一种新的多肽--人核转换蛋白41.69和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人核转换蛋白４１．６９，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如生殖系统疾病及胚胎发育紊乱性疾病本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人核转换蛋白４１．６９的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人核转换蛋白41.69，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。精子形成过程是一配子经过逐步地分化，最终形成成熟的精子细胞的过程。在哺乳动物中，精子形成的第一阶段即为精子细胞发育的开始，这一阶段与染色质结构的变化相关；第二阶段即通过染色质的融合及聚集形成完整的、转录失活的非核小体结构。这一融合过程包含两个蛋白的转变。第一个转换是由许多精子细胞特异蛋白介导的组氨酸变换及替代过程，而这些蛋白在第二个转换过程中被一个或两个脯氨酸所替代。这些精子细胞特异的蛋白在成熟精子形成的第二阶段起着重要的调节作用，这些蛋白的表达异常将导致个体无法形成正常的、成熟的精子，从而引发各种相关的生殖系统疾病。人们早已从大鼠及小鼠中克隆得到了TP1、TP2、TP3及TP4四个转换蛋白，其中对TP1及TP2的研究较为详细。随后人们又从人、牛中克隆得到了与鼠TP1蛋白相似的人及牛TP1蛋白。其中牛TP1蛋白含有一个半胱氨酸残基，而人TP1蛋白与鼠TP1相似，不含半胱氨酸残基。这些蛋白均在这些生物的精子形成过程中发挥重要的调节作用。核转换蛋白1是精子细胞特异蛋白中的一种，该转换蛋白由54个氨基酸残基组成，其序列在哺乳动物中是高度保守的。我们在第28-34个氨基酸位点找到了一7个氨基酸长的信号片段，这一片段的氨基酸序列如下S-K-R-K-Y-R-K。该序列片段含有一个酪氨酸残基及四个丝氨酸残基，这四个位点是蛋白磷酸化的作用位点，其中酪氨酸位点在蛋白与DNA相互作用过程中，对染色质的不稳定性是必需的；而丝氨酸位点的磷酸化对于蛋白与DNA的相互作用也是必需的，其可能调节着蛋白正确地结合到DNA的特定位点上。该结构域的表达异常将直接导致蛋白在精子形成过程中的功能异常，从而引发各种相关的生殖系统疾病。ATP或GTP结合基序是各种ATP/GTP结合蛋白中普遍存在的结构域，一些连接ATP或GTP的蛋白都或多或少含有这一保守的motif序列，该基序具有保守的特征性序列片段-X(4)-G-K-(其中X为任意氨基酸残基)。这些motif中最为保守的是glycine富集区域，这一区域在β线与α螺旋之间形成一个易弯曲的环。这一弯曲环通常与核苷酸上的某一磷酸基团反应，该motif序列通常被称为“A”共有序列或P环。该基序在生物体内通常负责与ATP、GTP结合，为蛋白发挥生物学功能提供所需的能量及稳定蛋白在生物体内的结构，协助蛋白完成其正常的生理学功能。其表达异常将直接导致一些蛋白的异常表达及功能异常，从而引发各相关组织的发育紊乱、肿瘤及癌症的发生。通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本专利技术的多肽的表达谱与人核转换蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人核转换蛋白41.69。由于如上所述人核转换蛋白41.69蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人核转换蛋白41.69蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人核转换蛋白41.69蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人核转换蛋白41.69以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人核转换蛋白41.69的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人核转换蛋白41.69的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人核转换蛋白41.69的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人核转换蛋白41.69的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人核转换蛋白41.69的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人核转换蛋白41.69异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中165-1304位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1969位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人核转换蛋白41.69蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人核转换蛋白41.69蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人核转换蛋白41.69表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人核转换蛋白４１．６９，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]