一种新的多肽——中枢大麻受体9和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

技术编号:2599063 阅读:176 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种新的多肽-中枢大麻受体9,编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法,如神经精神紊乱性疾病,发育紊乱症,神经系统的肿瘤或占位性病变,免疫性疾病,炎症,HIV感染等,尤其是用于治疗精神活性药物所致的精神障碍性疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的中枢大麻受体9的多核苷酸的用途。(*该技术在2020年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
,具体地说,本专利技术描述了一种新的多肽--中枢大麻受体9,以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。大麻的主要药理学活性成分是Δ9-四氢大麻醇--一种内源的兴奋剂,大麻受体存在于一些组织细胞的膜上,能够与大麻相关成分进行特异性结合,使细胞作出反应,从而产生兴奋。目前已经分别从鼠和人的大脑组织中得到了能够编码大麻受体的部分cDNA序列(Mat suda,L.A.,Lolait,et al.,1990)。人类大麻受体蛋白包含472个氨基酸残基,其中含有7个高度疏水区域,属于较为典型的G蛋白耦联受体超家族。大麻受体的主要成分是CB1,介导百日咳毒素敏感的GTP结合调节蛋白依赖的腺苷酰酶的抑制作用和N型Ca离子通道的抑制作用。(Mackie,K.,and Hille,B.,1992)。CB1及其mRNA最多存在于脑中,通过PCR也在外周组织中检测到。全长成熟编码区通过翻译可以得到一个CB1的缩短了的、末端氨基修饰的形式,并把它命名为CB1A。一种拮抗药分子SR 141716A能够特异性以高度的亲合力与中枢大麻受体相结合,这些特殊的配体对于各种大麻受体的结构和生理意义的深入研究起到了重要的促进作用(Rinaldi-Carmona,M.,Barth,F.,Héaulme,M.,et al.)。中枢大麻受体结构上的主要不同存在于其位于细胞外的长末端区域,该区段能够进行选择性切割,从而产生不同结构的受体。CB1 mRNA在氨基末端编码区域存在的两种不同形式。中枢大麻受体基因除了小编码区内含子以外,在人类该基因起始密码子的上游区域发现了一个巨大的内含子,至少有1.8Kb的长度。大多数小的非肽分子有小的氨基末端区域和配基结合位点,由七螺旋状的跨膜区域形成的口袋结构构成。(Frielle,T.,Daniel,K.W.,et al.,1988)。所有已知的大麻醇,包括内生配体,都是无肽的小分子,在中国大颊鼠类的卵巢细胞的表达中,我们发现被修饰了的CB1A和CB1在配体结合属性上有些不同。在CB1中有三个蛋白糖基化位点,但是由于不同的接合形成的CB1A缺少了其中的两个。研究发现,蛋白糖基化对于信号转导和亚细胞分配的指导具有非常重要作用。通过基因芯片的分析发现,在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中,本专利技术的多肽的表达谱与中枢大麻受体的表达谱非常近似,因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为中枢大麻受体9。由于如上所述中枢大麻受体9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用,而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白,因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的中枢大麻受体9蛋白,特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新中枢大麻受体9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础,因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--中枢大麻受体9以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码中枢大麻受体9的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码中枢大麻受体9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产中枢大麻受体9的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--中枢大麻受体9的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--中枢大麻受体9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与中枢大麻受体9异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽,该多肽是人源的,它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性交体、生物活性片段或衍生物。较佳地,该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸,它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸;(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸;(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70%相同性的多核苷酸。更佳地,该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中111-353位的序列;和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1344位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体,特别是表达载体;一种用该载体遗传工程化的宿主细胞,包括转化、转导或转染的宿主细胞;一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制中枢大麻受体9蛋白活性的化合物的方法,其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与中枢大麻受体9蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法,包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变,或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物,它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗神经精神紊乱性疾病,发育紊乱症,神经系统的肿瘤或占位性病变,免疫性疾病,炎症,HIV感染等,尤其是用于治疗精神活性药物所致的精神障碍性疾病或其它由于中枢大麻受体9表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开,对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分,也可以指基因组或合成的DNA或RNA,它们可以是单链或双链的,代表有义链或反义链。类似地,术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时,这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变,其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质,如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变,如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比,一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地,术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽-中枢大麻受体9,其特征在于它包含有:SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:毛裕民谢毅
申请(专利权)人:上海博德基因开发有限公司
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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