一种新的多肽——人DNA错配修复蛋白15和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人ＤＮＡ错配修复蛋白１５，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人ＤＮＡ错配修复蛋白１５的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽－－人DNA错配修复蛋白15，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。DNA聚合酶偶尔能催化不能与模板形成氢键的错误碱基的掺入。这种复制错误通常由DNA聚合酶3’－－5’的校对功能立即进行纠正，然后才开始下一个核苷酸的聚合反应。然而在某些特殊条件下，DNA聚合酶将极少数的错误碱基遗留在DNA链上而没有进行纠正。据估计，这种错误的频率为10-8。然而，人们实际测量到的突变频率为10-10或10-11。由于DNA的完整性和精确性是生命的根本所在，因而细胞中演化出另一个修复系统，叫做错配修复系统，给予第二次纠正错误的机会。(Modrich P.Annu.Rev.Biochem.56:435-466(1987))腺嘌呤的甲基化则是错配修复的识别标志，根据甲基化带来的特征，错配修复系统就可以识别出模板链和新生链，从而纠正新生上的不配对碱基，保证了高度的精确性和完整性。DNA错配修复蛋白是错配修复系统中重要的组成蛋白，DNA错配修复蛋白在很多生物体内都有存在，例如，大肠杆菌的mutL蛋白；链球菌的hexB蛋白；酵母的PMS1和MLH1蛋白；人的MLH1(MutL homologue-1)蛋白等等。所有的DNA错配修复蛋白均含有一保守的区域，该区域含有以下一致的序列片段G-F-R-G-E-A-L，在众多不同生物的DNA错配修复蛋白中均含有这一序列片段，这一结构基序在蛋白发挥正常生理学功能的过程中起着极为重要的作用。对酵母的DNA错配修复蛋白研究的结果显示，Pro640如果变为Leu则会造成蛋白功能的完全失去。DNA错配修复蛋白具体的结构及其与功能的关系请参阅相关文献。(Gene 1998 Jun 15；213(1-2):159-67)根据已有的研究，如果编码人DNA错配修复蛋白的基因发生突变，则会导致可遗传的non-polyposis colorectal cancer(HNPCC)。(Gene 1998 Jun15；213(1-2):159-67)最近的研究结果显示，DNA错配修复蛋白(DNA mismatch repair protein MMR)与一种新的人核酸外切酶有很强的相互作用，我们可以推测，DNA修复蛋白是与很多蛋白结合在一起对DNA的修复起作用的。(Cancer Res 1998 Oct15；58(20):4537-42)也有研究表明，DNA错配修复蛋白在细胞周期过程中，对于DNA复制中可能出现的错误碱基的掺入有着重要的修复作用，从而保证了细胞有丝分裂过程遗传的忠实性。(Cancer Res 1998 Feb 15；58(4):767-78)通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本专利技术的多肽的表达谱与人DNA错配修复蛋白11的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人DNA错配修复蛋白15。由于如上所述人DNA错配修复蛋白15蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人DNA错配修复蛋白15蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人DNA错配修复蛋白15蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽－－人DNA错配修复蛋白15以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人DNA错配修复蛋白15的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人DNA错配修复蛋白15的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人DNA错配修复蛋白15的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽－－人DNA错配修复蛋白15的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽－－人DNA错配修复蛋白15的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人DNA错配修复蛋白15异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中522-929位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1631位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人DNA错配修复蛋白15蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人DNA错配修复蛋白15蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人DNA错配修复蛋白15表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ＤＮＡ错配修复蛋白１５，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]