脑膜炎奈瑟氏球菌抗原性多肽、相应多核苷酸和保护性抗体制造技术

本发明专利技术提供ＢＡＳＢ０３０多肽和编码ＢＡＳＢ０３０多肽的多核苷酸以及通过重组技术生产这种多肽的方法。本发明专利技术还提供诊断性、预防性和治疗性的应用。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及多核苷酸(这里指“BASB030多核苷酸”)、它们编码的多肽(这里指“BASB030”或“BASB030多肽”)、重组物质以及它们的制备方法。在另一个方面，本专利技术涉及使用这种多肽和多核苷酸包括抵抗细菌感染的疫苗的方法。再一方面，本专利技术涉及检测特定病原体感染的诊断试验。
技术介绍
脑膜炎奈瑟氏球菌(脑膜炎球菌)是一种能经常从人的上呼吸道分离到的革兰氏阴性细菌。它偶尔能导致侵袭性的细菌疾病如菌血症和脑膜炎。脑膜炎疾病的发生显示出地理、季节和年度差异(Schwartz,B.Moore,P.S.,Broome,C.V.；《临床微生物综述》2(增刊)，S18-S24,1989)。在温带国家，多数疾病是由血清型B菌株引起的，年发病率在总人数的十万分之一至十万分之十之间变化，有时会达到更高的数值(Kaczmarski,E.B.(1997),Commun.Dis.Rep.Rev.7:R55-9,1995；Scholten,R.J.P.M.,Bijlmer,H.A.,Poolman,J.T.等《临床感染性疾病》16:237-246,1993；Cruz,C.,Pavez,G.,Aguilar,E.，等《感染流行病学》105:119-126,1990)。由血清型A脑膜炎球菌引起的流行病，主要在中部非洲，有时能达到每年十万分之一千(Schwartz,B.,Moore,P.S.,Broome,C.V.《临床微生物综述》2(增刊)，S18-S24,1989)。就脑膜炎疾病的整体来看，几乎所有的病例都是由血清型A、B、C、W-135和Y脑膜炎球菌引起的，并且可以使用一种4价A、C、W-135、Y的多糖疫苗(Armand,J.,Arminjon,F.,Mynard,M.C.,Lafaix,C.,《J.Biol.Stand》10:335-339,1982)。多糖疫苗目前正通过将它们与载体蛋白化学偶联的方式进行改进(Lieberman,J.M.,Chiu,S.S.,Wong,V.K.等，JAMA 275:1499-1503,1996)。尚未获得一种血清型B的疫苗，因为B的荚膜多糖被发现是非免疫原性的，很可能是由于它与宿主成分具有结构上的相似性(Wyle,F.A.,Artenstein,M.S.,Brandt,M.L.等，《传染病杂志》126:514-522,1972；Finne,J.M.,Leinonen,M.,Mkel,P.M.《柳叶刀》ii:355-357,1983)。为开发以脑膜炎球菌外膜为基础的疫苗，人们已经努力了多年(deMoraes,J.C.,Perkins,B.,Camargo,M.C.等《柳叶刀》340:1074-1078,1992；Bjune,G.,Hoiby,E.A.Gronnesby,J.K.等，338:1093-1096,1991)。这种疫苗已证明在大儿童(＞4岁)和成年人中的有效性为57％-85％。这些疫苗中存在许多细菌外膜组分，例如PorA、PorB、Rmp、Opc、Opa、FrpB，这些成分对观察到的保护作用所作的贡献仍需进一步确定。使用动物或人抗体已经确定了可能与保护性免疫的诱导相关的其他细菌外膜组分，例如TbpB和NspA(Martin,D.,Cadieux,N.,Hamel,J.,Brodeux,B.R.,《实验医学杂志》185:1173-1183,1997；Lissolo,L.,Maitre-Wilmotte,C.,Dumas,P.等，Inf.Immun.63:884-890,1995)。保护性免疫的机制将涉及抗体介导的杀菌活性和吞噬调理作用。一种菌血动物模型已被用来组合所有的抗体介导机制(Saukkonen,K.,Leinonen,M.,Abdillahi,H.Poolman,J.T.《疫苗》7:325-328,1989)。一般认为，晚期补体组分介导的杀菌机制对抵抗脑膜炎疾病的免疫来说至关重要(Ross,S.C.,Rosenthal P.J.,Berberic,H.M.,Densen,P.J.《传染病杂志》155:1266-1275,1987)。在过去几十年中，脑膜炎奈瑟氏球菌的发病率有了很大的提高。这已被归咎为多重抗生素抗性菌株的出现和具有较弱的免疫系统的人群体的增加。分离对某些或所有标准抗生素具有抗性的菌株不再是异常。这种现象就使我们产生了针对这种微生物的新型抗微生物试剂、疫苗、药物筛选方法和诊断试验的永不满足的需求。专利技术简述本专利技术涉及BASB030特别是BASB030多肽和BASB030多核苷酸、重组物质以及它们的制备方法。在另一个方面，本专利技术涉及使用这种多肽和多核苷酸的方法，包括微生物疾病的预防与治疗及其他。在一个进一步的方面，本专利技术涉及检测与微生物感染有关的疾病及与这样的感染有关的症状的诊断试验，例如检测BASB030多核苷酸或多肽的表达或活性的试验。通过阅读下面的描述和本公开的其他部分，本领域的技术人员将很容易理解在本专利技术公开的精神和范围之内的各种改变和修饰。专利技术详述如下文的详细介绍，本专利技术涉及BASB030多肽和多核苷酸。具体地说，本专利技术涉及脑膜炎奈瑟氏球菌的BASB030的多肽和多核苷酸，BASB030与淋病奈瑟氏球菌PilQ外膜蛋白在氨基酸序列上具有同源性。本专利技术尤其涉及具有分别列于SEQ ID NO:1,3,5和SEQ ID NO:2,4,6的核苷酸和氨基酸序列的BASB030。应当理解，在后面的序列表中列举为“DNA”的序列代表本专利技术的一个实施方案的举例，因为普通的技术人员就知道，这样的序列通常被用作多核苷酸，包括多核糖核苷酸。多肽在本专利技术的一个方面，提供了在这里被称为“BASB030”和“BASB030多肽”的脑膜炎奈瑟氏球菌的多肽，及其在生物学、诊断、预防、临床或治疗上有用的变体，以及含有它们的组合物。本专利技术进一步提供(a)含有这样一种氨基酸序列的分离多肽，该氨基酸序列与SEQ ID NO:2,4,6的氨基酸序列至少有85％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，最优选至少97-99％的同一性或完全相同；(b)由含有如下一种多核苷酸序列的分离多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸序列分别与SEQ ID NO:1,3,5的整个长度具有至少85％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，更优选至少97-99％的同一性或完全相同；或者(c)由含有如下一种多核苷酸序列的分离多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸序列编码这样一种多肽，这种多肽与SEQ ID NO:2,4,6的氨基酸序列至少有85％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，最优选至少97-99％的同一性或完全相同；SEQ ID NO:2,4,6中提供的BASB030多肽是来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090和H44/76的BASB030多肽。本专利技术还提供BASB030多肽的一种免疫原性片段，即BASB030多肽的一个连续的部分，它与含有SEQ ID NO:2,4,6的氨基酸序列的多肽具有相同或基本上相同的免疫原性活性。也就是说，该片段(必要时可与一种载体偶联)能够产生能识别BASB030多肽的免疫应答。这种免疫原性片段可包括诸如缺少本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有如下氨基酸序列的分离多肽，该氨基酸序列与选自ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４和ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６的氨基酸序列具有至少８５％的同一性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：JL吕勒，JPM托马森，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司，乌得勒支大学，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]