角质形成细胞生长因子-2制造技术

本文公开了一种人体多肽、编码这种多肽的ＤＮＡ（ＲＮＡ）以及通过重组技术产生这种多肽的方法。本文也公开了使用这种多肽刺激上皮细胞生长的方法，该方法可用于刺激创伤愈合、减少瘢痕形成以及预防脱发。本发明专利技术也公开了抗这种多肽的拮抗剂以及使用它们作为治疗增殖疾病（如癌、牛皮癣、卡波济氏肉瘤、瘢痕瘤、视网膜病和ｒｅｓｔｃｎｏｓｉｓ）的治疗剂。本文还公开了检测ＫＧＦ－２编码序列中的突变和在来源于宿主的样品中的ＫＧＦ－２浓度的改变的诊断方法。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新鉴别的多核苷酸、由这种多核苷酸编码的多肽、这种多核苷酸和多肽的用途以及产生这种多核苷酸和多肽的方法。更具体地说，本专利技术的多肽是一种角质形成细胞生长因子，在下文有时作为“KGF-2”。本专利技术也涉及抑制这种多肽的作用。成纤维细胞生长因子家族是参与软组织生长和新生的生长因子的一个大家族。它目前包括几个成员，它们在蛋白质水平上有不同程度的同源性，一个例外的情况是看来似乎有类似的广阔的促有丝分裂谱，即它们促进中胚层和神经外胚层起源的各种细胞的增殖和/或促进血管形成。该家族的不同成员的表达方式十分不同，从发育的某些阶段的极其有限的表达至不同组织和器官中的相当普遍存在的表达。所有成员在胞外基质中看来似乎结合肝磷脂和肝素硫酸盐蛋白多糖和糖胺聚糖并强烈浓缩。KGF最初通过序列同源性或因子纯化和克隆鉴别为PGP家族的成员。角质形成细胞生长因子(KGF)作为培养的鼠角质形成细胞细胞系的促细胞分裂剂分离(Rubin，J.S.等，美国科学院学报，86802-806(1989))。不同于FGF家族的其它成员，它对间质衍生的细胞活性很小，但刺激上皮细胞的生长。角质形成细胞生长因子基因编码194个氨基酸的多肽(Finch，P.W.等，科学，245，752-755(1989))。N-末端的64个氨基酸是独特的，但是蛋白质的其余部分和bFGF有大约30％的同源性。KGF是FGF家族的最不同的成员。该分子有疏水信号序列并且高效分泌。翻译后的修饰包括信号序列的裂解和在一个位点上N-连接的葡基化，产生28kDa的蛋白质。角质形成细胞生长因子通过衍生自皮肤和胎儿肺脏的成纤维细胞产生(Rubin等，(1989))。发现角质形成细胞生长因子mRNA在成人肾、结肠和髂骨中但不在脑或肺脏中表达(Finch，P.W.，等，科学，245752-755(1989))。KGF显示在FGP蛋白质家族之内的保守区。KGF和FGP-2受体高亲和性结合。本专利技术的多肽被推定鉴别为FGF家族的成员，更具体地说，由于和FGP家族的其它成员的氨基酸序列同源，多肽被推定鉴别为KGF-2。按照本专利技术的一个方面提供了新的成熟多肽，这种多肽是KGF-2及其生物学活性的和诊断或治疗有用的片段、类似物和衍生物。本专利技术多肽是人体起源的。按照本专利技术的一个方面提供了分离的编码人KGF-2的分离的核苷酸分子，包括mRNA、DNAs、染色体DNA以及其反义类似物和其有生物学活性的和诊断或治疗有用的片段的。按照本专利技术的另一个方面提供了通过使用重组载体(如在KGF-2蛋白质、重组原核生物和/或包含人KGF-2核酸序列的真核宿主细胞的重组产生中作为试剂有用的克隆和表达载体)用重组技术产生这类多肽的方法。按照本专利技术的另一方面提供了使用这类多肽或编码这类多肽的多核苷酸以用于治疗目的方法，例如，为治疗创伤刺激表皮细胞的增殖，刺激毛囊产生，并治愈皮肤的创伤。按照本专利技术的另外的一个方面提供了抗这类多肽的抗体。按照本专利技术的另一方面提供了包含和人KGF-2序列特异性杂交的足够长度的核酸分子的核酸探针。按照本专利技术的另一个方面提供了抗这类多肽的拮抗剂，此类拮抗剂可用于抑制这类多肽的作用，例如，在创伤治愈过程中减少结疤、预防和/或治疗瘤增殖、糖尿病的视网膜病、风湿性关节炎和肿瘤生长。按照本专利技术的另一个方面提供了检测与KGF-2核酸序列突变或由这类序列编码的多肽的过量表达有关的疾病或疾病易感性的诊断测定方法。按照本专利技术的另一个方面提供了为与科学研究有关的体外目的将这类多肽或编码这类多肽的多核苷酸用于合成DNA或产生DNA载体的方法。由本文教导，本专利技术的这些和其它方面对本领域技术人员应该是明显的。下列附图是本专利技术的具体实施方案的说明，并不是限制权利要求所包括的本专利技术的范围。附图说明图1说明本专利技术的多肽的cDNA和相应的推断的氨基酸序列。初始的36个氨基酸残基代表推定的前导序列(画线部分)。使用了标准的氨基酸单字母缩写。试图确定多核苷酸序列时，测序不精确性是常见的问题。使用373自动DNA测序仪进行测序(Applied Biosystem公司)。预测测序精确性大于97％精确度。图2是本专利技术的多肽和其它成纤维细胞生长因子的氨基酸序列的比较的图解。按照本专利技术的一个方面提供了这种分离的核酸(多核苷酸)，该核酸编码具有图1的推定的氨基酸序列(SEQ ID No.2)的成熟多肽或由1994年12月16日保藏的ATCC 75977的克隆的cDNA编码的成熟多肽。编码本专利技术的多肽的多核苷酸可以从人前列腺和胎儿的肺脏中获得。编码多肽的cDNA片段首先从衍生自人正常前列腺的文库中分离出来。随后编码全长蛋白质的开放读框从随机致敏的(primed)人胎儿肺脏cDNA文库分离到。它与FGF家族在结构上相关。它包含编码268个氨基酸残基的的蛋白质的开放读框，在这些氨基酸残基中，前36个氨基酸残基是推定的前导序列以使成熟蛋白质包含172个氨基酸。蛋白质表现出和人角质形成细胞生长因子最高程度的同源性，在206个氨基酸的链上，45％相同，82％相似。同样重要的是，发现FGF家族保守的序列在本专利技术的蛋白质中是保守的。本专利技术的多核苷酸可以是RNA形式或DNA形式，其中的DNA包括cDNA、基因组DNA和合成的DNA。如果单链可以是编码链或非编码(反义)链，则DNA可以是双链或单链。编码成熟多肽的编码序列可以和图1中显示的编码序列(SEQ ID No.1)或保藏的克隆的编码序列相同，或可以是编码序列的不同的编码序列，此编码序列由于基因密码的冗余和简并，编码与图1(SEQ IDNo.1)的DNA或保藏的cDNA相同的成熟多肽。编码图1(SEQ ID No.2)的成熟多肽或编码由保藏的cDNA编码的成熟多肽的多核苷酸包括只编码成熟多肽的序列；编码成熟多肽的序列和附加的编码序列(如前导或分泌序列或前蛋白质序列)；成熟多肽的编码序列(和选择性的附加编码序列)和非编码序列(如成熟多肽的编码序列的内含子或非编码序列的5′和/或3′)。这样，术语“编码多肽的多核苷酸”包括仅包含编码多肽的序列的多核苷酸以及包含附加的编码和/或非编码序列的多核苷酸。本专利技术还涉及与本文以上所述的编码具有图1(SEQ ID No.2)推定的氨基酸序列的多肽或保藏的克隆的cDNA编码的多肽的片段、类似物和衍生物的多核苷酸的变体。多核苷酸的变体可以是多核苷酸的天然产生的等位变体或多核苷酸的非天然产生的变体。这样，本专利技术包括编码如图1(SEQ ID No.2)中显示的相同的成熟多肽或由保藏的克隆的cDNA编码的相同的成熟多肽的多核苷酸以及这类多核苷酸的变体，其变体编码图1(SEQ ID No.2)的多肽或由保藏的克隆的cDNA编码的多肽的片段、衍生物或类似物。这类核苷酸变体包括缺失变体、取代变体和添加或插入变体。如上文所述，所述多核苷酸可以有如图1(SEQ ID No.2)中显示的编码序列或保藏的克隆的编码序列的天然产生的等位变体的编码序列。如本领域所已知的，等位变体是可以具有一种或多种没有实质上改变编码的多肽的功能的核苷酸的取代、缺失或添加的多核苷酸序列的一种替代形式。本专利技术也包括多核苷酸，其中成熟多肽的编码序列可与这种多核苷酸序列融合到相同的阅读框架中，这种多核苷酸帮助本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选自由下列物质组成的组的分离的多核苷酸：（ａ）一种编码具有推定的ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２的氨基酸序列的多肽或所说多肽的片段、类似物或衍生物的多核苷酸；（ｂ）一种编码具有由包含在ＡＴＣＣ保藏号７５９７７中的ｃＤＮＡ编码之氨基酸序列的 多肽或所说多肽的片段、类似物或衍生物的多核苷酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：JR格胡伯，PJ迪龙，
申请(专利权)人：人类基因组科学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]