抗人血红蛋白检测试剂条及其含有的单克隆抗体制造技术

具有保藏号为ＣＧＭＣＣ　　０９７０的杂交瘤细胞株Ｂ９。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于法医学与免疫学检验
，可直接用于法医物证对人血的确证，更具体地，本专利技术涉及抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条，其含有的抗人血红蛋白单克隆抗体及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本专利技术也涉及检测试剂条的制备方法。
技术介绍
在公安法医工作中，案件物证的尽快检验和鉴定，对于案件的及时侦破、抓捕犯罪分子或释放犯罪嫌疑人具有决定性的作用。胶体金免疫层析检测试剂条出现前，同类免疫学检验技术采用免疫电泳、免疫扩散、酶联免疫吸附分析(即ELISA)等方法进行，这些方法或实验步骤相对较多、操作复杂、对检验人员的技术要求程度高，或检验所用时间较长，而且全都必需在室内进行。因此，建立一新方法对上述这些问题和缺点进行改进、加以克服是很有必要的。胶体金免疫层析检测试剂条的研制及使用使得案件物证在现场就能检验并做出鉴定、甚至可由此确定犯罪嫌疑人，因而能快速破案。但是目前国内外的有些检测人血红蛋白的胶体金免疫层析检测试剂条，由于抗人血红蛋白抗体特异性没有达到公安或司法的检验标准，时有出现检验错误的情况，如将动物的血鉴定成了人血。而众所周知，公安或司法的检验是不允许出现错检的，因为这关系着某个人的前途或命运。因此研制只对人血红蛋白起反应、完全符合法医学检验标准和要求的抗人血红蛋白单克隆抗体及试剂条，非常迫切。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高度灵敏、特异的抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条，本专利技术也提供了该试剂条的制备方法。本专利技术的另一目的是提供一种对人血红蛋白高度特异的抗人血红蛋白单克隆抗体。本专利技术也提供一种产生上述抗人血红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。为达上述目的，本专利技术的技术方案如下本专利技术使用的杂交瘤细胞株B9已经于2003年7月1日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC 0970。本专利技术提供了抗人血红蛋白的单克隆抗体，可以用常规技术从具有保藏号为CGMCC 0970的杂交瘤细胞株B9产生。本专利技术提供了抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条，该试剂条包含本专利技术所述CGMCC 0970杂交瘤细胞株B9产生的抗人血红蛋白单克隆抗体。本专利技术提供了抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条，该试剂条依次包括加样区，其包括空白惰性材料区及包含包附胶体金的本专利技术所述抗人血红蛋白单克隆抗体区；反应区，其包含检测线和质控线；吸附区；本专利技术检测试剂条，其特征是加样区的空白惰性材料区一端与包含包附胶体金的本专利技术所述抗人血红蛋白单克隆抗体区一端有部分重叠。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是加样区的一端与反应区的一端有部分重叠，反应区的另一端与吸附区的一端有部分重叠。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是加样区、反应区和吸附区固定在单面胶塑料垫板层上。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是反应区的一端部分与加样区上粘有单面胶带层，反应区的另一端部分与吸附区上粘有单面胶带层，其中反应区的一端部分与加样区上粘有的单面胶带层上标有检测时液面可达最大高度的MAX线。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是反应区的一端部分与加样区上粘有的单面胶带层可以顺延回折包覆加样区的一端，并粘附固定在单面胶塑料垫板层的背面，反应区的另一端部分与吸附区上粘有的单面胶带层可以顺延回折包覆吸附区另一端，并粘附固定在单面胶塑料垫板层的背面。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是加样区包附胶体金的本专利技术所述的抗人血红蛋白单克隆抗体加载在玻璃纤维中，加样区的空白惰性材料区是玻璃纤维。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是检测线和质控线加载在硝酸纤维素膜上。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是反应区的检测线是另一抗人血红蛋白多或单克隆抗体，其与包附胶体金的本专利技术所述抗人血红蛋白的抗体针对的是相同的抗原，但其抗原结合位点或称抗原决定簇不相同或相同。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是反应区的检测线喷涂的是含有0.2-1％蔗糖的兔或羊抗人血红蛋白多克隆抗体。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是反应区的质控线是与包附胶体金的本专利技术所述的抗人血红蛋白单克隆抗体起特异反应的物质。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是反应区的质控线喷涂的是含有0.2-1％蔗糖的羊抗鼠IgG抗体。本专利技术所述的检测试剂条，其特征是吸附区是滤纸，本专利技术所用的是特定规格的厚滤纸。本专利技术的制备抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条的方法，包括以下步骤1)人血红蛋白单克隆抗体的制备将保藏号为CGMCC 0970的杂交瘤细胞株B9按常规方法复苏并培养，注入小鼠腹腔内，处死小鼠，收集腹水；2)分离纯化本专利技术抗人血红蛋白单克隆抗体以常规正辛酸加硫酸铵法或者亲和层析法等进行；3)胶体金的制备将氯金酸(HAuCl4)以还原剂加热制成胶体金溶液；4)胶体金—抗人血红蛋白单克隆抗体结合物制备将步骤2)中制得的单克隆抗体搅拌下加入胶体金溶液中，使抗体包附在胶体金颗粒表面上；5)试剂条原材料的预处理对与检测过程直接相关的材料玻璃纤维和硝酸纤维素膜进行预处理；6)胶体金—抗人血红蛋白单克隆抗体结合物处理及载入玻璃纤维用稀释液稀释步骤4)制得的胶体金—抗人血红蛋白单克隆抗体结合物，然后用稀释后的该结合物饱和浸泡玻璃纤维，然后干燥；7)在处理好的反应区硝酸纤维素膜上喷涂检测线和质控线；8)组装试剂条在单面胶塑料板层上粘贴固定有加样区的步骤5)处理过的空白玻璃纤维区及步骤6)制得的胶体金—抗人血红蛋白单克隆抗体结合物饱和的玻璃纤维，反应区的硝酸纤维素膜及吸收区的滤纸；加样区的空白玻璃纤维区一端与步骤6)制得的胶体金—抗人血红蛋白单克隆抗体结的玻璃纤维区一端有部分重叠；加样区的玻璃纤维一端与反应区的硝酸纤维素膜的一端有部分重叠，反应区的硝酸纤维素膜的另一端与吸收区滤纸的一端有部分重叠；其中反应区的硝酸纤维素膜的一端部分与加样区的玻璃纤维上粘有单面胶带层，反应区的硝酸纤维素膜的另一端部分与滤纸上粘有单面胶带层；9)8)所制成的母版试剂条裁剪成成品试剂条；10)测试剂条的性能，确定其是否合格。本专利技术所述的制备抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条的方法的一个特征是其中步骤4)搅拌后，以10％NaCI鉴定其稳定情况，加BSA和PEG溶液，12,000r/min离心50分钟，沉淀以保护液1.0mmol/L四硼酸钠-HCI，0.1％BSA，0.01％NaN3，pH7.4重悬，置4℃保存备用。本专利技术所述的制备抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条的方法的一个特征是其中步骤5)是在4℃，用含0.5％吐温80的50mM Tris-HCI，pH8.0缓冲液浸泡玻璃纤维过夜，以无菌超纯水漂洗去盐，无菌高效过滤器下吹干；以含0.05％吐温20的20mM磷酸盐生理盐水缓冲液(pH7.4)浸泡硝酸纤维素膜1至2小时，再以无菌超纯水漂洗去盐，亦现用现泡并吹干，并且所有缓冲液均以0.45μm滤器过滤除菌。本专利技术所述的制备抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条的方法的一个特征是其中步骤6)中的稀释液是0.2～1.0％牛IgG、0.1～0.5％PVP40或30、0.05～0.1％PEG20，000、0.5～2.0％BSA、0.02％NaN3的生理PBS缓冲液(pH7.4)。本专利技术所述的制备抗人血红蛋白胶体金免疫层析检测试剂条的方法，其特征是反应区的检测线喷涂的是含有0.2-1％蔗糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李兆隆，王俭，张英兰，徐秀兰，王香菊，常彩琴，严红，蒯应松，陈艳，
申请(专利权)人：公安部第二研究所，
类型：发明
国别省市：