分离生物材料层的部分的方法技术

组织切片（１０）向下地把膜（１４）放置到显微镜载玻片（１８）上。然后将显微镜载玻片（１８）安放在倒置显微镜的物镜平面上。将带有粘合剂（２２）的胶带（２０）安置在膜（１４）的上方，并因此在组织切片（１０）的上方。下一步，将待分离组织（３６）用聚焦激光光束切割。这也将膜（１４）分割开。然后将胶带（２０）从显微镜中移开。此时被切割的组织片（３６）附着到胶带（２０）上。膜（１４）和组织切片（１０）的剩余部分仍然附着在显微镜载玻片（１８）上。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。为了揭示疾病的分子机理，进行了所谓的基因表达研究。由于相关蛋白造成细胞的病理发展，这些研究试图测定在细胞中实际表达的基因。因为蛋白形成来自mRNA，所以测定存在什么样的蛋白实际的一个途径是测定在细胞中合成的mRNA。然而，mRNA是细胞中寿命很短的产物，因此细胞内mRNA浓度很低。如果要求测定例如肿瘤细胞的mRNA，则必须尽可能地收集大量的肿瘤细胞。为此，需要从患病组织中分离出肿瘤细胞。例如可将肿瘤细胞从组织切片上切割下来并分离收集。随后将分离的肿瘤细胞破碎。通过适当的纯化步骤，从细胞中分离出mRNA。然后采用反转录酶转录成cDNA。这通常使用线性PCR进行。此途径所获得的cDNA在合适的DNA芯片帮助下进行定性或定量分析。就此而论，本专利技术涉及被研究细胞的分离或抽提。本专利技术的一个重要方面是要求在操作时须极其清洁，也就是说尤其不能存在核糖核酸酶，因为它们可降解mRNA。甚至一定要避免裸手接触。在已知用于切割组织的方法中(例如，the American Journal ofPathology，15163-67(1997))，组织切片的制备在载玻片上进行。用激光围绕患病组织划封闭弧线。将组织沿弧线切割开，以便将待分离的患病组织从余下的组织中分离出来。例如用移液管将切割的组织碎片取出。已知方法的不足之处在于很耗时。为了收集一次分析所需量的mRNA，组织切割要占用一个人数天的时间。改进方法如DE 196 16 216 A1中所描述(也可参见Cell.Mol.Bio.，44735-746(1998))。将载玻片上制备的组织切片放置在倒置显微镜或直立显微镜上。将可密封管的密封元件安置在载玻片上的组织切片上方。密封元件的底面或内侧被油包被。采用UV激光切除法切割载玻片上组织的部分。组织的被切除部分用UV光脉冲从载玻片上分离。与此同时，被切开部分击打油—包被的密封元件并附着在油上。该方法省略了耗时的用移液管取出的步骤。但是不足之处在于被分开的组织碎片的移动可控性差。组织片不是总能到达密封元件。另外，UV光脉冲也使需要被研究的组织受到伤害。本专利技术目的是提供一种方法，以及相关的滞留部分，在该滞留部分的帮助下，大量组织以尽可能无菌的方式快速地收集。根据本专利技术，采用具有权利要求1特征的方法实现该目的。根据本专利技术，在用于中，首先将生物材料层施加到稳定层的一个面上。构成在载体的至少一个面上带有粘结层的载体。在这种情况下，以能促进稳定层和载体间的粘合这种方式选择粘结层的材料。随后将带有粘结层的载体与带有生物材料层的稳定层的另一面接触。然后用激光束的焦点在待分离的生物材料层的部分周围划封闭弧线，并沿弧线烧蚀生物材料以及稳定层。采用该手段，待分离部分从生物材料层的剩余部分分离出来。随后将载体和不与待分离的生物材料层的部分接触的稳定层的那些部分分开。被分离生物材料层的部分粘合在载体上。或者，待分离部分可首先从生物材料层的剩余部分分离开。只有此时带有粘结层的载体才与带有生物材料层的稳定层的另一面接触。随后再将载体和不与待分离的生物层的部分接触的稳定层部分分开，而分离的生物材料层的部分同样粘着在载体上。进一步，激光束的焦点不需要围绕待分离的生物材料层的部分划完全封闭弧线。近似封闭弧线就足够了。待分离生物材料层的部分和剩余部分之间可有一个或多个连接桥，待分离部分仍保留在所述连接桥上。当将载体和不必分离部分分开时，连接桥将被切断，待分离部分将被断开。然后按所需被分离的部分再次粘合到载体。生物材料层可以是例如组织切片、细胞涂层或精细胞。膜例如可用作稳定层。在已经实施本专利技术的方法后，待分离的切片部分例如肿瘤细胞粘着到载体上，而剩余切片例如正常组织继续粘着在剩余的稳定层上。如此分离待分离的切片部分。通过具有权利要求2的特征的方法来进一步实现本专利技术目的。根据本专利技术用于，首先将生物层施加到稳定层的一个面上。将带有生物层的稳定层安置在捕获装置的上方，并在稳定层和捕获装置之间留有缝隙。随后激光束的焦点围绕待分离的生物材料层的部分划封闭弧线，并且沿弧线烧蚀生物材料层以及稳定层。通过该手段，将待分离部分从剩余生物材料层中分离出来。待分离的生物材料的部分例如肿瘤细胞直接落到捕获装置上，因此被方便地分离以及例如进一步被传送。稳定层和捕获装置间的缝隙可为例如空气缝隙，尽管可用适当气体填充或对之施以减压。通过使用带缺口的载玻片作为捕获装置并且将待分离部分安置在载玻片的缺口上方，可以以直接方式产生稳定层和捕获装置之间的缝隙。或者，稳定层和捕获装置之间的缝隙可通过在稳定层和捕获装置之间安置垫片来产生。通常，组织样品首先切成薄片，然后施加到载玻片上并可任选地染色，接着加上透明的固定剂(醇、二甲苯)，最终用盖玻片覆盖。用该方式制备的组织切片在显微镜下观察成像质量良好。如果希望从组织中切割单个切片或细胞(微切片)并且以某种其他方式进一步处理，就不必要使用固定剂和盖玻片。由于样品、空气和光学系统间的折射率差异较大并且由于样品表面粗糙，导致光线强烈折射并散射，因此这样做的结果显著降低了显微镜内的成像质量。可在照明仪器和样品之间安置光漫散体例如散射屏、无光泽屏或毛玻璃。已有迹象表明这可导致成像质量的实质性改进，从而当使用光漫散体时成像质量仍然接近使用固定剂和盖玻片时的成像质量。为此目的，可以设具有平坦的底部的滞留部分，它起光漫散体的作用。在底部上方隆起一个边缘。在所述边缘背离该底部的一侧连接一个从该底部向外指向的手柄装置。上述滞留装置可以例如是简单的把手或与可密封管连接的部件。因此滞留部分既可收集分离组织部分又能充当光漫散体，并且通过把手装置能方便地进行操作。有利地，将光漫散体安置在距生物材料层最多2mm远处。因此密封元件的底部在靠近光漫散体处厚度最多2mm。如果滞留部分从底部向上接近于生物材料层，那么在把手装置的另一侧的边缘应突出底部0.1-2mm。以该方式，所需缝隙可自动设定。然而，如果要求底部与生物层或稳定层直接接触，就不能采用滞留部分底部的这种设计。为了捕获或收集生物材料层的部分，滞留部分的底部在背离把手装置的一面上设有粘结层。作为本专利技术的扩展，将滞留部分通过挠性的连接带整体连接到可密封的管上，为此目的，该滞留部分充当密封元件。通过用柔软的连接带进行倾斜，可以把所述的管密封。在捕获或收集组织后，能够简单地折叠闭合该密封元件。被分离的组织切片封闭在无菌管中。这种管在样品下能直接翘起或从光线和/或操作途径中翘起。以这种方式，可以把组织切片进一步进行其它操作，例如机械地取出样品。所述滞留部分既可以用作捕获部分，也可以用作收集和分离组织部分的载体。采用本专利技术方法，用常规的操作步骤在组织切片中甚至可分离很小、有时是单个的肿瘤细胞，并用普通捕获装置收集它们。进一步，本专利技术有益的改进在从属权利要求中说明的特性。下面借助于实施例更详细地说明本专利技术，这些实施方案示意性地在附图中表示(这些附图与真实比例不符)。其中各个附图中相同的标号表示等同的元件。具体如下附附图说明图1表示示意图；附图2表示另一示意图；附图3表示又一个示意图；以及附图4进一步表示另一示意图。以下将参照附图1A。将冷冻或包埋在石蜡中的组织用切片切成薄的组织切片10。通常这些组织切片卷起来。用乙醇喷本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离生物材料层（１０）的部分（３６）的方法， ａ）将生物材料层（１０）施加到稳定层（１４）的一面； ｂ）在载体的至少一面上形成带有粘结层（２２）的载体（２０），并且以能促进稳定层（１４）和载体（２０）之间粘合的方式选择粘结层材料； ｃ）将带有粘结层（２２）的载体（２０）与稳定层（１４）的背离生物材料层（１０）一面接触； ｄ）激光光束的焦点围绕待分离的生物材料层（１０）的部分（３６）划封闭和近似封闭的弧线，并且其沿弧线烧蚀生物材料以及稳定层（１４）；以及 ｅ）然后将载体（２０）和那些不与待分离的生物材料层（１０）的部分（３６）接触的稳定层（１４）部分分开。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：诺贝特勒克莱尔，
申请(专利权)人：分子机械和工业有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]