化学合成的SARS病毒S基因片段及其表达、应用制造技术

本发明专利技术化学合成的ＳＡＲＳ病毒Ｓ基因片段及其表达、应用涉及基因工程技术、疫苗和诊断试剂领域。本发明专利技术是通过计算机分析，筛选出ＳＡＲＳ病毒的Ｓ蛋白内的强抗原表位，第１６２个氨基酸至第４６０个氨基酸，共２９９个氨基酸，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成抗原表位的全新基因序列，利用基因工程技术，表达该基因片段、制备ＳＡＲＳ病毒Ｓ蛋白的强抗原表位片段。表达的ＳＡＲＳ病毒Ｓ蛋白的强抗原表位片段可用于疫苗、ＳＡＲＳ病毒抗体或抗原的检测及用于免疫制备抗ＳＡＲＳ病毒单抗和多抗等。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是化学合成的SARS病毒S蛋白的全新基因片段，利用基因工程技术，制备重组SARS病毒S蛋白。通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的SARS病毒的S蛋白片段，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达，表达的蛋白可用于疫苗及SARS病毒抗体或抗原的检测等，本专利技术涉及基因工程技术、疫苗和诊断试剂领域。SARS病毒是一种新型的冠状病毒，由于这种病毒以前未曾感染过人类，所以人群对该病毒普遍易感，SARS病毒是一种单股正链RNA病毒，目前对其全基因序列已经测定，Genebank内已公布了10个左右的全长病毒基因序列，为利用基因工程技术研究诊断试剂、疫苗及筛选抗病毒药物奠定了基础。SARS病毒用Vero-E6可以体外培养，所以利用培养的SARS病毒建立了检测SARS病毒抗体的免疫荧光方法和酶联免疫检测法，但是用培养的SARS病毒作抗原检测抗体，难以大量生产，亦会产生假阳性，研制特异的基因重组抗原是建立SARS病毒特异抗体检测试剂的发展方向。预防SARS感染的最理想途径是注射疫苗，但目前没有预防SARS的疫苗，国内外均在积极开展疫苗的研制，尤其对灭活疫苗的研究进展较快，基因工程疫苗是最终的发展方向。SARS病毒最外层的S蛋白，是介导病毒和宿主细胞结合的主要蛋白，封闭该蛋白的结合位点可阻止病毒感染细胞，所以SARS病毒的S蛋白是研制疫苗的首选蛋白。通过计算机分析，我们筛选出含强抗原表位的SARS病毒的S蛋白片段，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达，表达的蛋白可用于疫苗及SARS病毒抗体或抗原的检测等。
技术实现思路
本专利技术是化学合成的SARS病毒S蛋白的全新基因片段，利用基因工程技术，制备重组SARS病毒S蛋白片段。通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的SARS病毒的S蛋白片段，第162个氨基酸一第460个氨基酸，共299个氨基酸，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达该基因。表达的蛋白可用于疫苗、SARS病毒抗体或抗原的检测及用于免疫制备抗人巨细胞病毒单抗和多抗等。化学合成的SARS病毒S基因片段及其表达、应用是采取以下步骤实施的1.SARS病毒S蛋白抗原表位的筛选及其基因片段的化学合成利用ANTHEWIN等软件，通过计算机分析SARS病毒S蛋白的氨基酸序列，发现S蛋白的N端(第162氨基酸-第460氨基酸)含有较强的抗原决定簇。选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，并且在5’端增加了BamHI酶切位点(下画线部分)及两个保护碱基(GT)，在3’端增加了终止密码子(TAA)和EcoRI酶切位点(下画线部分)及两个保护碱基(AC)，使该基因片段易于克隆至质粒pET28a(+)内的BamHI和EcoRI酶切位点内。筛选的SARS病毒S蛋白内的抗原表位氨基酸序列(第162个aa-第460个aa)Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser Gly Asn Phe LysHis Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly Phe Leu Tyr Val Tyr Lys GlyTyr Gln Pro Ile Asp Val Val Arg Asp Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys ProIle Phe Lys Leu Pro Leu Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr AlaPhe Ser Pro Ala Gln Asp Thr Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Glv TyrLeu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp AlaVal Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys Ser Val Lys Ser Phe GluIle Asp Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp ValVal Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala ThrLys Phe Pro Ser Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala AspTyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val SerAla Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val ValLys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Val Ile Ala Asp TyrAsn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg AsnIle Asp Ala Thr Ser Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His GlyLys Leu Arg Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe化学合成的含SARS病毒S蛋白抗原表位基因的DNA序列(916bp)GTGGATCCGAA TAC ATC TCT GAC GCA TTC TCT CTG GAC GTT TCC GAA AAG TCT GGT AACTTC AAA CAC CTG CGC GAG TTC GTG TTT AAA AAC AAA GAC GGT TTC CTG TAC GTT TACAAG GGC TAC CAG CCG ATC GAC GTA GTT CGT GAC CTG CCG TCT GGT TTT AAC ACT CTGAAA CCG ATC TTC AAG CTG CCG CTG GGT ATT AAC ATC ACT AAC TTC CGC GCT ATC CTGACT GCT TTC TCT CCG GCT CAG GAC ACT TGG GGC ACT TCT GCT GCA GCC TAC TTC GTTGGC TAC CTG AAG CCA ACT ACC TTT ATG CTG AAG TAC GAC GAA AAC GGT ACT ATC ACTGAT GCT GTT GAC TGC TCT CAG AAC CCA CTG GCT GAA CTG AAA TGC TCT GTT AAG AGCTTT GAG ATC GAC AAA GGT A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化学合成的ＳＡＲＳ病毒Ｓ蛋白的基因片段，该基因片段编码含强抗原表位的ＳＡＲＳ病毒的Ｓ蛋白片段，第１６２个氨基酸－第４６０个氨基酸，共２９９个氨基酸，其ＤＮＡ序列如下：ＧＡＡ ＴＡＣ ＡＴＣ ＴＣＴ ＧＡＣ ＧＣＡ ＴＴＣ ＴＣＴ Ｃ ＴＧ ＧＡＣ ＧＴＴ ＴＣＣ ＧＡＡ ＡＡＧ ＴＣＴ ＧＧＴ ＡＡＣ ＴＴＣＡＡＡ ＣＡＣ ＣＴＧ ＣＧＣ ＧＡＧ ＴＴＣ ＧＴＧ ＴＴＴ ＡＡＡ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＡＣ ＧＧＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＡＣ ＧＴＴ ＴＡＣＡＡＧ ＧＧＣ ＴＡＣ ＣＡＧ ＣＣＧ ＡＴＣ ＧＡＣ ＧＴＡ ＧＴＴ ＣＧＴ ＧＡＣ ＣＴＧ ＣＣＧ ＴＣＴ ＧＧＴ ＴＴＴ ＡＡＣ ＡＣＴＣＴＧ ＡＡＡ ＣＣＧ ＡＴＣ ＴＴＣ ＡＡＧ ＣＴＧ ＣＣＧ ＣＴＧ ＧＧＴ ＡＴＴ ＡＡＣ ＡＴＣ ＡＣ Ｔ ＡＡＣ ＴＴＣ ＣＧＣ ＧＣＴＡＴＣ ＣＴＧ ＡＣＴ ＧＣＴ ＴＴＣ ＴＣＴ ＣＣＧ ＧＣＴ ＣＡＧ ＧＡＣ ＡＣＴ ＴＧＧ ＧＧＣ ＡＣＴ ＴＣＴ ＧＣＴ ＧＣＡ ＧＣＣＴＡＣ ＴＴＣ ＧＴＴ ＧＧＣ ＴＡＣ ＣＴＧ ＡＡＧ ＣＣＡ ＡＣＴ ＡＣＣ ＴＴＴ ＡＴＧ ＣＴＧ ＡＡＧ ＴＡＣ ＧＡＣ ＧＡＡ ＡＡＣＧＧＴ ＡＣＴ ＡＴＣ ＡＣＴ ＧＡＴ ＧＣＴ ＧＴＴ ＧＡＣ ＴＧＣ ＴＣＴ ＣＡＧ ＡＡＣ ＣＣＡ ＣＴＧ ＧＣＴ ＧＡＡ ＣＴＧ ＡＡＡＴＧ Ｃ ＴＣＴ ＧＴＴ ＡＡＧ ＡＧＣ ＴＴＴ ＧＡＧ ＡＴＣ ＧＡＣ ＡＡＡ ＧＧＴ ＡＴＴ ＴＡＣ ＣＡＧ ＡＣＣ ＴＣＴ ＡＡＣ ＴＴＣＣＧＴ ＧＴＴ ＧＴＴ ＣＣＧ ＴＣＴ ＧＧＴ ＧＡＣ ＧＴＴ ＧＴＧ ＣＧＴ ＴＴＣ ＣＣＴ Ａ ＡＣ ＡＴＣ ＡＣＴ ＡＡＣ ＣＴＧ ＴＧＣＣＣＧ ＴＴＴ ＧＧＴ ＧＡＡ ＧＴＴ ＴＴＣ ＡＡＣ ＧＣＴ ＡＣＴ ＡＡＡ ＴＴＣ ＣＣＴ ＴＣＴ ＧＴＣ ＴＡＣ ＧＣＡ ＴＧＧ ＧＡＧＣＧＴ ＡＡＡ ＡＡＡ ＡＴＴ ＴＣＴ ＡＡＣ ＴＧＣ ＧＴＴ ＧＣＴ ＧＡＴ ＴＡＣ ＴＣＴ ＧＴＧ ＣＴＧ ＴＡＣ ＡＡＣ ＴＣＴ ＡＣＣＴＴＴ ＴＴＣ ＴＣＴ ＡＣＣ ＴＴＣ ＡＡＧ ＴＧＣ ＴＡＣ ＧＧＣ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＣＴ ＡＣＴ ＡＡＧ ＣＴＧ ＡＡＣ ＧＡＣ ＣＴ ＧＴＧＣ ＴＴＣ ＴＣＣ ＡＡＣ ＧＴＴ ＴＡＣ ＧＣＡ ＧＡＴ ＴＣＴ ＴＴＣ ＧＴＡ ＧＴＴ ＡＡＧ ＧＧＴ ＧＡＴ ＧＡ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李越希，陶开华，
申请(专利权)人：李越希，陶开华，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]