粘膜炎莫拉氏菌BASB111多肽和多核苷酸制造技术

本发明专利技术提供ＢＡＳＢ１１１多肽和编码ＢＡＳＢ１１１多肽的多核苷酸以及通过重组技术生产这种多肽的方法。本发明专利技术还提供诊断性、预防性和治疗性的应用。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及多核苷酸(本文中称“BASB111多核苷酸”)、它们编码的多肽(本文中称“BASB111”或“BASB111多肽”)、重组物质以及它们的制备方法。在另一个方面，本专利技术涉及使用这种多肽和多核苷酸包括抵抗细菌感染的疫苗的方法。再一方面，本专利技术涉及检测某些病原体感染的诊断试验。
技术介绍
粘膜炎莫拉氏菌(粘膜炎布兰汉氏球菌)是一种能经常从人的上呼吸道分离到的革兰氏阴性细菌。它导致几种疾病，主要是婴幼儿中耳炎和老年人肺炎。它也引起鼻窦炎和医院内感染，偶尔还会引起侵袭性疾病。中耳炎从病例数量和其后遗症来讲是重要的儿童疾病。在美国年发病350万例以上，据估计80％的儿童在3岁之前会罹患中耳炎至少一次(Klein，JO(1994)Clin.Inf.Dis.，19823)。如未得到治疗或转为慢性，会导致暂时(中耳积液时)或永久(听神经损害)的听力丧失。在婴儿中，这种听力丧失会导致说话延迟。从患有中耳炎的儿童中耳分离的菌株主要有三种肺炎链球菌、非典型性流感嗜血杆菌(NTHi)和粘膜炎莫拉氏菌。它们在60％到90％的病例中存在。近期研究表明，中耳炎病例中，肺炎链球菌和非典型性流感嗜血杆菌均占约30％，粘膜炎莫拉氏菌约占15％(Mruphy，TF(1996)Microbiol.Rev.60267)。从中耳中也可分离到其它细菌(B型流感嗜血杆菌、酿脓链球菌等)，但频度低得多(2％或更低)。流行病数据显示，中耳中发现的病原体引起中耳炎必需首先定居在上呼吸道；但是，发病还必需有其它因素(Dickinson，DP et al.(1988)J.Infect.Dis.，158205，Faden，HL et al.，(1991)Ann.Otorhinol.Laryngol.100612)。这对引起细菌经咽鼓管迁移到中耳然后开始炎症至关重要。这些因素迄今仍不清楚。据推测，诸如病毒感染后免疫系统暂时性异常可能引起不能控制呼吸道定居(Faden，HL et al(1994)J.Infect.Dis.1691312)。另一种解释是，暴露于环境因素之下使某些儿童中更为重要的定居得以发生，而这些儿童因为中耳中持续存在病原体而对中耳炎更为敏感(Murphy，TF(1996)Microbiol.Rev.60267)。对粘膜炎莫拉氏菌的免疫应答知之甚少。按时从0到2岁的幼儿鼻咽分离的菌株的分析表明，他们经常获得和清除新菌株。这表明在细菌定居的儿童中建立了针对该细菌的有效免疫应答(Faden，HL et al(1994)J.Infect.Dis.1691312)。在大部分测试的成人中鉴定到了杀菌抗体(Chapman，AJ et al.(1985)J.Infect.Dis.151878)。粘膜炎莫拉氏菌不同菌株抵抗血清杀菌活性的能力存在差异一般，从患病个体中分离的菌株较仅仅携带该细菌的个体分离的菌株的抗性更强(Hol，C et al(1993)Lancet3411281，Jordan，KL et al.(1990)Am.J.Med.88(suppl.5A)23S)。血清抗性因此可以被认为是细菌毒力因子。中耳炎病愈后的儿童血清中可以见到调理活性。除了OMP B1、UspA1和UspA2(Chen D.et al.(1999)，Infect.Immuno.671310)外，人体中这些不同的免疫应答针对的抗原尚未鉴定，OMP B1是一种84 kDa的蛋白，其表达受铁调控，可以被肺炎患者血清识别(Sethi，S，et al.(1995)Infect.Immuno.631516)。粘膜炎莫拉氏菌表面存在的一些其它膜蛋白已经使用生化方法鉴定，或者揭示了他们在诱导保护性免疫中的潜在意义(综述见Murphy，TF (1996)Microbiol.Rev.60267)。在小鼠肺炎模型中，针对其中的一些成员(UspA，copB)的抗体的存在有利于迅速清除肺炎感染。另一种多肽(OMP CD)在粘膜炎莫拉氏菌菌株中高度保守，与铜绿假单胞菌的孔蛋白具有同源性，而后者已被证实对动物模型中的该细菌有效。在过去几十年中，粘膜炎莫拉氏菌的发病率有了很大的提高。这已被归咎为多重抗生素抗性菌株的出现和具有较弱的免疫系统的人群体的增加。分离到对某些或所有标准抗生素具有抗性的菌株已不再鲜见。这种现象就使我们产生了针对这种微生物的新型抗微生物试剂、疫苗、药物筛选方法和诊断试验的永不满足的需求。专利技术简述本专利技术涉及BASB111特别是BASB111多肽和BASB111多核苷酸、重组物质以及它们的制备方法。在另一个方面，本专利技术涉及使用这种多肽和多核苷酸的方法，包括微生物疾病的预防与治疗及其他。在一个进一步的方面，本专利技术涉及检测与微生物感染有关的疾病及与这样的感染有关的症状的诊断试验，例如检测BASB111多核苷酸或多肽的表达或活性的试验。通过阅读下面的描述和本公开的其他部分，本领域的技术人员将很容易理解在本专利技术公开的精神和范围之内的各种改变和修饰。专利技术详述如下文的详细介绍，本专利技术涉及BASB111多肽和多核苷酸。具体地说，本专利技术涉及粘膜炎莫拉氏菌的BASB111的多肽和多核苷酸。本专利技术尤其涉及具有分别列于SEQ ID NO1和SEQ ID NO2的核苷酸和氨基酸序列的BASB111。应当理解，在后面的序列表中列举为“DNA”的序列代表本专利技术的一个实施方案的举例，因为普通的技术人员知道，这样的序列通常被用作多核苷酸，包括多核糖核苷酸。多肽在本专利技术的一个方面，提供了在这里被称为“BASB111”和“BASB111多肽”的粘膜炎莫拉氏菌的多肽，及其在生物学、诊断、预防、临床或治疗上有用的变体，以及含有它们的组合物。本专利技术进一步提供(a)含有这样一种氨基酸序列的分离多肽，该氨基酸序列与SEQ IDNO2的氨基酸序列至少有85％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，最优选至少97-99％的同一性或完全相同；(b)由含有如下一种多核苷酸序列的分离多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸序列分别与SEQ ID NO1的整个长度具有至少85％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，更优选至少97-99％的同一性或完全相同；或者(c)由含有如下一种多核苷酸序列的分离多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸序列编码这样一种多肽，这种多肽与SEQ ID NO2的氨基酸序列至少有85％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，最优选至少97-99％的同一性或完全相同；SEQ ID NO2中提供的BASB111多肽是来自粘膜炎莫拉氏菌菌株MC2931(ATCC 43617)的BASB111多肽。本专利技术还提供BASB111多肽的一种免疫原性片段，即BASB111多肽的一个连续的部分，它与含有SEQ ID NO2的氨基酸序列的多肽具有相同或基本上相同的免疫原性活性。也就是说，该片段(必要时可与一种载体偶联)能够产生能识别BASB111多肽的免疫应答。这种免疫原性片段可包括诸如缺少N-末端前导序列和/或跨膜区域和/或C-末端锚定区域的BASB111多肽。在一个优选的方面，根据本专利技术的BASB111的免疫原性片段包含基本上一种多肽的所有胞外结构域，其中该多肽与SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有如下氨基酸序列的分离多肽，该氨基酸序列与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２的氨基酸序列全长序列具有至少８５％的同一性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：J通纳德，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]