一种新的多肽──人谷氨酰胺富集因子36和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人谷氨酰胺富集因子３６，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人谷氨酰胺富集因子３６的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人谷氨酰胺富集因子36，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。真核转录因子是近十几年来发现的一类在真核基因转录过程中起调节作用的蛋白质。它们在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录。编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。对哺乳动物中的多种转录因子进行研究发现，各种转录因子中均含有80-100个左右氨基酸残基组成的长度不等的DNA结合结构域。DNA结合结构域大体上又有四种花式结构α螺旋-转角-α螺旋；Cys-His锌指；Cys-Cys锌指；Leu-拉链。花式结构对于维持整个结构域的结构及转录因子发挥正常的生物学功能都是十分重要的。肝细胞核因子3/fork head(HNF/fkh)蛋白家族在生物体内普遍存在。近几年，人们已从酵母至人体中分别克隆得到了众多该蛋白家族的成员。进一步的研究发现，该家族的成员均含有一由84-105个氨基酸残基组成的长度不等的特征性结构域--HNF/fkh结构域。HNF/fkh蛋白家族成员按其结构域原始序列的不同又可分为几个不同的亚类，不同亚类的家族成员除DNA结合结构域高度保守外，其余区域均没有明显的相似性。HNF/fkh结构域为DNA蛋白结合结构域中的一种，其在生物体内主要参与与特定的DNA序列结合以调控各种不同基因的表达。研究发现，HNF/fkh蛋白家族的成员在生物体内具有许多重要的生物学功能，其与胚胎发育、细胞分化和增殖、各种器官形成、爱滋病等免役缺陷型疾病、冠心病、各种肝脏疾病及各种肿瘤、癌症的发生均有一定的关系(DaSlivaL,Kirken RA et al.,Gene 199822:135-142；Frank S,Zoll B；DNA Cell Biol199817:679-88)。HNF/fkh结构域由10个独立的结构单位组成。其N末端有一钩状结构，后跟两个亲水性螺旋结构。这两个螺旋结构被一转角结构分开，既DNA结合结构域花式结构中的α螺旋-转角-α螺旋结构。其中，螺旋结构中几个保守的氨基酸残基形成了两个疏水性中心，这两个疏水性区域与蛋白间相互作用及HNF/fkh结构域的稳定性有关。第二个α螺旋中唯一的T23残基为CK-2激酶的识别位点，这一位点的磷酸化与去磷酸化可能直接影响DNA的结合活性及HNF/fkh结构域二级结构的形成。同时，这一α螺旋还被证实为一识别螺旋，与DNA的识别及结合有关，其外侧面是蛋白与DNA结合专一性的主要决定因素；该花式结构后接一个芳香族残基及第三个亲水性螺旋结构，形成了结构域的中心部分；在结构域的C末端含有两个长度可变的环状(loop)结构，其两侧由七个氨基酸残基组成的螺旋后接一短核苷酸链组成。这一C末端的短核苷酸链是结构域与DNA相互作用的区域，这一结构域中的钩状结构可能直接参与蛋白与DNA的相互作用(Li C,et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA1993,90:11583-11587)。由上可知，该结构域在转录因子与特定DNA序列相互作用，调节各种基因的表达过程中起着重要的作用。Li等人从小鼠的淋巴细胞中克隆到一个基因片段(A49395)，编码一个84氨基酸的多肽，富含谷氨酰胺，称之为谷氨酰胺富集因子(Glutamine(Q)-Rich factorl，简称QRF-1)。该多肽为一个典型的HNF/fkh结构域。研究表明该多肽参与了淋巴细胞的发育，在白血病的发生中也可能起作用(Li C,et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA1993,90:11583-11587)。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与人谷氨酰胺富集因子的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人谷氨酰胺富集因子36。由于如上所述人谷氨酰胺富集因子36蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人谷氨酰胺富集因子36蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人谷氨酰胺富集因子36蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人谷氨酰胺富集因子36以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人谷氨酰胺富集因子36的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人谷氨酰胺富集因子36的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人谷氨酰胺富集因子36的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人谷氨酰胺富集因子36的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人谷氨酰胺富集因子36的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人谷氨酰胺富集因子36异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中200-1186位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1822位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人谷氨酰胺富集因子36蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人谷氨酰胺富集因子36蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人谷氨酰胺富集因子３６，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]