动脉粥样硬化和冠心病的诊断和治疗制造技术

本发明专利技术涉及人ＨＳＰ６０（热激蛋白６０）在人的治疗或诊断方法中的新用途，更特别地，本发明专利技术涉及诊断试验方法、诊断试剂的生产以及用于因动脉粥样硬化而患有血管疾病的患者的诊断试验试剂盒，这些患者倾向于热激蛋白诱导的补体激活，例如，患有心肌疾病如冠心病。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及人HSP60(热激蛋白60)在人的治疗或诊断方法中的用途，更特别地，本专利技术涉及诊断试验方法、诊断试剂的生产以及用于因动脉粥样硬化而患有血管疾病的患者的诊断试验试剂盒，这些患者倾向于热激蛋白诱导的补体激活，例如患有心肌疾病如冠心病。补体系统(见McAleer，M.A.和Sim，R.B.在补体的激活剂和抑制剂，Kluwer Academic Publishers，Dordrecht，R.B.Sim编，1993年，第1至15页；Reid，K.B.M.和Law，A.，1988年，补体，IRL出版社，牛津)涉及抵抗感染的宿主防御—在系统激活后，一个催化系列的反应和相互作用发生，导致激活细胞、组织或颗粒的靶向而破坏。由于该系统的破坏性质，如果不正确地被引发，它具有引起宿主系统严重损伤的潜在可能(Davis，A.E.，1988年，Ann.Rev.Immunol.，第6卷第595至628页；Frank，M.M.，1993年，在在健康和疾病中的补体，第二版，Whaley，K.等编，Kluwer Acdemic Publishers，Dordrecht，第229页)并且如果它的活性减小，那么它具有使宿主开放于感染性病原体的进攻的潜在可能。已经证明补体激活在冠心病和其它动脉粥样硬化的血管并发症的发展中具有重要作用(Prohaszka，Z.等，1999年9月，Int.Immunol，第11卷(9)，第1363-1370页；Torzewski等，1997年，动脉粥样硬化，第132卷第131页)，包括例如外周动脉粥样硬化和中风。最近的出版物，如Xu，Q.等(1993年，The Lancet，第341卷第255页)，Hoppichler，F.等(1996年，动脉粥样硬化，第126卷，第333页)，AT398495和Birnie，D.H.等(1998年，Eur.Heart J.，第19卷第387页)都已经涉及了冠心病和特异性地抗动脉粥样硬化中的分枝杆菌65Kda热激蛋白(HSP)的抗体之间的联系。热激蛋白(也被称为唇基(chaperons))，例如HSP60蛋白族，是高度保守的，且对抗它们的抗体被发现是高度交叉反应性的(Ellas，D.等，1990年，PANS USA，第87卷第1576页；Daniele，M.G.等，1992年，第5卷，第443页；de Graeff-Meeder，E.R.等，1994年，Pediatr.Res.，第152卷第3656页；Metzler，B.等，1997年，Atheroscler.Thromb.Vasc.Biol.，第17卷第536页；Latif，N.等，1997年，Transplant.Proc.，第29卷第1039页-1040页；Schett，G.等，1995年，J.Clin.Invest.，第96卷(6)第2569-2577页；Schett，G.等，1997年，Atherosclerosis，第128卷(1)第27-38页)。已发现这些对抗HSP的交叉反应性抗体和动脉粥样硬化有关，并且还发现补体激活和动脉粥样硬化有关，虽然这些关系的确切的本质还未得知，并且在动脉粥样硬化、补体激活和交叉反应性HSP抗体之间没有已知的因果关系。HSP的其它用途在例如WO 97/06821中有详细描述。来自病原体的保守的热激蛋白引发心脏病的普遍观点被例如Bachmaler，K.等，1999年，Science，第283卷第1335-1339页证实。本专利技术成功地确定了心肌疾病的原因(确切为地说与动脉粥样硬化相关的疾病如冠心病、心肌梗塞和中风的原因)，这种原因在已有技术中尚未提出。已经发现(见下面的“试验”)i) 人HSP60(hHSP60)和抗hHSP60抗体的免疫复合物的形成通过经典途径(CP)以剂量依赖性的方式引起补体系统的激活，但hHSP本身并不引起补体激活；以及ii) 引起补体激活的复合物中被抗hHSP抗体结合的hHSP表位对hHSP是单一的。在患者是否患有冠心病以及冠心病的严重程度和在患者血清中特异性地对抗hHSP的抗体水平(即不与其它HSP如分枝杆菌HSP65结合的抗体)之间存在强烈的正相关。因此这可以被用作确定来自相同倾向于热激蛋白诱导的补体激活的患者和样品的诊断试验的基础。因此，根据本专利技术的第一个方面，提供了在人体的治疗或诊断方法中使用的hHSP60或其免疫原性片段。自然地，可以使用重组hHSP，并且这样的重组分子可以具有小修饰，例如作为它们的氨基酸序列的改变的结果，或作为在表达系统中起作用(或不起作用)的翻译后修饰的结果。这样的分子可以具有至少50％，或60％、70％、80％、90％或95％的与hHSP60的同源性，其通过使用BLAST2程序(www.ncbi.nlm.nih.gov)所采用的算法测定。如上述讨论的，hHSP60和其它HSP60分子的同源性很高，因此为落在本专利技术的范围之内，修饰分子必须显示与hHSP60相同的功能性质，这些性质对于本专利技术是基本的，即它们必须显示hHSP特异性表位。例如，这可以通过进行hHSP60和修饰分子的对比试验来测定。取自具有倾向于能够和hHSP结合并产生补体激活的抗体的患者的样品用修饰hHSP60代替hHSP60应该同样能够获得相同的结果。这样的修饰分子在本文中被称为“基本组成hHSP60”，并且hHSP60的参比也是这种基本组成hHSP60分子的参比。补体系统不适当的激活可能导致很宽范围的疾病，包括动脉粥样硬化，特别是冠心病的发展或并发症。因此本专利技术可以用来诊断那些具有冠心病和其它动脉粥样硬化血管并发症倾向的患者。特别令人惊奇的是，试验(下面的)已表明产生高水平的补体激活抗人HSP60抗体的能力是在幼年时可诊断的遗传性状，它和成年后冠心病发病的高易感性(即趋势)有关。这意味着在本专利技术的试验中的高水平结果对那些在其它方面很健康的幼年患者患这种疾病的易感性是指示性的。本专利技术同时提供热激蛋白诱导的补体激活的趋势的诊断试验方法，其包括以下步骤i) 从患者取样品；ii) 将样品和hHSP60接触；iii)检测任何补体激活；以及iv) 将检测步骤(iii)的结果和热激蛋白诱导的补体激活的趋势相关。本专利技术同时提供热激蛋白诱导的补体激活的趋势的诊断试验方法，其包括以下步骤i) 从患者取样品；ii) 检测步骤(i)的样品中对hHSP60特异性的任何抗体；以及iii)将检测步骤(ii)的结果和热激蛋白诱导的补体激活的趋势相关。上述检测步骤(ii)可以包括以下步骤i) 将样品和HSP60蛋白质族的非hHSP60成员(例如HSP65)接触；ii) 将得自步骤(i)的样品和hHSP60接触；以及iii)检测所有的抗体-hHSP60结合反应。或者，检测步骤(ii)可以包括以下步骤i) 将样品和显示对hHSP60单一而不显示任何共享HSP60表位的抗原接触；以及ii) 检测任何抗体-抗原结合反应。抗体-hHSP60结合反应可以通过检测任何的补体激活而检测，特别是通过C4b(补体因子4b)的结合。诊断试验方法可以是人体的诊断方法。诊断试验如ELISA(酶连免疫吸附测定)和免疫层析试验如快速试验(Rapid-Test(EP291194))可以在本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于人体的治疗或诊断方法的ｈＨＳＰ６０或其免疫原性片段。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：马哈维尔辛格，佐尔坦普罗哈斯卡，捷尔吉富斯特，拉斯洛罗米奇，
申请(专利权)人：泽梅尔魏斯医科大学，马哈维尔辛格，
类型：发明
国别省市：HU[匈牙利]