新的人的类谷氧化蛋白及其编码序列制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人的类谷氧化蛋白（ｈＧＲＸ－Ｂｉｏ３６），编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于诊断和治疗多种疾病的方法，如生殖系统疾病、心血管系统疾病、脑缺血和脑神经细胞的损伤、以及免疫性疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人的类谷氧化蛋白（ｈＧＲＸ－Ｂｉｏ３６）的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽一人的类谷氧化蛋白(human glutaredoxin-Bio36，简称为“hGRX-Bio36”)，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。谷氧化蛋白(glutaredoxin，GRX)又称为硫基转移酶(thioltransferase)，是氧化还原蛋白大家族的成员之一，它是一种小分子量的蛋白质，广泛存在于原核生物和真核生物体内。编码谷氧化蛋白(GRX)的基因中都含有下述一段保守的活性序列“-Cys-Pro-Try-Cys-”。通过电泳迁移率变动分析，已知道野生型谷氧化蛋白(非重组后获得的GRX)，可通过二酰胺的被氧化而修复一种转录因子PEBP2的DNA结合活性，并与硫氧化蛋共同对PEBP2的DNA结合活性进行氧化还原调节(Nakamura T，et al，Free Radic Res1999 Oct；31(4)357-65)。通过对鼠体内的谷氧化蛋白(GRX)进行表达研究发现，谷氧化蛋白(GRX)还具有细胞防范氧化应激的重要功能。编码谷氧化蛋白GRX的基因能在鼠的大脑神经元细胞、内皮细胞、伸长细胞和室管膜细胞内表达而获得GRXmRNA和谷氧化蛋白(GRX)，其中在海马CA3区域的锥形神经细胞内表达最高，当中脑的动脉阻塞时，GRX mRNA的表达即下降。通过对谷氧化蛋白(GRX)进行免疫组织化学分析，发现大脑半球的局部缺血和神经细胞的损伤都可导致GRX的表达即下降(Takagi Y，et al，Biochem Biophys Res Commun 1999 May 10；258(2)390-4)。此外，谷氧化蛋白(GRX)作为一种细胞抗氧化剂，在人体卵巢的黄体细胞排卵循环过程扮演着重要的角色(Garcia-Pardo L，et al.Mol Hum Reprod 1999Oct；5(10)914-919)。因此，以治疗为目的的研究和开发谷氧化蛋白(GRX)多肽及其抗体、兴奋剂、抑制剂，在生理学、药理学上有着重要意义。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人的类谷氧化蛋白(简称为“hGRX-Bio36”)以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断和治疗与人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供分离的编码这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中16-999位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2265位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)”是指人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术提供了一种新的多肽——人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)，其基本上是由SEQ ID NO2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的人的类谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围之内。本专利技术还提供了分离的编码本专利技术hGRX-Bio36的核酸(多核苷酸)。在一个实例中，该核酸基本由编码具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。较佳地，本专利技术的多核苷酸序列包括SEQ ID NO1的核苷酸序列，该多核苷酸是从人胎脑组织的cDNA文库中发现的。它包含的多核苷酸序列全长为2265个碱基，其开放读框(16-999位)编码327个氨基酸的hGRX-Bio36。根据氨基酸序列同源比较发现，此多肽与线虫C.Elegans染色体III上的Z46787有51％的同源性，且编码该多肽的cDNA序列含有GRX基因家族的保守碱基，可推断出该新的人谷氧化蛋白(hGRX-Bio36)具有GRX家族相似的结构和功能。本专利技术hGRX-Bio36的cDNA序列同时还含有C3HC4型锌指蛋白(环指结构)基因的保守碱基，因此可能含有锌指蛋白的部分功能。本专利技术的多核苷酸可以是D本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人的类谷氧化蛋白ｈＧＲＸ－Ｂｉｏ３６，其特征在于，它包含：具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海生元基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]