一种日本血吸虫病快速诊断试纸制造技术

一种日本血吸虫病快速诊断试纸，其特征在于在塑料薄片条１的一面设置有加样区２、显色剂区３、检测区４、质控区５和吸水区６，加样区和吸水区由吸水纸构成，显色剂区由吸附有以显色剂标记的桥联物质的玻璃纤维纸构成，检测区由包被有日本血吸虫特异诊断抗原或抗体的硝酸纤维薄膜构成，质控区由包被有能与显色剂区中的桥联物质结合的质控物质的硝酸纤维薄膜构成，具有敏感性高、特异性强、操作简便、反应快速、微量准确和经济实用、适合现场应用等优点。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及寄生虫病的诊断试纸，特别是日本血吸虫病诊断试纸。现有资料表明全球约有75个国家和地区流行血吸虫病，5-6亿人口受到感染威/胁，患病人数达2亿。目前，我国7个省，118个县未能有效控制，仍有87万慢性病人，54万头病畜，其中病牛9万头，查治工作，任务艰巨。由于粪检方法本身及其实施过程中存在一定局限性，不得不将日本血吸虫病(Schistosomiasis japonica，Sj)免疫诊断技术摆在一个十分突出的位置，使其在相当范围内发挥出巨大作用。因此，寄希望于在日本血吸虫病免疫诊断方法学研究上，积极研究开发敏感性高、特异性强，并能够考核疗效，操作简便、反应快速、微量准确和经济实用的新方法。自50年代开始研究日本血吸虫病免疫诊断。目前，我国估计有50余种方法，但现场应用不到10种，如COPT、IHA、ELISA、Dot-ELISA等。导致日本血吸虫病免疫诊断出现上述现状的原因，首先是诊断用特异抗原或抗体筛选及标准化没有得到根本解决；其次，是检测方法学不够理想。此外，是试剂批量供应时稳定性得不到保证。世界卫生组织血吸虫病免疫诊断会议纪要提示抗体检测虽不能区分现症感染和既往感染，但检测特异性抗体仍为理想可取的诊断病人及流行区疫情监测的有效方法。卵源性CEF6抗原的同型抗体，即短程抗体IgG4水平下降，可作为考核疗效的指针；IgG4水平上升为再感染。感染曼氏和埃及血吸虫患者特异性IgG4高于健康人群20倍，治疗后IgG4显著降低。动物实验和病人检测表明，血吸虫感染宿主血清循环抗体(CAb)水平的动态变化，用现有血清学检测方法均可有效反映出来。血吸虫感染宿主体内循环抗原(Cag)比循环抗体(Cab)出现早，主要是虫体排泄分泌物质，故与虫体生活力有关。其释放量与感染度或虫血症水平大体上一致。检测CAg有可能作为早期诊断、活动感染、感染负荷和治疗效果等的依据。检测方法以单克隆抗体(McAb)为探针，有Dot-ELISA、双夹心ELISA和快速ELISA等方法，但检出率较低，检测效果还需进一步理想化。本专利技术的目的，是提供一种敏感性高、特异性强，能诊断和考核疗效，操作简便、反应快速、微量准确和经济实用、适于现场应用的日本血吸虫病快速诊断试纸。实现本专利技术的具体方案是该试纸以塑料薄片条1为固相支架，其特征在于在该塑料薄片条1的一面设置有加样区2、显色剂区3、检测区4、质控区5和吸水区6五个部分，加样区2和吸水区6分别位于塑料薄片条1的两端，二者都由吸水纸构成，并以双面胶纸固定于塑料薄片条1上；显色剂区3紧邻加样区，由吸附有以显色剂标记的能结合被测样品中日本血吸虫抗原或抗体并能与质控区的质控物质结合的桥联物质的玻璃纤维纸构成，该玻璃纤维纸以双面胶纸固定于塑料薄片条1上；检测区4和质控区5位于显色剂区3与吸水区6之间，其位置可以互换，检测区4由包被有日本血吸虫特异诊断抗原或抗体的硝酸纤维薄膜构成，质控区5由包被有能与显色剂区3中的桥联物质结合的质控物质的硝酸纤维薄膜构成，构成检测区4和质控区5的硝酸纤维薄膜为同一张硝酸纤维薄膜，该硝酸纤维薄膜以双面胶纸固定于塑料薄片条1上，构成检测区4的含有日本血吸虫特异诊断抗原或抗体的包被物与构成质控区5的含有质控物质的包被物之间的间距为3至8毫米，优选间距为5毫米。所说的显色剂为胶体金、罗丹明、酶、或染料等。所说的作为显色剂的酶是辣根过氧化物酶、或碱性磷酸酶等。所说的作为显色剂的染料是莲、或酸性黑RB等。所说的能结合被测样品中的日本血吸虫抗原或抗体并能与质控区的质控物质结合的桥联物质是在检测抗体的试纸中，桥联物质是SPA、或羊抗人IgG；在检测抗原的试纸中，桥联物质是日本血吸虫单抗——鼠IgG、或日本血吸虫多抗。所说的在检测抗原的试纸中所使用的桥联物质日本血吸虫多抗是日本血吸虫兔感染血清抗体或日本血吸虫兔免疫血清抗体。所说的构成质控区5的能与显色剂区3中的桥联物质结合的质控物质是在测抗原试纸中当使用的桥联物质为单抗时，质控物质为该单抗的同种动物的抗抗体，即抗鼠免疫球蛋白或抗鼠IgG；当使用的桥联物质为多抗时，质控物质为该多抗的同种动物的抗抗体；在测抗体的试纸中质控物质为人或其它动物的免疫球蛋白，或者为人或其它动物的IgG。当作为桥联物质的多抗为日本血吸虫多抗是日本血吸虫兔感染血清抗体或日本血吸虫兔免疫血清抗体，质控物质为抗兔免疫球蛋白或抗兔IgG。在测抗体的试纸中质控物质为人或其它动物的免疫球蛋白，或者为人或其它动物的IgG。本专利技术试纸的检测原理是日本血吸虫病快速诊断试纸的硝酸纤维薄膜(nitric acidfibre film。NC)的检测区预先包被有日本血吸虫特异诊断抗原或抗体。如将检测样品加入加样区时，由于NC的毛细管作用，被检测样品就会向上泳动。当被检测样品泳动至标记有胶体金(或酶、染料等其它着色剂)的葡萄球菌蛋白A(SPA)、羊抗人IgG、单抗或多抗显色区时，作为标记物的显色剂与待检测样品中相应抗体或抗原结合。结合物继续沿NC条向上泳动至检测区时，又与包被在此的相应抗原或抗体结合。检测抗原(双抗体夹心法)时，即形成胶体金(或其它着色剂)-抗体2-抗原-抗体1复合物；检测抗体，即形成抗原-抗体-抗抗体(或SPA)-胶体金(其它着色剂)复合物。此时，检测区即显示出肉眼可见(粉红色或其它颜色)。本专利技术日本血吸虫病快速诊断试纸对比试验(一)实验结果对325例病原学检查(毛蚴孵化)阳性血吸虫病(急感28例、慢血297例)、153例肺吸虫病、79例肝吸虫病、157例囊虫病、184例旋毛虫病、165例肝炎病人、481例肺结核病以及特检门诊非寄生虫病就诊者876例和518例正常人的血清进行反应，与目前常用的几种检测方法比较研究结果见表1-8。1.本专利技术试纸检测抗体的敏感性本专利技术试纸与其它几种常用血清学方法比较，在与297例慢性血吸虫病人和28例急感病人的血清进行反应时，阳性检出率为97.31-100％(慢血99.33％；急血100％)，除PVC(P＜0.01)以外，与其它(P＞0.05)均无显著性差异(祥见表1)；反应的时间在5分钟之内即可完成，其它几种免疫学方法均需30-90分钟才能完成(p＜0.01)，具有明显的优越性(见表1)。表1本专利技术试纸阳性检出率(％)方 法 检测慢血 检测急感抗体 抗原合计抗体抗原合计ELISASSj 74.90* 96.42*Np-30 96.30* 100*PVC61.61** 89.29*TJ95.96* 100*IHATJ-IHA96.52* 100*SJ-IHA 96.30* 100*JJ-IHA 97.98* 100*HJ-IHA 95.29* 100*Dot-ELISA 98.61* 100*COPT 76.66** 100*本专利技术试纸 97.3172.6599*33100100100* P＞0.05 ** P＜0.012.本专利技术试纸的特异性本专利技术试纸与其它几种寄生虫病的交叉反应率为0.62-4.89％。其中，肺吸虫病1.96％(3/153)肝吸虫1.33％(1/75)、囊虫病0.64％(1/157)、旋毛虫病4.89％(9/184)。与现有几种常见免疫学方法比较，显示具有明显的高特异性(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种日本血吸虫病快速诊断试纸，该试纸以塑料薄片条（１）为固相支架，其特征在于在该塑料薄片条（１）的一面设置有加样区（２）、显色剂区（３）、检测区（４）、质控区（５）和吸水区（６）五个部分，加样区（２）和吸水区（６）分别位于塑料薄片条（１）的两端，二者都由吸水纸构成，并以双面胶纸固定于塑料薄片条（１）上；显色剂区（３）紧邻加样区，由吸附有以显色剂标记的能结合被测样品中日本血吸虫抗原或抗体并能与质控区（５）的质控物质结合的桥联物质的玻璃纤维纸构成，该玻璃纤维纸以双面胶纸固定于塑料薄片条（１）上；检测区（４）和质控区（５）位于显色剂区（３）与吸水区（６）之间，其位置可以互换，检测区（４）由包被有日本血吸虫特异诊断抗原或抗体的硝酸纤维薄膜构成，质控区（５）由包被有能与显色剂区（３）中的桥联物质结合的质控物质的硝酸纤维薄膜构成，构成检测区（４）和质控区（５）的硝酸纤维薄膜为同一张硝酸纤维薄膜，该硝酸纤维薄膜以双面胶纸固定于塑料薄片条（１）上，构成检测区（４）的含有日本血吸虫特异诊断抗原或抗体的包被物与构成质控区（５）的含有质控物质的包被物之间的间距为３至８毫米。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姜昌富，石佑恩，甘燕，宁长修，魏兰，
申请(专利权)人：同济医科大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]