一种新的多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-27和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人纤溶酶原激活物抑制剂２－２７，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如出血性疾病，血栓形成，脑梗塞，心肌梗塞，各种肿瘤，炎症，炎症修复异常相关疾病，胚胎发育紊乱症，血液病，ＨＩＶ感染等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人纤溶酶原激活物抑制剂２－２７的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-27，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。纤溶酶原激活物抑制剂2是一种丝氨酸蛋白水解酶抑制物，在生物体内通过抑制尿激酶及组织纤溶酶原活性物的作用活性来调控纤溶酶的形成。与其它的丝氨酸蛋白水解酶抑制物相似，纤溶酶原激活物抑制剂2以1∶1的比例与相应的丝氨酸蛋白水解酶结合，以形成没有活性的蛋白水解酶复合物，以抑制蛋白水解酶在体内的作用活性。纤溶酶原是一种常见的丝氨酸蛋白水解酶，在生物体内参与多种不同的生理学过程，包括血纤维蛋白溶解作用、组织重建、炎症反应及肿瘤转移等。纤溶酶原激活物抑制剂2通过调控纤溶酶原的形成来参与调节上述各种重要的生理过程。在生物体内，纤溶酶原激活物抑制剂2通常由周边血单细胞的内毒素及肿瘤细胞来刺激其表达与合成。纤溶酶原激活物抑制剂2的表达异常通常将导致生物体内相应的纤溶酶原的表达异常，从而影响如上所述的各种与之相关的生理学过程的异常。研究发现，纤溶酶原激活物抑制剂2与鸡的卵清蛋白非常相似，两者在体内的分泌均不需信号肽的存在，且均在母体受孕期间的子宫内高表达，由两者的结构与生物学活性的相似性，认为两者在进化上亦存在着一定的相关性。1987年，Ye等人从人中克隆得到了一纤溶酶原激活物抑制剂2蛋白，该蛋白的氨基酸序列中含有三个潜在的N-糖基化位点，而其380位的精氨酸残基位点和381位的苏氨酸残基位点是一典型的丝氨酸蛋白酶抑制作用中心。该蛋白在体内的表达受多种细胞因子、激素及佛波酯类物质的共同调节。由上可知，纤溶酶原激活物抑制剂在生物体内调控着各种相关的纤溶酶原蛋白的作用活性，而纤溶酶原在生物体内参与多种重要的生理过程，如细胞组织重建、各种炎症反应及肿瘤细胞的转移等。纤溶酶原激活物抑制剂在生物体内正是通过调控纤溶酶原蛋白的形成来参与调控各种相关的过程的发生，该蛋白的表达异常将导致纤溶酶原的表达异常，进而影响一系列与之相关的生理过程的发生。该蛋白在生物体内通常与各种相关的炎症反应、相关组织的肿瘤及癌症、胚胎发育紊乱性疾病等的发生等密切相关。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本专利技术的多肽的表达谱与人纤溶酶原激活物抑制剂2的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人纤溶酶原激活物抑制剂2-27。由于如上所述人纤溶酶原激活物抑制剂2-27蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人纤溶酶原激活物抑制剂2-27蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人纤溶酶原激活物抑制剂2-27蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-27以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人纤溶酶原激活物抑制剂2-27的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人纤溶酶原激活物抑制剂2-27的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人纤溶酶原激活物抑制剂2-27的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-27的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-27的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人纤溶酶原激活物抑制剂2-27异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中125-874位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-3206位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人纤溶酶原激活物抑制剂2-27蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人纤溶酶原激活物抑制剂2-27蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗出血性疾病，血栓形成，脑梗塞，心肌梗塞，各种肿瘤，炎症，炎症修复异常相关疾病，胚胎发育紊乱症，血液病，HIV感染或其它由于人纤溶酶原激活物抑制剂2-27表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人纤溶酶原激活物抑制剂２－２７，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]