应用室温玻化技生产室温稳定的免疫层析试条制造技术

本发明专利技术涉及一种应用室温玻化技术生产室温稳定的免疫层析试条，其生产工艺包括第一步，检出区带的包被；第二步，质控区带的包被；第三步，封阻与玻化，把喷有检出区带和质控区带的硝酸纤维素膜，于室温干燥１小时后放入加有玻化液和防腐剂的封阻剂中封阻３小时，再置于室温玻化机内进行玻化；第四步，可动金标抗体区带群的喷涂；第五步，试条在局部去湿柜中的装配。本发明专利技术通过室温玻化技术使包被于试条上的抗体玻璃化，以保证试条能在室温下稳定。本发明专利技术的试条用于诊断检测，使用简便、灵敏、直观、快速且实用。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物化学和电子自动控湿技术，特别涉及一种应用室温玻化技术生产室温稳定的能快速筛选寄生虫病的免疫层析试条。当代临床诊断学界，把按免疫层析原理制造的、能在3~5分钟内获得结果的、非专业人员亦能操作的、可实现家庭自测的各种免疫层析法诊断试条，视为继酶联免疫吸附测定法(ELISA)、点印渍法(俗称渗滤法或膜法)之后的第三代产品。从理论上讲，目前上市的数百种第一、二代产品都能改进为第三代产品。为此，世界各国正在竞相研制。迄今为止，国外有30余种免疫层析诊断试条产品已经上市销售。在我国虽有不少相关论文报道，但已获药证、准予上市的仅为数种。究其原因，正如该领域著名的秦晓光教授最近撰文所述，此在于生产条件和制造工艺不合理所造成的试条不稳定性所致(详见中华医学检验杂志，1999，22(6)325-326)。组成免疫层析诊断试条的主要成分是抗体，属蛋白质类。通常认为，蛋白质是生物活性物质，需存于冰箱始能保持其活性。为使蛋白质类产品能在室温下稳定，专利技术人范培昌教授于1997年专利技术了被上海市科委鉴定为“国际先进、国内首刨”的蛋白质类室温玻化技术(鉴定证书号为沪科鉴(98)ZR4277)，并同时申请了“室温玻化机”专利技术专利(中国专利技术专利公开号CN1216677A)。在我国，现已把各种免疫层析诊断试条的研制均归属于生物高科技重点发展项目，并规定必须具有10万级以上净化室的生产条件始准生产。专利技术人范培昌教授在预备实验中发现，净化室内无菌、无尘的环境对试条的质量稳定性固然重要，但净化室内的相对湿度也是影响试条稳定性的重要因素，最好能控制在25％~30％。然而，纵观国内外现在使用的净化室，大多只能把净化室的相对湿度控制在45％~50％以内。少数使用大功率去湿机组的净化室，虽说能把净化室的相对湿度控制到30％，但此湿度对于在室内的工作人员而言已感不适，因此迫使厂方采取每2小时换班一次的非常措施。鉴于如此，本专利技术的目的是提供一种应用室温玻化技术生产室温稳定的免疫层析试条，它通过室温玻化技术使包被于试条上的抗体玻璃化，以保证试条能在室温下稳定。本专利技术的技术方案如下一种应用室温玻化技术生产室温稳定的免疫层析试条，其生产工艺包括下列步骤第一步，检出区带的包被把针对引发某种疾病，或因患某种疾病始产生或增或减的特有抗原的单克隆抗体，如针对引发疟疾的疟原虫富组蛋白II的单克隆抗体，或者针对因患肝癌而大量产生的甲胎蛋白的单克隆抗体，或者针对怀孕而增量的绒毛膜激素的单克隆抗体等，作为包被抗体；把包被抗体灌入点样机1号喷针所连容器；启动点样机，使包被抗体以区带形式喷于硝酸纤维素(NC)膜条上，作为检测其相关抗原的检出区带；第二步，质控区带的包被把上述硝酸纤维素膜返回原点，并向上调距，启动点样机上已灌装有抗标记抗体(又名二抗)的2号喷针，使喷成又一区带，作为检测免疫层析试条成品有否发生因室温存放而导致试条上活性分子失活的质控区带；第三步，封阻与玻化把第一、二步同时喷有检出区带和质控区带的硝酸纤维素膜，于室温干燥1小时后放入加有玻化液和防腐剂的封阻剂中封阻3小时，再换用只有玻化液和防腐剂的混合物漂洗硝酸纤维素膜两次以上，每次15分钟；置于室温玻化机内，于45℃玻化20分钟；第四步，可动金标抗体区带群的喷涂把上述玻化好的硝酸纤维素膜再放在点样机平台上，并把硝酸纤维素膜调整在上述第一步的原有位置，再向下调距1cm，并在其后涂覆0.25cm宽的釉料，空气干燥；取具有针对同种抗原第二表位的单克隆抗体，经事先纯化和用金溶胶予以标记后，添加玻化液、防腐剂和输送加速液；经混匀后灌装于连接3号喷针的容器中；启动点样机，在釉料表面喷涂成区带；喷毕，把硝酸纤维素膜返回到原点，并向下调距0.05cm后，如前述喷涂成又一区带；如此重复共4次，使成区带间有0.05cm间距的4条金标抗体区带群；点毕，再把硝酸纤维素膜置于室温玻化机中，于45℃玻化20分钟；第五步，试条在局部去湿柜中的装配把第四步玻化好的硝酸纤维素膜，放入设置于10万级净化室(相对湿度为45％)中的局部去湿柜内，其相对湿度已预先自动恒定；然后在该局部去湿柜内进行操作，此时，工作人员实际上是处于相对湿度为45％的净化室中，只有已喷有润肤消毒液并戴有手套的双手插放在相对湿度只有25％的局部去湿柜中；操作时，先用双面胶把硝酸纤维素膜粘贴于长20cm、宽7cm的塑料衬垫中央，在硝酸纤维素膜的上、下两端分别覆上一片强吸水滤纸，并务使两片滤纸皆有0.3cm平整地重叠在硝酸纤维素膜的两端；然后，将上、下二片滤纸表面再分别覆盖一片略大于滤纸的彩色单面胶纸，位于下端的彩色单面胶纸印有此试条插入试样的深度线，用条状压实器压实，务使彩色单面胶纸长出部分平整地粘贴于硝酸纤维素膜表面；最后，把装配好的免疫层析片放入斩切机中斩切成宽0.4cm条，装入附有干燥剂袋的铝箔袋后，用铝箔封口机封口即为成品。本专利技术解决了免疫层析试条在室温存储下稳定性差的问题，通过室温玻化技术使包被于试条上的抗体玻璃化，以保证试条能在室温下稳定。本专利技术的免疫层析试条用于诊断检测，使用简便、灵敏、直观、快速且实用，其特点可归纳为1、方法简易，非专业人员亦可操作，适于家庭自测。2、只需微量血样，如指血。3、用肉眼即可直观结果，无需仪器设备，适于野外或现场大规模普查。4、全过程仅需3分钟，确属快速诊断法。下面结合附图和实施例对本专利技术作详细说明。附图是一种应用室温玻化技术生产室温稳定的免疫层析试条的结构示意图。参看附图，本专利技术的免疫层析试条上设有检出区带1和质控区带2，在免疫层析试条的下端喷涂有金标抗体区带群3。本专利技术应用室温玻化技术生产室温稳定的免疫层析试条，其生产工艺包括下列步骤第一步，检出区带的包被把针对引发某种疾病，或因患某种疾病始产生或增、减的特有抗原的单克隆抗体，例如，针对引发疟疾的疟原虫富组蛋白II的单克隆抗体；针对因患肝癌而大量产生的甲胎蛋白的单克隆抗体；针对怀孕而增量的绒毛膜激素的单克隆抗体等等，作为包被抗体。把包被抗体灌入XYZ 3000型点样机(购自美国Bio-Dot公司)1号喷针所连容器内。启动点样机，使包被抗体以区带形式喷于长25cm、宽3cm的硝酸纤维素(NC)膜条距底部2cm处，喷量为2μl/cm。此即后述免疫层析试条成品上作为检测其相关抗原的检出区带。第二步，质控区带的包被在完成第一步后，把上述硝酸纤维素膜返回原点，并向上调距0.5cm，启动点样机上已灌装有抗标记抗体(又名二抗)的2号喷针，使喷成又一区带。此带即是后述免疫层析试条成品上作为检测免疫层析试条成品有否发生因室温存放而导致试条上活性分子失活的质控区带。第三步，封阻与玻化把第一、二步同时喷有检出区带和质控区带的硝酸纤维素膜，于室温干燥1小时后放入加有玻化液和防腐剂的封阻剂中封阻3小时，再换用只有玻化液和防腐剂的混合物漂洗硝酸纤维素膜两次以上，每次5分钟。置于室温玻化机内，于45℃玻化20分钟。第四步，可动金标抗体区带群的喷涂把上述玻化好的硝酸纤维素膜再放在点样机平台上，并把硝酸纤维素膜调整在上述第一步的原有位置，再向下调距1cm，并在其后涂覆0.25cm宽的釉料，空气干燥。取具有针对同种抗原第二表位的单克隆抗体，经事先纯化和用金溶胶予以标记后，添加玻化液、防腐剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用室温玻化技术生产室温稳定的免疫层析试条，其生产工艺包括下列步骤：第一步，检出区带的包被：把针对引发某种疾病，或因患某种疾病始产生或增或减的特有抗原的单克隆抗体，如针对引发疟疾的疟原虫富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体，或者针对因患肝癌而 大量产生的甲胎蛋白的单克隆抗体，或者针对怀孕而增量的绒毛膜激素的单克隆抗体等，作为包被抗体；把包被抗体灌入点样机１号喷针所连容器；启动点样机，使包被抗体以区带形式喷于硝酸纤维素（ＮＣ）膜条上，作为检测其相关抗原的检出区带；第二步，质控区 带的包被：把上述硝酸纤维素膜返回原点，并向上调距，启动点样机上已灌装有抗标记抗体（又名二抗）的２号喷针，使喷成又一区带，作为检测免疫层析试条成品有否发生因室温存放而导致试条上活性分子失活的质控区带；其特征在于，采取第三步，封阻与玻化 ：把第一、二步同时喷有检出区带和质控区带的硝酸纤维素膜，于室温干燥１小时后放入加有玻化液和防腐剂的封阻剂中封阻３小时，再换用只有玻化液和防腐剂的混合物漂洗硝酸纤维素膜两次以上，每次１５分钟；置于室温玻化机内，于４５℃玻化２０分钟；第 四步，可动金标抗体区带群的喷涂；把上述玻化好的硝酸纤维素膜再放在点样机平台上，并把硝酸纤维素膜调整在上述第一步的原有位置，再向下调距１ｃｍ，并在其后涂覆０．２５ｃｍ宽的釉料，空气干燥；取具有针对同种抗原第二表位的单克隆抗体，经事先纯化和 用金溶胶予以标记后，添加玻化液、防腐剂和输送加速液；经混匀后灌装于连接３号喷针的容器中；启动点样机，在釉料表面喷涂成区带；喷毕，把硝酸纤维素膜返回到原点，并向下调距０．０５ｃｍ后，如前述喷涂成又一区带；如此重复共４次，使成区带间有０．０５ｃｍ间距的４条金标抗体区带群；点毕，再把硝酸纤维素膜置于室温玻化机中，于４５℃玻化２０分钟；第五步，试条在局部去湿柜中的装配：把第四步玻化好的硝酸纤维素膜，放入设置于１０万级净化室（相对湿度为４５％）中的局部去湿柜内，其相对湿度已预先 自动恒定；然后在该局部去湿柜内进行操作，此时，工作人员实际上是处于相对湿度为４５％的净化室中，只有已喷有润肤消毒液并戴有手套的双手插放在相对湿度只有２５％的局部去湿柜中；操作时，先用双面胶把硝酸纤维素膜粘贴于长２０ｃｍ、宽７ｃｍ的塑料衬垫中央，在硝酸纤维素膜的上、下两端分别覆上一片强吸水滤纸，并务使两片滤纸皆有０．３ｃｍ平整地重叠在硝酸纤维素膜的两端；然后，将上、...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：范培昌，石锋，
申请(专利权)人：上海正源生命技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]