用基于MMP-9和β1整联蛋白的拮抗剂抑制血管发生的新方法和组合物技术

本发明专利技术描述了用于修饰涉及ＭＭＰ－９和／或β１整联蛋白的某些氨基酸序列的蛋白质－蛋白质之间相互作用的拮抗剂，这种拮抗剂抑制血管发生、肿瘤生长和疾病状态。举例的拮抗剂为多肽和非肽分子，包括新抗体ＭａｂＦＭ１５５和新合成肽ＦＲＩＰ－１。本发明专利技术还公开了通过施用这种拮抗剂抑制血管发生和疾病状态的方法。本发明专利技术也公开了修饰涉及ＭＭＰ－９和／或β１整联蛋白的某些氨基酸序列的蛋白质－蛋白质之间相互作用的拮抗剂的鉴别方法。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学领域，尤其涉及用具有在MMP-9和/或β1整联蛋白内发现的特异序列的拮抗剂抑制组织血管发生或检测血管发生的方法和组合物。
技术介绍
每年肿瘤生长和转移影响了众多人的健康。事实上，只在美国在未来的一年里估计有600000个以上的新癌症患者被诊断(Varner，J.A.，Brooks，P.C.，和Cheresh，D.A.(1995)Cell Adh.Commun3，367-374)。许多研究提示所有实体肿瘤的生长需要新血管形成以使肿瘤由最小持续扩张(Varner等，1995；血液，C.H.和Zetter，B.R.(1990)Biochim.Biophys.Acta.103289-118；Weidner，N等(1992)，J.Natl.Cancer Inst.841875-1887；Weidner，N.等(1991)，N.Engl.J.Med.3241-7；Brooks，P.C.等(1995)，J.Clin.Invest.961815-1822；Brooks，P.C.等(1994)，细胞791157-1164；Brooks，P.C.等(1996)，细胞85683-693；Brooks，P.C.等(1998)，细胞92391-400)。许多其它人体疾病也是特征在于不受调节的血管发生，包括眼部疾病如黄斑变性和糖尿病视网膜病变。另外，许多炎症疾病也与失控的新血管形成相关，如关节炎和银屑病(Varner等，1995)。从现有的血管中通过生理过程发生新血管已知称为血管发生(Varner等，1995；血液和Zetter 1990；Weidner等，1992)。此复杂过程要求各种分子的协作，包括生长因子，细胞粘着受体，基质降解酶和胞外基质成分(Varner等，1995；血液和Zetter 1990；Weidner等，1992)。因此，阻断血管发生的治疗方法可影响实体肿瘤的生长。事实上，已经提供了清晰的证据证明在各种动物模型中阻断肿瘤的新血管形成可抑制肿瘤生长，而且人体临床数据支持此论点(Varner，J.A.，Brooks，P.C.，和Cheresh，D.A.(1995) Cell Adh.Commun3，367-374)。也已经提出抑制血管发生可通过以下方式进行(1)抑制“血管发生分子”如βFGF(成纤维细胞生长因子)的释放，(2)中和血管发生分子，如通过使用抗βFGF抗体，和(3)抑制内皮细胞对血管发生刺激物的应答。后一方案已经引起注意，Folkman等，癌症生物学，389-96(1992)已经阐述了一些内皮细胞应答抑制剂，包括胶原酶抑制剂，基底膜周转抑制剂，抑制血管(angiostatic)的类固醇，真菌产生的血管发生抑制剂，血小板因子4，血小板反应蛋白，关节炎药物如D-青霉胺和硫代苹果酸金，维生素D3类似物，α—干扰素及可用于抑制血管发生的其它物质。另外提出的血管发生抑制剂见Blood和Zetter1990；Moses等(1990)科学2481408-1410；Ingber等(1988)Lab.Invest.，5944-51；和美国专利No5092885，5112946，5192744和5202352所述。为阻断血管发生，许多研究人员也着重于起动血管发生的生长因子和细胞因子(Vamer等，1995；Blood和Zetter1990；Weidner等，1992；Weidner等，1991；Brooks等，1995；Brooks等，1994；Brooks等，1997)。然而，有大量的独特的生长因子和细胞因子具有刺激血管发生的能力。因为此丰余所致，阻断单一细胞因子的治疗方面的益处是有限的。因此，需要抑制血管发生和蛋白酶解的其它抗血管发生的靶。专利技术概述侵袭细胞利用蛋白质一蛋白质之间的相互作用，包括酶和整联蛋白受体，以将蛋白酶解活性定位于细胞表面，并促进侵袭细胞行为。本专利技术提供了抑制血管发生和肿瘤生长的方法和组合物，使用靶向细胞粘着和胞外基质(ECM)的蛋白酶解的拮抗剂。特别地，基于发现侵袭细胞有助于将蛋白酶解活性定位于细胞表面这一独特机制，本专利技术提供了新的组合物和方法以抑制血管发生。本专利技术的一方面提供了抑制蛋白质—蛋白质之间相互作用的血管发生拮抗剂的组合物，包含细胞粘着和胞外基质(ECM)的蛋白酶解的拮抗剂。本专利技术的另一方面提供了抑制血管发生的组合物，包括修饰涉及在蛋白酶MMP-9和/或β1整联蛋白受体内发现的一些序列的蛋白质—蛋白质之间相互作用的拮抗剂。这种拮抗剂可包括但非限于与MMP-9和β1整联蛋白受体免疫反应的抗体或其功能片段，或特异于MMP-9和β1整联蛋白受体复合物的多肽或肽。本专利技术的再一方面包含抑制血管发生的方法，包括将组织与细胞粘着和胞外基质(ECM)的蛋白酶解的拮抗剂接触，所述拮抗剂包括但非限于与MMP-9和β1整联蛋白受体免疫反应的抗体或其功能片段，或特异于MMP-9和β1整联蛋白受体复合物的多肽或肽。本专利技术的另一方面还阐述了抑制组织中疾病状态或血管发生的方法。这些方法例如包括对该组织施用一种组合物，该组合物包含抑制血管发生量的蛋白酶MMP-9在细胞表面的定位的拮抗剂。本专利技术所应用的疾病状态可以是肿瘤生长或转移，黄斑变性，银屑病，组织再狭窄等。进行治疗的组织可以是任何需要抑制血管发生的组织，如发生新血管形成的病变组织。这些组织例如包括炎症组织，实体肿瘤，癌症转移，组织再狭窄等。本专利技术还提供了检测血管发生，肿瘤组织，转移，和肿瘤侵袭组织的方法，通过将本专利技术的拮抗剂与所述组织相接触而进行。本专利技术还提供了筛选本专利技术拮抗剂的方法。附图简述附图说明图1示出利用纤连蛋白的110kD细胞结合结构域，从胎盘裂解物中纯化β1整联蛋白α5β1的结果。图2示出当纯化的α5β1和ανβ3在与明胶共聚的10％SDS PAGE凝胶上分离时，β1整联蛋白α5β1的信号识别蛋白体的受体(zymographic)分析结果。图3当纯化的整联蛋白α5β1和ανβ3(1ug)被分离时，对β1整联蛋白α5β1的Western印迹分析的结果。图4重组的MMP-9与β1整联蛋白α5β1，或对照蛋白β酪蛋白的结合分析结果。图5用α5β1阳性和阴性细胞温育重组MMP-9的实验结果。图6确定MMP-9和β1整联蛋白α5β1在人体黑素瘤血管中的共定位的实验结果。图7鉴别结合MMP-9的合成肽的实验结果。FRIP-1是SEQ IDNO1，AAA是AAA肽，其是SEQ ID NO2。图8A/8B将FRIP-1肽注射入鸡胚中的实验结果，所用鸡胚中已经诱导血管发生。图9产生抗合成肽FRIP-1(SEQ ID NO1)的Mab的实验结果。图10在有或无Mab FM155或LM609的情况下，结合重组人MMP-9(2ug/ml)的实验结果。图11确定系统施用FM155对黑素瘤生长的作用。专利技术详述根据本专利技术，揭示了涉及蛋白酶MMP-9和/或β1整联蛋白受体内的一些序列的蛋白质—蛋白质之间相互作用通过将蛋白酶解活性定位于细胞表面而有助于血管发生和/或肿瘤生长。因此，修饰这种涉及在MMP-9和/或β1整联蛋白受体内发现的一些序列的蛋白质—蛋白质之间的相互作用，可抑制血管发生和/或肿瘤生长。MMP-9和β1整联蛋白之间的相互作用MMP-9本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过修饰蛋白质－蛋白质之间相互作用而抑制血管发生的拮抗剂，其中蛋白质－蛋白质之间的相互作用包括第一个蛋白质中的至少一个氨基酸序列与第二个蛋白质中的至少一个氨基酸序列之间的相互作用。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：彼得C布鲁克斯，卢布纳哈桑尼，多萝西罗德里格斯，
申请(专利权)人：南加利福尼亚大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]