粘膜炎莫拉氏菌BASB034多肽及应用制造技术

本发明专利技术提供ＢＡＳＢ０３４多肽及编码该多肽的多核苷酸，以及通过重组技术生产该多肽的方法。也提供其在疾病诊断，预防及治疗方面的应用。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多核苷酸(这里指“BASB034多核苷酸”)，由其编码的多肽(此处指“BASB034”或“BASB034多肽”)，用于这些产物的重组材料及方法。另一方面，本专利技术涉及应用这些多肽及多核苷酸的方法，包括抗细菌感染的疫苗。进一方面，本专利技术涉及用于检测特定病原感染的诊断分析。中耳炎对于儿童期讲，无论从病例数量还是其发病潜势上看，都是一种重要病变。在美国据报道每年该病例超过350万，并估计80％的儿童在3岁前会经历至少一次耳炎(Klein，JO(1994)Clin.Inf.Dis19823)。不处理或变成慢性，该病可导致暂时性(假如流体在中耳积聚)或永久性(如果听神经损伤)听力丧失。在婴儿中这样的听力丧失可导致语言学习的推迟。从患有中耳炎的儿童中分离得到了3个主要细菌品种肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)，非典型的流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenza)(NTHi)及粘膜炎莫拉氏菌(M.catarrhalis)。在60-90％病例中它们都存在。近期研究的一篇综述显示在中耳炎病例中，肺炎链球菌及HTHi占了其中的30％，粘膜炎莫拉氏菌占了其中的约15％(Murphy，TF(1996)Microbiol.Rev.60267)。其它细菌也可从中耳中分离得到(乙型流感嗜血杆菌，酿脓链球菌(S.pyogenes)等)，但只占较小频率(此病例的2％或更少)。流行病资料显示，对于在中耳中发现的病原菌，在上呼吸道建群是形成耳炎的绝对的先决条件；然而也需要其它条件导致疾病发生(Dickinson，DP等(1988)J.Infect.Dis.158205，Faden，HL等(1991)Ann.Otorhinol.Laryngol.100612)。这些对引起细菌通过咽鼓管迁移进入中耳是重要的，并随之启动炎症过程。这些因素现在是已知的。例如，假定一短暂的伴随病毒感染的免疫系统不正常，能引起呼吸道生殖菌群控制的失常(Faden，HL等(1994)J.Infect.Dis.1691312)。另一个解释为暴露于环境因素允许一些儿童更重要的菌群建群，他们因为中耳病原菌的持继存在随之变成对形成中耳炎易感(Murphy，TF(1996)Microbiol.Rev.60267)。对粘膜炎莫拉氏菌的免疫反应的特征描述不足，对从0到2岁婴儿鼻咽中连续分离到的菌株的分析表明，他们时常地获得及去除新菌株。这指示一种对该细菌的有效免疫反应被菌群建的儿童所运用(Faden，HL等(1994)J.Infect.Dis.1691312)。在许多被检测的成人中，已鉴定出了一些杀菌抗体(Chapman，AJ等(1985)J.Infect.Dis.15878)。粘膜炎莫拉氏菌菌株在它们的能力范围内以各种变异存在以抵抗血清活性一般来讲，从有病个体中分离到的病菌比仅简单建群中分离到的病菌抵抗力更强(Hol，C等(1993)Lancet 3411281，Jordan，KL等(1990)Am.J.Med.88(suppl.5A)28S)。因此，血清抗性可被认作该细菌的一种毒力因素。在从中耳炎恢复过来的儿童的血清中还观察到一种受调理的活性。被这些人中不同免疫反应定位的抗原没有被鉴定，除了OMP B1，一种表达受铁调控的84kDa蛋白质外，并且它是通过肺炎病人的血清鉴定出的(Sethi，S，等(1995)，Infect.Immun.631516)及UspAl，UspA2除外(Chen D.等(1999)，Infect.Immun.671310)。一些存在于粘膜炎莫拉氏菌表面的其它膜蛋白的已用生化方法或因为它们在诱导保护免疫反应(见综述，Murphy，TF(1996)Microbiol.Rev.60267)中的潜在的运用而定性。在小鼠肺炎模型中，对它们(UspA，CopB)中的一些，产生了抗体，还会导致肺部感染更快的清除。另一多肽(OMP CD)在粘膜炎莫拉氏菌株中是高度保守的，并与铜绿假单孢菌属(Pseudomonasaeruginosa)的一种膜孔蛋白的(porin)存在同源性，该膜孔蛋白已经在动物模型中被证明对此细菌是有效的。在过去的几十年中，粘膜炎莫拉氏菌感染率显著升高。这是由于多药抗性细菌株系的出现及弱免疫系统的人群的增加。分离对一些或全部标准抗生素具有抗性的粘膜炎莫拉氏菌株已经是很平常的事了。这一现象使医疗需求得不到满足，并导致需要得到针对该微生物的新的抗菌剂、疫苗、药物筛选方法和诊断测试。通过阅读下面的说明书和本公开的其它部分，在本专利技术所公开的精神和范围之内的各种变化和修饰对本领域的技术人员来说将是显而易见的。(c)一种由分离的多核苷酸编码的多肽，它含有一多核苷酸序列，其所编码的多肽与SEQ ID NO2，4，6或8的氨基酸序列至少85％一致，优选至少90％一致，更优选至少95％一致，更优选至少97-99％一致或完全一致。SEQ ID NO2，4，6或8中的BASB034多肽是来源于粘膜炎莫拉氏菌菌株Mc2931(ATCC 43617)，Mc2913及Mc2969的BASB034多肽。本专利技术也提供一种BASB034多肽免疫原性片段，即，一个连续的BASB034多肽部分，它具有与含有SEQ ID NO2，4，6或8中氨基酸序列的多肽一致或基本上一致的免疫原性活性，也就是说，该片段(如果必要，可与载体偶联)能够提高识别BASB034多肽的免疫反应。这样一种免疫原性片段可包括，例如，缺少N-端导肽序列和/或跨膜区和/或C-端锚定结构域的BASB034多肽。在一优选的方面，本专利技术的BASB034免疫原性片段包括该多肽的全部胞外结构域，该多肽就全长来说与SEQ ID NO2，4，6或8至少85％一致，优选至少90％一致，更优选至少95％一致，最优选至少97-99％一致。片段是指具有与本专利技术中任何一多肽部分但不是任何氨基酸序列的全部完全一致的氨基酸序列。如对于BASB034多肽，片段可以是“自由存在的”(“free-standig”)，或包含在一较大多肽内，在多肽中，片段形成一部分或区域，最优选地为在单一较大多肽内作为单一的连续的区域。优选的片段包括，例如，截短的多肽，它们具有SEQ ID NO2，4，6或8中氨基酸或其变体的一部分，例如包括氨基和/或羧基末端氨基酸序列的一种连续系列残基。由宿主细胞或在宿主细胞内形成的本专利技术中的多肽的降解形式，也是优选的。更优选的是通过结构及功能属性定性的片段，如片段含有α-螺旋及α-螺旋形成区域，β-片层及β-片层形成区域，转角及转角形成区域，卷曲及卷曲形成区域，亲水区域，疏水区域，α-两性区域，β-两性区域，柔性区域，表面形成区域，底物结合区域，高抗原指数区域(high antigenic indexregions)。更进一步优选的片段包括一种分离的多肽，它包括具有SEQ IDNO2，4，6或8的氨基酸序列中至少15，20，30，40，50或100个连续的氨基酸的氨基酸序列；或一种分离的多肽，它包括具有SEQ IDNO2，4，6或8的氨基酸序列截短或缺失的序列中至少15，20，30，40，50或100个连续的氨基酸的序列。本专利技术的多肽片段通过肽的合成可用于产生相应全长本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，包括与选自ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６和ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８的氨基酸序列有至少８５％一致的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JL吕勒，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]