一种新的多肽——硫解酶蛋白11和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－硫解酶蛋白１１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的硫解酶蛋白１１的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——硫解酶蛋白11，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。在真核生物及原核生物的体内发现了两种不同类型的硫解酶乙酰乙酰-CoA硫解酶和3-酮脂酰-CoA硫解酶。3-酮脂酰-CoA硫解酶(又称为硫解酶Ⅰ)具有广泛的底物特异性，在生物体内涉及各种物质降解途径，如脂肪酸β-氧化反应。而乙酰乙酰-CoA硫解酶(又称为硫解酶Ⅱ)特异地催化乙酰乙酰-CoA硫解过程，在生物体内涉及各种生物合成过程，如多聚β-羟苄基合成或类固醇生物合成过程等。在真核生物中，3-酮脂酰-CoA硫解酶含有两种不同的形式一种定位于线粒体上，另一种在过氧化物酶体中。在硫解酶的蛋白序列中，有两个半胱氨酸残基对于硫解酶的活性是十分重要的。第一个半胱氨酸残基位于酶蛋白序列的N末端，其涉及酰基酶中间物的形成；而第二个半胱氨酸残基位于蛋白序列的C末端，其为一活性位点残基，参与聚集反应中的去质子化过程。哺乳动物的非特异性脂肪转运蛋白(nsL-TP)(又称之为固醇载体蛋白2)也存在两种不同的形式一种为14Kd大小的蛋白(SCP-2)，另一种为较大的58Kd大小的蛋白(SCP-x)。前一种在细胞质或线粒体中存在，在生物体内参与脂肪的转运；而后一种在过氧化物酶体中被发现。SPC-x蛋白序列的C末端与SPC-2的C末端非常相似，而其蛋白序列的N末端与硫解酶的N末端在进化上相关。由上可知，硫解酶家族的成员在进化上具有一定的相关性。在硫解酶蛋白家族的成员中存在如下所示的三个保守的序列片段序列片段1--X(2)-C-----X---X(6)-(其中C涉及酰基酶中间物的形成)；序列片段2N-X(2)-G-G-X---X-G-H-P-X--X--G；序列片段3-----C-X--X--X--X-(其中C为活性位点氨基酸残基)；除nsl-TP不含有序列片段3外，所有该酶家族的成员均含有上述三个保守的序列片段。前两个序列片段是围绕两个半胱氨酸残基的区域，而序列片段3为这些蛋白的高度保守的C末端序列区域。这三个序列片段均是硫解酶发挥正常生理学功能的活性中心区域，这三个序列片段的突变将导致酶的表达异常或失活，从而影响一系列与之相关的脂代谢反应的进行。如上所述，硫解酶在脂肪酸β氧化、类固醇生物合成等多种脂肪代谢途径中起着重要的调节作用。而脂肪酸β氧化及类固醇生物合成是生物体内脂肪酸分解及合成的主要路径，这两个路径的异常将直接导致脂肪酸在体内的分布异常，严重的将引发各种相关的代谢紊乱症，因而，硫解酶作为脂肪酸代谢的重要调节物亦有着十分重要的作用。该酶的表达异常通常将导致脂肪酸合成及分解途径的异常，其与生物体内各种脂肪酸代谢紊乱症及一些相关的物质代谢紊乱症的发生有关。由于如上所述硫解酶蛋白11蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的硫解酶蛋白11蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新硫解酶蛋白11蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——硫解酶蛋白11以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码硫解酶蛋白11的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码硫解酶蛋白11的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产硫解酶蛋白11的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——硫解酶蛋白11的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——硫解酶蛋白11的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与硫解酶蛋白11异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中3221-3511位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-4368位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制硫解酶蛋白11蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与硫解酶蛋白11蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于硫解酶蛋白11表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与硫解酶蛋白11结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－硫解酶蛋白１１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]