氨基酸的分析方法技术

一种氨基酸的分析方法，工艺步骤依次包括：１、将洗脱液用低压泵输入色谱分离柱，从色谱分离柱输出的洗脱液流过电导流通池时由电导检测器转化为电信号，从而形成基线被测绘；２、含有氨基酸的被测试样在洗脱液的推动下进入色谱分离柱产生离子交换，氨基酸生成阳离子置换下色谱分离柱上的氢离子并保留在色谱分离柱上；３、将洗脱液连续输入色谱分离柱洗脱氨基酸离子，从色谱分离柱输出的含氨基酸离子的溶液流过电导流通池时由电导检测器转化为电信号，从而形成谱图被测绘。此种方法不仅对氨基酸能进行良好的分析，而且工艺简单、分析成本低。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于，特别涉及一种在低压状态下采用电导检测器进行检测的氨基酸分析方法。
技术介绍
有关氨基酸的分析始于二十世纪三、四十年代。四十年代后期，Moore和Stein将离子交换树脂用于氨基酸分析中，并于1958年研制出了世界上第一台采用离子交换色谱法和柱后茚三酮衍生检测法的自动专用氨基酸分析仪，自此，上述方法与配套仪器一直在氨基酸分析中占主导地位；七十年代以来，高效液相色谱特别是键合反相色谱及柱前衍生技术的发展，为氨基酸分析提供了新的方法，并开发了除茚三酮外的一系列衍生剂。以上方法虽然解决了氨基酸的定量分析，但都需要利用衍生反应才能进行检测，而且其工艺步骤中包括梯度洗脱，操作十分烦琐；此外，都需在2000～4000Psi高压下操作完成检测。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的不足，提供一种氨基酸分析的新方法，此种方法既能保证分析效果，又能简化工艺流程和降低分析成本。本专利技术的技术方案是根据氨基酸分子中既有氨基又有羧基的两性电离特征、分子侧链基团的性质和等电点的pH范围，采用阳离子交换色谱法设计工艺步骤，工艺步骤依次包括基线测绘、进样和离子交换、洗脱分析。1、基线测绘将洗脱液用低压泵输送入色谱分离柱使其达到平衡，从色谱分离柱输出的洗脱液流过电导流通池时由电导检测器转化为电信号，从而形成基线被测绘。2、进样和离子交换含有氨基酸的被测试样在洗脱液的推动下进入色谱分离柱产生离子交换，带正电荷的氨基酸置换下色谱分离柱上的氢离子并保留在色谱分离柱上。3、洗脱分析将洗脱液连续输送入色谱分离柱不断将各种氨基酸在色谱分离柱上展开，各种氨基酸离子产生差速迁移而相互分离，在不同的保留时间被洗脱，从色谱分离柱输出的含氨基酸离子的溶液流过电导流通池时由电导检测器转化为电信号，从而形成谱图被测绘。洗脱液按照氨基酸的酸碱性选择，分析酸性和中性氨基酸时，洗脱液采用浓度为0.5～2.0×10-3mol/L的HNO3溶液，分析碱性氨基酸时，洗脱液采用浓度为6～10×10-3mol/L的柠檬酸钾溶液，以便使被测氨基酸均带正电荷，以阳离子形式存在。色谱分离柱的填料为低交换容量的表面离子交换树脂，最好选用苯乙烯-二乙烯基苯高分子聚合物并将交换容量控制在0.01～0.04mmol/g。色谱分离柱的填料粒度一般为10～30μm，色谱分离柱的尺寸一般为φ3～φ6×40～200mm。本专利技术具有以下有益效果1、对多种常见氨基酸能进行良好的分离，变异系数为1～5％，检测限可达10-6g/ml，在10-3～10-5mol/L的浓度范围内，峰高对浓度呈良好的线性关系。2、由于采用电导检测器进行检测，不需要对被测试样进行梯度洗脱，因而简化了工艺流程。3、分析时，将试样直接注入色谱分离柱并经电导检测器检测就能获得谱图，去除了现有分析方法中的柱前或柱后衍生步骤，使工艺流程大为简化。采用低压泵输送，所需配套分析仪器的成本大为降低，工艺的简化，既节约了试剂又可缩短分析时间，因而分析成本低，便于普及推广。四附图说明图1是根据本专利技术提供的方法获得的常见酸性、中性氨基酸色谱图；图2是根据本专利技术提供的方法获得的常见碱性氨基酸色谱图；图3是根据本专利技术提供的方法获得的所测氨基酸His、Ala、Phe、Pro在10-3～10-4mol/L的浓度范围内浓度与峰高的关系图；图4是根据本专利技术提供的方法获得的所测氨基酸Met、Pro、Glu在10-4～10-5mol/L的浓度范围内浓度与峰高的关系图。五具体实施例方式实施例1本实施例是对常见酸性、中性、碱性氨基酸进行分析，所用试样为已知浓度的氨基酸标样。1)酸性、中性氨基酸的分析使用的仪器按本专利技术提供的方法设计的氨基酸分析仪，其工作压力为30～40Psi洗脱液1.0×10-3mol/L硝酸溶液，流速1.2ml/min色谱分离柱填料为苯乙烯-二乙烯基苯高分子聚合物，交换容量0.02mmol/g，填料粒度25～30μm，尺寸为φ5×200mm分析步骤A、基线测绘操作氨基酸分析仪，将洗脱液输送入色谱分离柱使其达到平衡，从已知浓度的氨基酸标样。色谱分离柱输出的洗脱液流过电导流通池时由电导检测器转化为电信号，从而形成基线被测绘。B、谱图测绘将含有氨基酸的被测试样注入氨基酸分析仪的液体流路中，操作氨基酸分析仪，使洗脱液推动被测试样进入色谱分离柱产生离子交换，带正电荷的氨基酸置换下色谱分离柱上的氢离子并保留在色谱分离柱上；将洗脱液连续输送入色谱分离柱不断将各种氨基酸在色谱分离柱上展开，各种氨基酸离子产生差速迁移而相互分离，在不同的保留时间被洗脱，从色谱分离柱输出的含氨基酸离子的溶液流过电导流通池时由电导检测器转化为电信号，从而形成谱图被测绘。所测绘的谱图见图1。2)碱性氨基酸的分析使用的仪器按本专利技术提供的方法设计的氨基酸分析仪，其工作压力为30～40Psi洗脱液9.0×10-3mol/L柠檬酸钾溶液，流速1.3ml/min色谱分离柱填料为苯乙烯-二乙烯基苯高分子聚合物，交换容量0.02mmol/g，填料粒度20～25μm，尺寸为φ5×40mm分析步骤与酸性、中性氨基酸的分析步骤相同。所测绘的谱图见图2。实施例2本实施例是对蛋白质水解注射液中的酸性、中性、碱性氨基酸进行分析。1)酸性、中性氨基酸的分析使用的仪器按本专利技术提供的方法设计的氨基酸分析仪，其工作压力为30～40Psi洗脱液1.5×10-3mol/L硝酸溶液，流速1.2ml/min色谱分离柱填料为苯乙烯-二乙烯基苯高分子聚合物，交换容量0.015mmol/g，填料粒度25～30μm，尺寸为φ6×150mm分析步骤与实施例1相同。2)碱性氨基酸的分析使用的仪器按本专利技术提供的方法设计的氨基酸分析仪，其工作压力为30～40Psi洗脱液8.0×10-3mol/L柠檬酸钾溶液，流速1.3ml/min色谱分离柱填料为苯乙烯-二乙烯基苯高分子聚合物，交换容量0.015mmol/g，填料粒度20～25μm，尺寸为φ6×50mm分析步骤与酸性、中性氨基酸的分析步骤相同。分析结果如下(mol/L)Asp 7.29×10-4Pro 1.16×10-3Val 9.75×10-4Phe 3.12×10-3His 2.20×10-3Lvs 1.88×10-4Arg 8.06×10-4实施例3本实施例是对氨基酸口服液中的酸性、中性、碱性氨基酸进行分析。1)酸性、中性氨基酸的分析使用的仪器按本专利技术提供的方法设计的氨基酸分析仪，其工作压力为30～40Psi洗脱液0.8×10-3mol/L硝酸溶液，流速1.2ml/min色谱分离柱填料为苯乙烯-二乙烯基苯高分子聚合物，交换容量0.03mmol/g，填料粒度25～30μm，尺寸为φ5×180mm分析步骤与实施例1相同。2)碱性氨基酸的分析使用的仪器按本专利技术提供的方法设计的氨基酸分析仪，其工作压力为30～40Psi洗脱液8.5×10-3mol/L柠檬酸钾溶液，流速1.3ml/min色谱分离柱填料为苯乙烯-二乙烯基苯高分子聚合物，交换容量0.03mmol/g，填料粒度20～25μm，尺寸为φ5×45mm分析步骤与酸性、中性氨基酸的分析步骤相同。分析结果如下(mol/L)Asp 8.33×10-4Glu 5.48×10-4Val 5.00×10-4Met 3.50×10-4Ph本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氨基酸的分析方法，其特征在于工艺步骤依次包括：１）基线测绘将洗脱液用低压泵输送入色谱分离柱使其达到平衡，从色谱分离柱输出的洗脱液流过电导流通池时由电导检测器转化为电信号，从而形成基线被测绘，２）进样和离子交换含有氨基酸的 被测试样在洗脱液的推动下进入色谱分离柱产生离子交换，带正电荷的氨基酸置换下色谱分离柱上的氢离子并保留在色谱分离柱上，３）洗脱分析将洗脱液连续输送入色谱分离柱不断将各种氨基酸在色谱分离柱上展开，各种氨基酸离子产生差速迁移而相互分离，在 不同的保留时间被洗脱，从色谱分离柱输出的含氨基酸离子的溶液流过电导流通池时由电导检测器转化为电信号，从而形成谱图被测绘。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张新申，戴红，蒋小萍，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]