一种新的多肽——人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人的血管内皮生长因子１６５受体（ＶＥＧＦ－１６５Ｒ）１０．６７，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如先天性心脑血管病、神经系统发育畸形等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人的血管内皮生长因子１６５受体（ＶＥＧＦ－１６５Ｒ）１０．６７的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。作为血管渗透性因子的血管内皮生长因子(VEGF)是有关血管形成和血管渗透性的主要的调节因子(reviewed in klagsbrun and Soker，1993)。VEGF的过量的表达在胚胎的形成和女性的生殖循环中同组织的血管形成相联系。如果一个VEGF基因的等位基因的目标中断，将导致削弱血管的形成，生长的延迟和死亡。各种肿瘤产生的高水平的VEGF表明它在肿瘤的血管形成中起着重要的作用。在VEGF家族中，我们发现了一个新的基因——VEGF-165。VEGF-165结合细胞表面的硫酸乙酰肝素，使它部分固定在细胞上。除此之外，它是一个潜在的内皮状细胞分裂素(EC)(Keyt et al.，1996)。VEGF的活性是有同EC相联系的高亲和力的酪氨酸激酶的受体调节的。我们发现了两个酪氨酸激酶的受体一个是frm-like酪氨酸激酶(Flt-1)，另一个是含有激酶插入区域的受体(KDR)。在EC中，KDR是VEGF信号的主要的传感器，它导致了靶细胞的化学向性，有丝分裂。肌动蛋白的识别和多态性。最近我们发现了一个新的VEGF受体。此受体不仅同EC相联系，而且同诸如乳腺癌，前列腺癌和黑素瘤细胞的表面相联系。因为它结合VEGF165，所以命名为VEGF-165R。实验表明，VEGF-165R同neuropilin-1——细胞表面的糖蛋白是一样的，它在神经系统的发育中同轴突引导是联系在一起的。人的neuropilin-1的cDNA序列有一个923个氨基酸的开放阅读框架，它含有两个代表信号肽的疏水区域和一个跨膜区域。它在成人的无神经元的组织中是广泛表达的，包括心脏，前列腺。实验表明，KDR和在同一基因中的neuropilin-1基因的共同表达，增强VEGF165结合KDR的能力，同时增强化学向性。在一些肿瘤来源的诸如乳腺癌和前列腺癌的细胞中，我们发现了Neuropilin-1的最高量的表达，但是没有发现KDR，Flt-1的表达，因此，Neuropilin-1是唯一同这些细胞相联系的VEGF受体。总之，VEGF-165R就是neuropilin-1，它是神经细胞表面蛋白，在胚胎发育中轴突的生长和引导中起着重要的作用(fujisawa et al.，1995)。它在同VEGF相联系的EC和肿瘤生物学中有新的作用。它与乳腺癌，前列腺癌等相关肿瘤疾病的生成有关。通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本专利技术的多肽的表达谱与人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67。由于如上所述人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中14-307位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1223位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人的血管内皮生长因子165受体(VEGF-165R)10.67表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人的血管内皮生长因子１６５受体（ＶＥＧＦ－１６５Ｒ）１０．６７，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]