一种新的多肽——人锌指蛋白30和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人锌指蛋白３０，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如各种肿瘤，神经系统疾病，血液性恶性疾病，发育紊乱症，代谢性疾病，ＨＩＶ感染，免疫性疾病和炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白３０的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人锌指蛋白30，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。锌指结构域是核酸结合蛋白的结构，在许多核酸结合蛋白中发现含有该结构域，这些蛋白是DNA转录过程的调控因子。一个锌指结构域由25至30个氨基酸残基构成。C2H2锌指是典型的锌指结构域。其中两个保守的半胱氨酸及组氨酸都位于结构域的端部，与一个锌离子配位，其保守的序列模板为#-X-C-X(1-5)-C-X3-#-X5-#-X2-H-X(3-6)-,X代表任何氨基酸残基，#-代表那些对于锌指稳定折叠较为重要的残基。C2H2锌指由两条短的β链后接一个α螺旋构成。螺旋的N-端部分与结合锌指的DNA主沟结合。这样一个结构域约和5个核苷酸相互作用。在C2H2型锌指蛋白ZID(带有作用域的锌指蛋白)，Ttk,GAGA,ZF5以及一组痘病毒蛋白的氨基酸末端有一段保守的特征序列模板，这一区域被称为POZ(痘病毒及锌指)域或是BTB域。ZID,Ttk以及GAGA的POZ域抑制其与DNA相关的指区域的相互作用。这种抑制作用不依赖与和其他蛋白的相互作用，也不依赖于POZ域及指区域之间的特异性作用(Struhl,K.(1989)Trends Biochem.Sci.14:137-140)。另一种锌指蛋白为C2C2型，其中锌离子与四个半胱氨酸残基形成配位键。在这类蛋白中，如以H2代替C2，则失去了与DNA的结合能力。所有的C2C2型锌指蛋白中的锌指结构尽管对于DNA结合是必需的，但对结合的专一性并不重要。因而负责识别专一性的氨基酸序列必定存在于其他部位(Berg,J.M.(1988)Proc.Nat.Acad.Sci.85:99-102)。与位于鼠七号染色体上锌指蛋白113高度同源的一种被定位于人染色体19q13.2上的人锌指蛋白，也是一种C2H2型锌指蛋白，该蛋白是DNA转录过程的调控因子，与人类多种疾病有关，例如中心核肌病，恶性高热的一种形式，葡萄糖磷酸异构酶缺乏，对脊髓灰质炎易感性，高脂蛋白血症1b与3型，强直性肌营养不良以及着色性干皮病D群。本专利技术的多肽与上述定位于人染色体19q13.2上的人锌指蛋白在蛋白水平上有67％的同一性及75％的相似性，故认为本专利技术的新多肽与位于人染色体19q13.2上的人锌指蛋白具有形似的生物学功能，其分子量为30，因而被命名为人锌指蛋白30。该多肽及其抑制剂拮抗剂激动剂可用于诊断防治与转录因子突变有关的癌肿或疾病，例如早幼粒细胞白血病，弥散性大细胞淋巴瘤，中心核肌病，恶性高热的一种形式，葡萄糖磷酸异构酶缺乏，对脊髓灰质炎易感性，高脂蛋白血症1b与3型，强直性肌营养不良以及着色性干皮病D群等。由于如上所述人锌指蛋白30蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白30蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白30蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白30以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白30的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白30的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人锌指蛋白30的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人锌指蛋白30的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人锌指蛋白30的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白30异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中182-1015位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1931位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人锌指蛋白30蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人锌指蛋白30蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人锌指蛋白30表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与人锌指蛋白30结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白３０，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]