ERα基因中与中国女性髋部骨密度连锁的PvuⅡ及XbaⅠ分子标记制造技术

本发明专利技术公开了ＥＲα基因中与中国人群女性髋部骨密度连锁的ＰｖｕＩＩ及ＸｂａＩ分子标记，对于在中国人群中早期诊断、治疗、预防骨质疏松症有重要意义。它们是通过选取４００个以上中国人群核心家庭、１２００个以上男、女个体人实例，运用传递不平衡检测法从骨密度候选基因ＥＲα中锁定得到的。本发明专利技术的意义在于本研究的成果可应用分子标记从人的早年时期来诊断哪些人可能患有骨质疏松症以便对其采取早期预防及治疗；本发现有助于更深一步了解骨质疏松症的发病机制，对治疗和预防骨质疏松症，降低由骨质疏松引起的骨折风险，提高中国女性健康和身体素质具有重要的实际意义。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术公开了与中国女性髋部密度相连锁的2个分子标记，对于中国人群骨质疏松症的早期诊断、治疗、预防具有重要意义。
技术介绍
骨质疏松症表现为骨质流失，骨组织破坏，从而导致骨质强度降低，骨折的危险性增加。绝经后的妇女有50％的可能性因为骨质疏松而骨折。在50岁以上的女性中，70％的女性会出现严重的或中等程度的骨质疏松。妇女绝经后，体内雌激素水平下降，骨代谢发生明显变化，骨转化增加，骨吸收大于骨生成，导致骨代谢的负平衡，进而造成骨丢失。半个世纪前就已经提出雌激素可治疗骨质疏松，近10多年的大量研究与观察，更进一步证实了雌激素可抑制破骨细胞的骨吸收进而能抑制绝经后骨的快速丢失。雌激素作用的发挥需通过特异的雌激素受体，现在已知的受体有两种雌激素受体α和β(即ERα和ERβ)。ERα基因位于6q25.1，由140kb碱基对组成，有8个外显子，编码含有596个氨基酸的蛋白质，目前发现该基因具有3个限制性片段长度多态性位点(RFLPs)(BstUI、PvuII和XbaI)，PvuII和XbaI分子标记第一内含子中。它们与骨密度的关联和连锁检测在不同的人群中广泛开展。检测的方法主要有关联分析、连锁分析和传递不平衡检测(TDT)。关联分析易产生假阳性结果；连锁分析不能进行精确定位；传递不平衡检测是近来发展的一种统计力较强的定位方法，且不易受群体分层和混杂的影响，特别适合检测候选基因。
技术实现思路
本专利技术的目的是运用传递不平衡检测法锁定与中国女性骨密度连锁的ERα基因分子标记。本专利技术的技术解决方案是在中国人群核心家系中运用传递不平衡检测法，锁定ERα基因中与中国女性髋部骨密度连锁的PvuII及XbaI分子标记。(1)征集中国人群400个以上核心家庭，1200个以上个体人作为采样样本，核心家庭由父母双亲和至少一个年龄在20-45岁的健康女儿组成(2)应用QDR2000+双能X射线骨密度仪测量了L1-4腰椎、股骨颈、大转子、转子间、ward三角区、整个髋骨6个部位的骨密度、骨矿含量和骨大小值(3)通过问卷调查法获得采样对象的年龄、身高、体重、性别、家庭史、服药史、女性月经史、吸烟史、饮酒史、饮食及生活习惯等信息(4)应用聚合酶链式反应——限制性片段长度多态性方法对采样样本进行ER基因PvuII和XbaI分子标记基因分型(5)应用QTDT程序进行关联和连锁检测，获得ER基因中与股骨颈、骨转子、股骨转子间及整个髋骨相连锁的PvuII及XbaI分子标记。具体实施例方式样本征集征集了来自上海的401个核心家庭的1260个个体，核心家庭由父母和至少一个年龄在20-45岁的健康女儿组成。应用QDR2000+双能X射线骨密度仪(HologicCorportion，Waltham MA)测量了包括L1-4腰椎、股骨颈、大转子、转子间、ward三角区及整个髋骨等6个部位的骨密度(g/cm2)、骨矿含量(g)和骨大小(cm2)值。同时通过问卷调查法获得他们的年龄、身高、体重、性别、家庭史、服药史、女性月经史、吸烟史、饮酒史、锻炼及饮食等生活习惯等信息。基因分型应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对所有个体进行基因分型。引物(5’-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCACC-3’)和-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3’)。PCR扩增循环；94℃，5min；94℃，1min，60℃，1min，72℃，1min 30循环；72℃，7min。PvuII和XbaI为所使用的限制性内切酶。分析结果应用QTDT程序进行关联和连锁检测。发现ER基因内的Pvu11和XbaI标记与股骨颈、骨转子、股骨转子间以及整个髋部的BMD相连锁(p＜0.05)，关联条件下的连锁亦如此(p＜0.05)，XbaI标记与腰椎(L1-4)BMD值的家庭内关联存在边缘显著性结果(p＜0.054)。结论ER基因中的PvuII及XbaI分子标记与中国人群女性髋部骨密度连锁。本专利技术的意义本专利技术第一次在中国人群中对雌激素受体α基因与骨表型的关系应用传递不平衡检测方法进行研究，并得到阳性结果。本研究利于从分子水平对骨质疏松症进行是期诊筛查髀同疏松症的高危人群和及早进行预防和治疗具有重要意义；通过对遗传基因与骨质疏松症发病关系的研究，使我们能在分子水平上观察药物的特定治疗效果成为可能，既可达到节约药源和医疗费用，又可有针对地改善骨量和预防骨折。权利要求1.ERα基因中与中国女性髋部骨密度连锁的PvuII及XbaI分子标记，这两个分子标记与髋部骨密度的连锁是在中国人群核心家系中运用传递不平衡检测法锁定的(1)征集中国人群400个以上核心家庭，1200个以上个体人作为研究样本，核心家庭由父母双亲和至少一个年龄在20-45岁的健康女儿组成(2)应用QDR2000+双能X射线骨密度仪测量了L1-4腰椎、股骨颈、大转子、转子间、ward三角区、整个髋部的骨密度、骨矿含量和骨大小值(3)通过问卷调查法获得采样本的年龄、身高、体重、性别、家庭史、服药史、女性月经史、吸烟史、饮酒史、饮食及生活习惯等信息(4)应用聚合酶链式反应——限制性片段长度多态性分析方法对样本进行ERα基因PvuII和XbaI分子标记基因分型(5)应用QTDT程序进行关联和连锁检测，获得ERα基因中PvuII及XbaI分子标记与股骨颈、骨转子、股骨转子间及整个髋部骨密度连锁。全文摘要本专利技术公开了ERα基因中与中国人群女性髋部骨密度连锁的PvuII及XbaI分子标记，对于在中国人群中早期诊断、治疗、预防骨质疏松症有重要意义。它们是通过选取400个以上中国人群核心家庭、1200个以上男、女个体人实例，运用传递不平衡检测法从骨密度候选基因ERα中锁定得到的。本专利技术的意义在于本研究的成果可应用分子标记从人的早年时期来诊断哪些人可能患有骨质疏松症以便对其采取早期预防及治疗；本发现有助于更深一步了解骨质疏松症的发病机制，对治疗和预防骨质疏松症，降低由骨质疏松引起的骨折风险，提高中国女性健康和身体素质具有重要的实际意义。文档编号G01N33/50GK1441063SQ03118219公开日2003年9月10日 申请日期2003年3月28日 优先权日2003年3月28日专利技术者邓红文, 秦跃娟, 周琦, 李淼新, 莫小阳 申请人:邓红文本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＥＲα基因中与中国女性髋部骨密度连锁的ＰｖｕⅡ及ＸｂａⅠ分子标记，这两个分子标记与髋部骨密度的连锁是在中国人群核心家系中运用传递不平衡检测法锁定的：（１）征集中国人群４００个以上核心家庭，１２００个以上个体人作为研究样本，核心家庭由父母 双亲和至少一个年龄在２０－４５岁的健康女儿组成（２）应用ＱＤＲ２０００＋双能Ｘ射线骨密度仪测量了Ｌ↓［１－４］腰椎、股骨颈、大转子、转子间、ｗａｒｄ三角区、整个髋部的骨密度、骨矿含量和骨大小值（３）通过问卷调查法获得采样本的年龄、身 高、体重、性别、家庭史、服药史、女性月经史、吸烟史、饮酒史、饮食及生活习惯等信息（４）应用聚合酶链式反应－－限制性片段长度多态性分析方法对样本进行ＥＲα基因ＰｖｕⅡ和ＸｂａⅠ分子标记基因分型（５）应用ＱＴＤＴ程序进行关联和连锁检测， 获得ＥＲα基因中ＰｖｕⅡ及ＸｂａⅠ分子标记与股骨颈、骨转子、股骨转子间及整个髋部骨密度连锁。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓红文，秦跃娟，周琦，李淼新，莫小阳，
申请(专利权)人：邓红文，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]