一种多肽--网格蛋白轻链-9.02和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽－网格蛋白轻链－９．０２，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的网格蛋白轻链－９．０２的多核苷酸的用途。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——网格蛋白轻链-9.02，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。细胞摄取物质的内活动机制主要有两种吞噬作用(即“细胞吞食”)，通常消化较大颗粒(直径＞0.5.mu.m)，胞饮作用(“细胞饮用”)，小泡中摄入较小的颗粒(直径＜0.2.mu.m)。胞饮作用最常发生在细胞膜被称为网格蛋白-包被的凹洞的特定位点。网格蛋白因其具有三只脚的外形而被称为三脚蛋白复合体。网格蛋白包被的小泡介导自一个细胞膜到另一个细胞膜的受体选择性运输。它们有助于受体介导的内吞作用以及反-高尔基体网络中的分拣蛋白。在溶液中，网格蛋白三脚蛋白体自我装配形成被称为“笼形”的封闭式多面结构。在质膜中，网格蛋白的多面体装配形成因为吞入源自胞外环境物质而在弯曲部分增加的包被的凹洞。网格蛋白是一种主要的膜形成蛋白，它把类似包膜凹孔的泡囊裹住，并形成参与整合生物中膜交通的细胞表面碎片(Science 2421396-1402(1988))。网格蛋白的外膜(被称为三角蛋白复合体)由三条重链(180Kd)及三条轻链构成(23至27Kd)。网格蛋白的重链为网格提供结构框架，形成三支结构，而轻链跨越每一支的内部片段并能够与其他胞质蛋白相互作用。包被网格蛋白小泡的形成要求三脚蛋白复合体的聚合至位于细胞膜胞质一侧的多面体网络。网格蛋白的装配通过其与连接物分子作用选择性诱捕受体，最终在出芽的膜泡周围形成球状包被。再出芽之后，网格蛋白解装配，释放出小泡去与目标膜融合。在不同细胞内膜上调整网格蛋白的时间以及位点，从细胞内池中补充网格蛋白亚基以及控制网格蛋白解装配需要多分子信号。网格蛋白的轻链介导这些调控机制，它可能有助于正确定向装配及分解网格蛋白外膜，非共价结合于重链，它们还结合钙并与非包被的ATP酶hsc70相互作用。在较高等的真核生物中，两种基因编码不同但相关，同源度为60％的轻链LC(a)及LC(b)。这两种基因都能通过组织特异性可变剪接而产生两种不同的形式，两种形式因分别插入30或18个残基的序列而不同(Trends Biochem.Sci.16208-213(1991))。网格蛋白轻链自N端至C端线性排列6个功能域磷酸化定向序列；hsc70结合序列；EF-手形钙结合序列；7肽的重复序列，结构为卷曲螺旋型α螺旋；神经元特异插入序列；具可变半胱氨酸的C-端区域。在网格蛋白轻链的N-末端部分有一个在LC(a)及LC(b)完全保守的21个残基的区域，呈酸性。在酵母中有一条序列与较高等生物的轻链只是约略相关的单一轻链(基因为CLC1)。我们开发了网格蛋白轻链的两条特征序列膜板。第一条是来自真核生物轻链的保守N-末端区域中心的7个氨基酸肽段，所有较高等的真核生物的轻链中的保守序列F-L-A-Q-Q-E-S；第二条衍生自位于所有已知网格蛋白轻链C-末端的带正电区域，所有生物中的保守序列-D-x-S----x-(3)-x-L-K。本专利技术的网格蛋白轻链具有上述保守序列，并有相同功能，参与胞饮作用，有助于正确定向装配及分解网格蛋白外膜，因而被认为是一种网格蛋白。若其表达发生异常，会影响细胞胞饮作用的进行，破坏细胞的正常功能，引起一系列疾病的发生。由于如上所述网格蛋白轻链-9.02蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的网格蛋白轻链-9.02蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新网格蛋白轻链-9.02蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——网格蛋白轻链-9.02以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码网格蛋白轻链-9.02的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码网格蛋白轻链-9.02的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产网格蛋白轻链-9.02的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——网格蛋白轻链-9.02的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——网格蛋白轻链-9.02的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与网格蛋白轻链-9.02异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中1325-1573位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2515位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制网格蛋白轻链-9.02蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与网格蛋白轻链-9.02蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于网格蛋白轻链-9.02表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－网格蛋白轻链－９．０２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]