一种人转录因子、其编码序列、制法及用途制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，具体地说，本发明专利技术提供了人转录因子（ｈｕｍａｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ，ｈＴＦ），其编码序列、制法及用途。本发明专利技术的ｈＴＦ可形成锌指结构，具有ＤＮＡ结合区特征，可作为一种转录因子与核酸结合并相互作用以调控基因表达，从而对细胞乃至生物体的生理活动起到调控作用。将本发明专利技术的ｈＴＦ核酸、其反义链及片段制成探针，可检测ｈＴＦ基因异常；将ｈＴＦ蛋白序列制成试剂盒或药物，可起到调节细胞生长增殖分化，促进烫伤烧伤、组织切除和器官摘除后的伤口愈合，防止伤口感染以及辅助临床上肿瘤和癌症的诊断、预防和治疗等作用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本专利技术涉及一种人转录因子(hTF)的cDNA序列，本专利技术还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。转录因子根据其效果可分为正性转录因子和负性转录因子正性转录因子促进基因的转录；负性转录因子则抑制基因的转录。转录因子根据其作用及分布特点可分为非特异性及特异性转录因子两种。非特异性转录因子存在于多种细胞中，可作用于多种不同的启动子和增强子，可被各种因素所诱导，通过对蛋白质的共价修饰或变构调节而被激活。特异性转录因子只存在于某种特定的细胞中，仅与启动子和增强子的某种特异性DNA区域结合，决定基因转录的组织特异性及发育阶段性。关于转录因子与DNA结合的特征，人们发现，转录因子形成空间结构时，与DNA结合的部位出现亮氨酸的周期性重复。Landschulz提出一种“亮氨酸拉链”模型，即一个分子的亮氨酸侧链与另一分子的对应部位相互交错，形成一种拉链结构，这样就使两个分子连接起来(Science 1989 Mar 31；243(4899)1681-8)。而更普遍的学说是“Zn指模型”(Nucleic Acids Res 1989 Nov 25；17(22)9185-92)。锌指是在Xenopus转录因子TFIIIA中首次发现的能与核酸结合的蛋白结构域，至今，该结构域已在各种核酸结合蛋白中发现。一个锌指结构域由23-30个氨基酸残基组成，可用由两个保守的半胱氨酸和两个保守的组氨酸组成的C-2-C-12-H-3-H结构简单表示。其中，C-2-C表示相邻的两个半胱氨酸之间间隔两个氨基酸残基。第二个半胱氨酸和第一个组氨酸之间的12个氨基酸主要是极性和碱性的，这表明该结构域显然与核酸结合的。锌指结构域通常是小型自身折叠型功能域，而这其中锌原子对其三级结构起到了关键性的作用。一个锌原子与半胱氨酸和组氨酸相连组成一个类似锌指状的三维结构(如下式所示)，并与核酸的大沟相互作用。 研究发现，锌指结构与包含有鸟嘌呤的五对碱基对结合。他们既可以与RNA也可以与DNA结合。有研究表明，锌原子为中心的结构还可在蛋白的相互作用中起作用。锌指结构异常将会导致许多细胞分化与胚胎发育相关的疾病，如神经病，多指趾畸型及韦尔姆斯氏瘤等。由叉形头蛋白异常引起的疾病有角虹膜发育异常，里格氏发育异常，青光眼和虹膜发育不全，Bamforth-Lazarus综合征，T细胞免疫缺陷，先天性脱发及指甲发育不良等。本专利技术的另一个目的是提供一种蛋白，该蛋白被命名为人转录因子(hTF)。本专利技术的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的hTF蛋白的方法。本专利技术还提供了这种hTF核酸序列和蛋白的应用。在本专利技术的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括编码具有人hTF蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸370-2592位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ IDNO.1中从核苷酸370-2592位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.2所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.1中从核苷酸370-2592位的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种分离的hTF蛋白多肽，它包括具有SEQ ID NO.2氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.2序列的多肽。在本专利技术的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。在本专利技术的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。在本专利技术的另一方面，提供了一种产生具有hTF蛋白活性的多肽的方法，该方法包括(a)将编码具有hTF蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成hTF蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸370-2592位的核苷酸序列有至少70％的同源性；(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成hTF蛋白的重组细胞；(c)在适合表达hTF蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；(d)分离出具有hTF蛋白活性的多肽。在本专利技术的一个具体实施方案中，本专利技术的分离的多核苷酸全长为2594个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.1，其中开放读框位于370-2592位核苷酸。在本专利技术中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。在本专利技术中，术语“hTF蛋白(或多肽)编码序列”指编码具有HTF蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1中370-2592位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO.1序列的编码框370-2592位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO.1中370-2592位核苷酸序列同源性低至约70％的简并序列也能编码出SEQ ID NO.2所述的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳地在高度严紧条件下与SEQ ID NO.1中从核苷酸370-2592位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。此外，该术语还包括与SEQ ID NO.1中从核苷酸370-2592位的核苷酸序列的同源性至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列。该术语还包括能编码具有与人HTF相同功能的蛋白的、SEQ ID NO.1序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-90个，较佳地1-60个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。在本专利技术中，“基本纯的”蛋白质或多肽是指其至少占样品总物质的至少20％，较佳地至少50％，更佳地至少80％，最佳地至少90％(按干重或湿重计)。纯度可以用任何合适的方法进行测量，如用柱层析、PAGE或HPLC法测量多肽的纯度。基本纯的多肽基本上不含天然状态下的伴随其的组分。在本专利技术中，术语“hTF蛋白多肽”指具有hTF蛋白活性的SEQ ID NO.2序列的多肽。该术语还包括具有与人hTF相同功能的、SEQ ID NO.2序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括hTF蛋白的活性片段和活性衍生物。该多肽的变异形式包括同源序列、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨度条件下能与hTF DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离出的ＤＮＡ分子，其特征在于，它包括：编码具有人ｈＴＦ蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１中从核苷酸３７０－２５９２位的核苷酸序列有至少７０％的同源性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，唐丽莎，郭金虎，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]