肿瘤抑制基因p53的肿瘤细胞，而对非肿瘤细胞很少或没有影响的新方法和组合物。肿瘤细胞以尚不清楚的方式显示，由于缺乏或基本上降低了错配修复活性(通过这些细胞支持病毒复制的能力评价)而降低了p53功能。本专利技术的腺病毒构建体在肿瘤细胞和非肿瘤细胞中复制表型的差异提供了癌症的病毒基治疗的生物学基础。腺病毒致细胞病变效应的表达与腺病毒复制表型有关，该复制表型代表本专利技术的重组腺病毒构建体感染肿瘤细胞，因此区别肿瘤细胞和非肿瘤细胞，并提供肿瘤细胞的选择性细胞毒作用。虽然本专利技术具体针对腺病毒构建体详细描述，但认为本专利技术将应用到基本上所有病毒类型，其中有效复制需要结合／或螯合和／或灭活存在于非肿瘤细胞但在肿瘤细胞中基本上缺乏或无功能的宿主细胞蛋白质(例如，p53)。为了使腺病毒在细胞中有效复制，腺病毒E1b基因产物，p55，与宿主细胞p53蛋白质形成复合物，从而螯合和／或灭活p53并产生p53功能缺陷的细胞。后者还在缺乏或基本上无错配修复活性的p53+细胞中出现。该使p53功能缺陷的细胞能够支持腺病毒的复制。这样，野生型腺病毒能够在含有p53的细胞中复制，因为腺病毒p55蛋白质灭活和／本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种消除细胞群中的肿瘤细胞的方法，包括以下步骤：在感染条件下使（１）缺乏能够结合功能性ｐ５３肿瘤抑制基因产物的表达的病毒癌蛋白质的重组复制缺陷腺病毒与（２）包括含有所述能够与病毒癌蛋白质形成结合复合物的功能性肿瘤抑制基因产物的非肿瘤细胞，和含有所述功能性肿瘤抑制基因产物但缺乏或基本上无错配修复活性的肿瘤细胞的细胞群接触，从而产生感染细胞群。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：A桑普森约翰尼斯，D柯恩，
申请(专利权)人：昂尼克斯药物公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]